Methodenartikel

Geïntegreerde UHPLC-MS/MS en HRMS-strategie voor het screenen van potentieel hepatoxische furanhoudende verbindingen in Dioscorea bulbifera L.

DOI:

10.3791/70865

⸱

19 mei 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Medicine and Health Management, Guizhou Medical University, 4Guizhou Provincial Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM, Guizhou Medical University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie ontwikkelde een geïntegreerde strategie waarbij UHPLC–MS/MS en HRMS werden gecombineerd om te screenen op mogelijk hepatotoxische furanhoudende verbindingen in Dioscorea bulbifera L.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dioscorea bulbifera L. (DBL), een traditioneel kruidenmedicijn dat wordt gebruikt voor de behandeling van schildklieraandoeningen en tumoren, heeft aanzienlijke veiligheidszorgen gewekt vanwege de mogelijke hepatotoxische effecten. Eerder onderzoek suggereert dat deze leverbeschadiging mogelijk geassocieerd is met de metabole activatie van furanhoudende verbindingen (FCC's) die aanwezig zijn in DBL. Hier karakteriseerden we systematisch FCC's en hun reactieve metabolieten in DBL-extract door middel van een geïntegreerde analytische benadering die ultra-high performance vloeistofchromatografie combineert met tandem massaspectrometrie (UHPLC-MS/MS) en ultra-high performance vloeistofchromatografie gekoppeld aan tandem high-resolution mass spectrometry (UHPLC-HRMS). Met behulp van zowel gerichte als niet-gerichte massaspectrometrische analyses identificeerden we in totaal 849 bestanddelen in het waterige extract van DBL, waaronder 10 furanoditerpenoïden en 17 extra FCC's. Om de metabole activatieroutes te verduidelijken, gebruikten we glutathion (GSH) en 4-bromobenzylamine (BBA) als dubbele vangstoffen binnen een muizenlevermicrosomaal (MLM) incubatiesysteem. Via P450-gemedieerd metabolisme werden zeven overeenkomstige adducten, afgeleid van diosbulbine B (DSB), C (DSC), D (DSD), E (DSE), L (DSL), N (DSN) en 2-pentylfuran, succesvol gevangen en gekarakteriseerd. Deze studie stelt een gevoelige en specifieke benadering vast voor de uitgebreide profilering van potentieel hepatoxische furanverbindingen in DBL, en biedt waardevolle inzichten in de vorming van reactieve metabolieten en toxiciteitsmechanismen gerelateerd aan furanhoudende kruidengeneeskunde.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Veiligheidszorgen met betrekking tot traditionele Chinese geneeskunde (TCM), met name door medicijnen veroorzaakte leverschade (DILI), belemmeren hun brede klinische bruikbaarheid en modernisering 1,2,3. Groeiend bewijs suggereert dat de meeste bestanddelen van TCM niet intrinsiek giftig zijn; in plaats daarvan is hun hepatotoxiciteit het gevolg van metabole activatie in vivo 1,4,5. Furanhoudende verbindingen (FCC's) zijn goed erkend als prominente hepatototoxice voorlopers, die P450-gemedieerde metabole activatie ondergaan om sterk reactieve elektrofiele intermediairen te produceren, specifiek cis-enedialen, die cruciaal zijn voor het initiëren van levertoxiciteit. Deze elektrofiele metabolieten vormen covalente adducten met cystoïenthiolen en aminogroepen van essentiële eiwitten, waardoor de progressie van toxische effectenwordt bevorderd 6,7,8.

