Een tapemontageprotocol voor hoge-resolutie z-stack beeldvorming van Drosophila compound ogen

Si Luo; Ruoting Gu; Ping Wei

doi:10.3791/71043

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een tapemontageprotocol voor hoge-resolutie z-stack beeldvorming van Drosophila compound ogen

222 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/71043

⸱

3 april 2026

Si Luo^*¹ , Ruoting Gu^*¹ , Ping Wei¹

¹Shanghai Diabetes Institute, Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus, Shanghai Clinical Center for Diabetes, Shanghai Sixth People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

^* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Het primaire doel van dit protocol is het mogelijk maken van niet-destructieve beeldvorming en kwantitatieve analyse van Drosophila-verbindingen in ogen. Het combineert een tapemontagestrategie met stereomicroscopische Z-stack acquisitie en Extended Depth of Focus reconstructie om beelden zonder hoge resolutie en artefacten te produceren.

Samenvatting

Hier presenteren we een niet-destructief montage- en beeldvormingsprotocol voor een fenotypische analyse van het Drosophila-compoundoog. Nauwkeurige fenotypering van het Drosophila-compoundoog wordt vaak beperkt door de convexe geometrie en mechanische kwetsbaarheid tijdens het hanteren. Om dit aan te pakken, beschrijven we een veelzijdige, niet-invasieve beeldvormingsworkflow die hoge resolutie visualisatie vanuit meerdere perspectieven mogelijk maakt. Het protocol maakt gebruik van een op maat gemaakte lijmmontagestrategie op een omgekeerd tapeplatform, waarbij vliegen aan het lichaam en de vleugels worden vastgezet terwijl het hoofd volledig onaangeroerd blijft. Cruciaal is dat deze flexibele configuratie verschillende montage-oriëntaties ondersteunt: een laterale positie om de volledige convexiteit van individuele ogen vast te leggen, en een frontale positie om de symmetrie van het hele hoofd te beoordelen. Deze methode vergemakkelijkt ook de rangschikking van arrays met hoge dichtheid, waardoor de snelle verwerking van 20–30 samples per sessie mogelijk is. Door gereflecteerd licht stereomicroscopie te integreren met Z-stack acquisitie en Extended Depth of Focus (EDF) reconstructie, genereert de workflow uniform scherpe, quasi-3D samengestelde beelden. Deze benadering behoudt natuurlijke pigmentatie en levert hoogopgetrouwe, contrastrijke beelden op die geschikt zijn voor kwantitatieve fenotypische analyse op orgaanschaal.

Inleiding

Het Drosophila melanogaster compound-oog is een klassiek en krachtig model voor het bestuderen van orgaangroei, patroonvorming en robuustheid tijdens de ontwikkeling. Het vliegoog, bestaande uit ongeveer 800 hooggeordende ommatidien, biedt een gevoelige en kwantificeerbare uitlezing van genetische verstoringen die proliferatie, differentiatie en weefselorganisatie^beïnvloeden ^1,2,3. Genetische manipulatie van de oogontwikkeling heeft historisch gezien fundamentele inzichten opgeleverd in geconserveerde signaalpaden. Spermale studies t....