In de TCM wordt Dioscorea bulbifera L. (DBL) veelvuldig gebruikt voor de behandeling van schildklieraandoeningen, tumoren en huidaandoeningen 9,10. In totaal zijn 152 chemische bestanddelen geïsoleerd en gekarakteriseerd uit DBL, waaronder 41 furanoditerpenoïden(11). Onder deze factoren is aangetoond dat diosbulbine B (DSB), een belangrijk bioactief bestanddeel, leverschade induceert in muismodellen, een effect dat nauw verbonden is met de vorming van de door DSB afgeleide cis-endiaal (DDE)12,13. Gedreven door vooruitgang in analytische instrumentatie is massaspectrometrie een belangrijk hulpmiddel geworden voor het analyseren van complexe chemische componenten en metabolieten van TCM14,15. Conventioneel worden cis-enedialen geproduceerd door DSB-metabolisme gedetecteerd door elektrofiele soorten te vangen met N-acetyl-L-lysine in combinatie met glutathion of N-acetyl-L-cysteïne, gevolgd door LC-MS/MS-analyse van de resulterende chemisch stabiele pyrrolderivaten16,17. Voortbouwend op deze aanpak hebben we eerder een verbeterde strategie ontwikkeld waarbij we gelijktijdig vasthouden van furan-afgeleide metabole intermediairen met GSH en BBA, gecombineerd met LC-MS/MS-analyse met een neutrale verliesscan van 129 Da en een precursorion-scan van m/z 272 voor GSH-adducten, samen met een 1:1 precursorionen-scan van m/z 169 en 171 afkomstig van de BBA-groep voor pyrroldetectie (Figuur 1)18, 19. Hoewel effectief voor bekende furanoïden, vertoont deze aanpak aanzienlijke beperkingen wanneer toegepast op complexe mengsels, met name bij FCC's zonder voorafgaande structurele informatie. Daarom blijft er een dringende behoefte aan een uitgebreide analytische strategie die in staat is om een grondige chemische karakterisering van complexe TCM-matrices mogelijk te maken, terwijl tegelijkertijd efficiënte screening van hepatotoxice voorlopers wordt ondersteund.

Hier rapporteren we een geïntegreerde strategie voor de systematische karakterisering van potentieel hepatotoxische FCC's in DBL (Figuur 2). De strategie omvat drie belangrijke stappen: (i) uitgebreide chemische profilering van het waterige extract van DBL met behulp van breed gerichte metabolomics (WTM) gebaseerd op UHPLC–MS/MS; (ii) vangen van reactieve tussenproducten die worden gegenereerd uit FCC's met GSH en BBA; en (iii) detectie en structurele opheldering van GSH/BBA-adducten die gevormd zijn via metabole activatie van potentieel toxische bestanddelen met HPLC–MS/MS en UHPLC–MS/MS. Deze geïntegreerde aanpak maakt ondubbelzinnige identificatie mogelijk van belangrijke toxische precursoren die verantwoordelijk zijn voor door DBL veroorzaakte hepatotoxiciteit uit complexe TCM-matrices en biedt een zeer gevoelig en specifiek kader voor de veiligheidsbeoordeling van TCM.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OPMERKING: De reagentia en de apparatuur die in deze studie zijn gebruikt, staan vermeld in de Materiaaltabel.

1. Voorbereiding van de DBL-testoplossing

  1. Verzamel en authenticeer drie batches van de knollen van Dioscorea bulbifera L. Volgens de Nationale Specificatie voor de Verwerking van TCM verwijder je vezelige wortels uit de knollen, was je ze om vuil te verwijderen, snijd je ze in 1 cm dikke cirkelvormige plakken terwijl ze vers zijn, droog je ze in een luchtoven op 60 °C, haal ze eruit en koel ze af totkamertemperatuur 20 graden graden temperatuur.
  2. Weeg 200 g DBL per batch en maal deze tot een grof poeder (deeltjesgrootte 250-850 μm) met een hogesnelheidsvermaler.
  3. Week 20 g ruwe poeder in 200 ml gedeïoniseerd water (1:10, met en op het toilet) gedurende 30 minuten. Tegelijkertijd wordt een mengsel van de drie partijen grof poeder geproduceerd in stap 1.2 (gemengd in een verhouding van 1:1:1, w/w) verwerkt.
  4. Haal het doorweekte materiaal eruit door 60 minuten te verhitten onder reflux. Filter het extract door gaas of een zeef om onoplosbare residuen te verwijderen. Voeg 200 ml gedeïoniseerd water toe aan het resterende residu en herhaal de refluxextractie 2 keer, elk gedurende 60 minuten. Combineer alle drie de filtraten en concentreer het samengevoegde extract door het te koken tot een eindvolume van 100 mL.
  5. Breng het geconcentreerde extract over in een vacuüm vriesdroger en lyofilie om poeder te verkrijgen.
  6. Weeg nauwkeurig 18 mg van elke batch extractpoeder. Los elk op in 1,5 mL 50% acetonitril en laat het mengsel 30 seconden vortexen om homogeniteit te garanderen.
  7. Centrifugeer de oplossing op 13.800 x g gedurende 10 minuten bij 4°C en verzamel het supernatant als MLM-incubatievoorraadoplossing.
  8. Pipetteer 20 μL van de standaardoplossing, verdun het tot 1:50 met 50% acetonitril, en laat het vortexen 30 seconden doen. Vervolgens filtert men de oplossing door een microporeus membraan van 0,22 μm om de monsteroplossing klaar te krijgen voor massaspectrometrische analyse.

2. Chemische karakterisering van DBL

  1. Chromatografische omstandigheden
    1. Gebruik een C18-kolom (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) en stel de kolomoventemperatuur in op 40 °C. Bereid mobiele fase A voor als 0,1% (v/v) mierenzuur in water en mobiele fase B als acetonitril.
    2. Programmeer de gradiënt-elutie als volgt: 0–10 min, 2%–50% B; 10–11 min, 50%–95% B; en 11–13 min, 95% B. Stel de debiet in op 0,4 mL/min en injecteer 2 μL van het monster.
  2. Voer massaspectrometrische analyse uit met de volgende parameters: Ionenbron: IonDrive Turbo V elektrosprayionisatie (ESI); Acquisitiemodus: Meervoudige reactiemonitoring (MRM) met gelijktijdige opname in positieve en negatieve ionenmodi; Ionensproeispanning: +5,5 kV (positief) / −4,5 kV (negatief); Gordijngas: 35 psi; Brontemperatuur: 400 °C; Ionenbrongas 1: 60 psi; Ionenbrongas 2: 60 psi; Declusteringspotentiaal (DP): ±100 V.
  3. Gegevensverwerking
    1. Verkrijg en verwerk MRM-gegevens met SCIEX Analyst Software (v1.6.3). Converteer de ruwe databestanden (.wiff) naar het TXT-formaat met MSConvert. Annoteer de gedetecteerde verbindingen door de propriëtaire BiotreeDB (V2.1) MS-bibliotheek te raadplegen. De annotatie was gebaseerd op het afstemmen van retentietijden (RT), massa-ladingsverhoudingen (m/z) en fragmentatiepatronen met authentieke standaarden.

3. Karakterisering van GSH/BBA-conjugaten die worden gegenereerd in MLM-incubaties

  1. MLM-incubatie
    1. Ontdooi langzaam de microsomale suspensie van de muislever op ijs. Bereid op ijs het incubatiemengsel voor in een 2 mL microcentrifugebuis door achtereenvolgens de onderstaande componenten toe te voegen. Voeg als laatste het NADPH-regenererende systeem toe. Voor de controlegroep vervang je het NADPH-regenererende systeem door een gelijk volume ijskoude PBS. Vortex even om te mengen.
      1. Bereid een incubatiemengsel voor bestaande uit de volgende componenten: Muizenlevermicrosomale suspensie (MLM, 4 mg/mL eiwit): 125 μL; magnesiumchloride (MgCl₂) oplossing (32 mM): 10 μL; DBE (12 mg/mL) of DSB standaardoplossing (35 mM): 10 μL; glutathion (GSH) oplossing (50 mM): 100 μL; BBA-oplossing (250 mM): 10 μL; PBS-buffer (pH 7,4, met 1,0 mol/L EDTA en 0,1 mol/L K2HPO4): 145 μL; NADPH-regenererende systeemoplossing (5,0 mM): 100 μL.
    2. Verwijder direct na afloop van de incubatie alle buizen uit de broedmachine. Beëindig de enzymatische reactie door 1 mL ijskoude acetonitril (-20 °C) aan elke buis toe te voegen.
    3. Vortex 3 minuten om eiwitten te laten neerslaan. Centrifugeer op 13.800 x g gedurende 10 minuten bij 4 °C.
    4. Verzamel het supernatant, filter door een membraan van 0,22 μm en breng het filtraat over in een autosampler-flesje.
  2. Voorlopige screening van MLM-incubatie van DBL-extracten door HPLC-MS/MS
    1. Chromatografische omstandigheden
      1. Gebruik een C18-kolom (150 mm x 4,6 mm, 3 μm) en stel de kolomtemperatuur in op 25 °C. Bereid mobiele fase A voor als 0,1% (v/v) mierenzuur in water en mobiele fase B als acetonitril.
      2. Volg het volgende verhaal: 0–2 min, 10% B; 2–15 minuten, lineaire toename van 10% naar 90% B. Stel het debiet in op 0,8 mL/min en injecteer 5 μL van het voorbereide monster.
    2. Massaspectrometrische omstandigheden. Stel het volledige scanbereik in op m/z 500–1000. Precursorion (PI) scans bij m/z 169 en 171, en een neutral loss (NL) scan van 129 Da in positieve ionenmodus, en een PI-scan bij m/z 272 in negatieve ionenmodus. Stel de belangrijkste parameters als volgt in: ionenspuitspanning (IS), +5.500 V (positief) / −4.500 V (negatief); declusteringspotentiaal (DP), ±70 V; ingangspotentiaal (EP), ±10 V; botsingsenergie (CE), +35 V (positief) / −40 V (negatief); botsingscel-uitgangspotentiaal (CXP), ±10 V; ionenbrongas 1 en 2 (GS1/GS2), elk 50 psi; gordijngas (CUR), 40 psi; en brontemperatuur (TEM), 650 °C.
    3. Verkrijg en verwerk alle massaspectrometrische gegevens met SCIEX Analyst Software (v1.6.3).
  3. Identificatie van pyrrolderivaten en FCC's door UHPLC-HRMS
    1. Chromatografische omstandigheden
      1. Gebruik een C18-kolom (2,1 mm x 100 mm, 1,9 μm) en stel de kolomoven in op 30 °C. Bereid mobiele fase A voor als 0,1% (v/v) mierenzuur in water en mobiele fase B als acetonitril.
      2. Programmeer de gradiënt als volgt: 0-20 min, 5%-95% B; 20-21 min, 95% B. Stel de debiet in op 0,3 mL/min en injecteer 2 μL van het monster.
    2. Voer massaspectrometrische analyse uit met de volgende parameters: Ionenbron: ESI; ionensproeispanning: +3,5 KV (positieve ionen)/-2,5 kV (negatieve ionen); Capillaire temperatuur: 320 °C; Temperatuur van de probeverwarming: 350 °C; Schedegas: 10 arb; maximale sproeistroom: 100 μA; RF-niveau S-lens: 50%; botsingsenergie: 35 V (positieve ionen) en 40 V (negatieve ionen); Scanbereik: 100-1000 m/Z.
    3. Datavoorverwerking
      1. Op basis van de geïdentificeerde FCC's uit DBL en het vangmechanisme (Figuur 1), trek de voorspelde GSH/BBA-conjugaten met behulp van ChemBioDraw Ultra 14.0 (Aanvullende Figuur 1).
      2. Importeer de verkregen HRMS-ruwbestanden (.raw) in de Qual Browser-module van Xcalibur (V4.1). Maak een identificatieworkflow in de software om te screenen op GSH/BBA-conjugaaten.
      3. Vergelijk de experimentele MS1 - en MS2-spectra met de voorspelde structuren van GSH/BBA-conjugaten afgeleid van FCC's (voorspeld met ChemBioDraw Ultra 14.0) op basis van de bekende adductiemechanismen (Figuur 1 en Aanvullende Figuur 1). Gebruik een minimale piekintensiteitsdrempel van 1 x 105 en een massanauwkeurigheidstolerantie van ± 10 ppm voor alle gemonitorde ionen. Bevestig conjugaten op basis van het karakteristieke broomisotooppatroon (ongeveer 1:1) dat is waargenomen in zowel MS1 als MS2 spectra, inclusief diagnostische ionen op m/z 169 en 171.
      4. Bepaal het molecuulgewicht van de ouder-FCC's door de massa van de GSH/BBA-tag af te trekken van de waargenomen moleculaire ionen. Gebruik 472/474 Da (C17H21O5N4BrS) voor de aftrekking.
      5. Karakteriseer de moeder-FCC's in DBL met UHPLC–HRMS op basis van de hierboven verkregen resultaten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geïdentificeerde FCC's in DBL
Om het chemische profiel van de DBL te karakteriseren, werd een combinatie van triple quadrupole-gebaseerde WTM- en HRMS-profilering gebruikt. Deze dubbele benadering maakte de uitgebreide analyse van geëxtraheerde ionenparen mogelijk, wat zeer informatieve geëtraheerde ionchromatogrammen (EICs, Figuur 3A) en totale ionchromatogrammen (TICs, Figuur 3B) opleverde. Onder de geoptim...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eerdere onderzoeken naar de hepatotoxiciteit van DBL richtten zich voornamelijk op de metabole intermediairen van individuele FCC's met behulp van gerichte vangststrategieën 9,22. Hoewel deze benaderingen waardevolle mechanistische inzichten bieden, wordt hun effectiviteit in complexe kruidenmatrices vaak beperkt door de slechte detecteerbaarheid van biogeactiveerde intermediairen met lage abundantie. In deze studie hebben we een...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door de Nationale Stichting voor Natuurwetenschappen van China (nr. 82360759), de Natuurwetenschappelijke Stichting van de provincie Guizhou (nr. ZK [2024]406, ZK [2024] 397, Postdoctoraal Station [2021]007, BSH [2024]005), en Guizhou University of Traditional Chinese Medicine TD Hopes [2023]005.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
4-BromobenzylamineJiuding Chemical (Shanghai) Technology Co., LtdX114214A
AcetonitrileSigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd1000294000
CentrifugeWuxi BaiTaKe Biotechnology Co., LtdCR3180
Chromatographic sample bottlesZhejiang ALWSCI Technology Co., LtdC0000008
diosbulbin BChengdu PufeiDe Biotech Co., Ltd18022603
Dioscorea bulbifera L.-DBL-1; DBL-2; DBL-3De plantmaterialen werden geauthenticeerd door Prof. Weike Jiang (Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang, China), met voucherexemplaren die zijn gedeponeerd bij het Key Laboratory of Basic Pharmacology van de provincie Guizhou.
Electronic BalanceShanghai Anting Electronic Instrument FactoryFA1004B
Formic acidThermo Fisher Scientific Co., Ltd195715
GlutathioneSigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., LtdSLBX5462
High speed  crusherYongkang Biao Hardware Products Co., LtdXC-2000Y
Kunming mice Liver Microsomes (male)Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd.MB12496-1
Magnesium ChlorideBeijing Solarbio Science & Technology Co., LtdM8161
MethanolSigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd646377
millipore filterTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., LtdNylon66
NADPH Na4Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd102X022
OvenTianjin Laboratorial Instrument & Equipment Co., LtdGFL125
Phosphate-Buffered SalineBeyotime Biotechnology  Co., LtdC0221B
Thermostatic water bath oscillatorShanghai Zijia Instrument Co., LtdTHZ-82A
Ultra-freezerThermo Fisher Scientific Co., LtdTDE60086FV-ULTS
Ultrasonic CleanerShanghai Zijia Instrument Co., LtdL10-250A
Vortex MixerJiangsu Haimen Medical Instrument FactoryVM-D

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ma, Z., Shi, Z., Xiao, X., Wang, J. New insights into herb-induced liver injury. Antioxid Redox Signal. 38 (16-18), 1138-1149 (2023).
  2. Yang, Y., et al. A review of herb-induced liver injury in mainland China. Front Pharmacol. 13, 813073(2022).
  3. Shen, T., et al. Incidence and etiology of drug-induced liver injury in mainland China. Gastroenterology. 156 (8), 2230-2241 (2019).
  4. Zhou, Y., et al. Mechanism of drug-induced liver injury and hepatoprotective effects of natural drugs. Chin Med. 16 (1), 135(2021).
  5. Wang, Y., et al. Metabolic activation of toxic natural products from herbal and dietary supplements leading to toxicities. Front Pharmacol. 12, 758468(2021).
  6. Pan, J., et al. Difference in hepatotoxicity of furan-containing components in Cortex Dictamni correlates with the efficiency of their metabolic activation. Phytomedicine. 114, 154778(2023).
  7. Liao, Y., et al. DNA damage and up-regulation of PARP-1 induced by columbin in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 379, 20-34 (2023).
  8. Tian, M., Peng, Y., Zheng, J. Metabolic activation and hepatotoxicity of furan-containing compounds. Drug Metab Dispos. 50, 2458-2471 (2022).
  9. Hu, Z., et al. Development of a mechanism-based biomarker for Dioscorea bulbifera L. exposure and hepatotoxicity in rats. Phytomedicine. 102, 154172(2022).
  10. Narzary, C., Sarkar, D., Das, P., Papi, D. Ethnobotany phytochemistry, and pharmacological activity of Dioscorea bulbifera: A comprehensive review. Chem Biodivers. 22 (1), e202401408(2025).
  11. Guan, X., et al. Bioactivity,toxicity and detoxification assessment of Dioscorea bulbifera L.: A comprehensive review. Phytochem Rev. 16 (3), 573-601 (2017).
  12. Jiang, Y., et al. Disruption of acetyl-CoA acyltransferase 2 resulting from exposure to diosbulbin B. Chem Res Toxicol. 38 (7), 1203-1214 (2025).
  13. Yang, Y., et al. Histones H2B/H3 selectively modified by acis-enedial metabolite resulting from metabolic action of diosbulbin B: Potential target proteins for antitumor agent design. J Med Chem. 68 (13), 13408-13420 (2025).
  14. Shao, L., et al. Pharmacokinetics and UPLC–MS/MS analysis of delsoline in mouse whole blood. J Anal Methods Chem. 2018, 9412708(2018).
  15. Shi, H., et al. RefMetaPlant: A reference metabolome database for plants across five major phyla. Nucleic Acids Res. 52 (D1), D1614-D1628 (2024).
  16. Tan, R., et al. Diosbulbin B: An important component responsible for hepatotoxicity and protein covalent binding induced by Dioscorea bulbifera L. Phytomedicine. 102, 154174(2022).
  17. Li, W., et al. Metabolic activation of furan moiety makes diosbulbin B hepatotoxic. Arch Toxicol. 90 (4), 863-872 (2016).
  18. Wang, K., Li, W., Chen, J., Peng, Y., Zheng, J. Detection of cysteine- and lysine-based protein adductions by reactive metabolites of 2,5-dimethylfuran. Anal Chim Acta. 896, 93-101 (2015).
  19. Zhang, Z., et al. Sensitive bromine-based screening of potential toxic furanoids in Dioscorea bulbifera L. J Chromatogr B. 1057, 1-14 (2017).
  20. National Pharmacopoeia Committee. National standard for processing of traditional Chinese medicines. , People’s Medical Publishing House. , Beijing. (1988).
  21. Wang, K., et al. Chemical identity of interaction of protein with reactive metabolite of diosbulbin B. in vitro and in vivo. Toxins. 9 (8), 249(2017).
  22. Wang, K., et al. Selective and sensitive platform for function-based screening of potentially harmful furans. Anal Chem. 86 (21), 10755-10762 (2014).
  23. Sawada, Y., et al. Widely targeted metabolomics based on large-scale MS/MS data for elucidating metabolite accumulation patterns in plants. Plant Cell Physiol. 50 (1), 37-47 (2009).
  24. Zhang, Q., et al. Formation of furan from linoleic acid thermal oxidation: (E,E)-2,4-decadienal as a critical intermediate product. J Agric Food Chem. 72 (8), 4384-4392 (2024).
  25. Fan, X. Furan formation from fatty acids as a result of storage, gamma irradiation, UV-C and heat treatments. Food Chem. 175, 439-444 (2015).
  26. Zhang, S., et al. 8-Epidiosbulbin E acetate triggers apoptosis via metabolic activation-mediated crosstalk between mitochondria and endoplasmic reticulum. Ecotoxicol Environ Saf. 302, 118614(2025).
  27. Li, W., et al. A metabolic activation-based chemoproteomic platform to profile adducted proteins derived from furan-containing compounds. ACS Chem Biol. 17 (4), 873-882 (2022).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Screening op hepatotoxiciteitUHPLC HRMSreactieve metabolietenlevermicrosomenP450 metabolismeglutathion trappingfuranoditerpenoiden
Video binnenkort beschikbaar

Gerelateerde artikelen