Hier laten we onze methode om de muis epidermale neurale stamcellen (EPI-NCSC) te isoleren. Techniek houdt in micro-ontleden whisker follikels, het isoleren van de verdikking en placeing het in weefselkweek. EPI-NCSC beginnen om van uitstulping explantaten op de ondergrond emigreren binnen 3 - 4 dagen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
EPI-NCSC zijn overblijfselen van de embryonale neurale lijst in een volwassen locatie, de uitstulping van de haarfollikels. Ze zijn multipotente stamcellen die de fysiologische eigenschap een breed scala van gedifferentieerde celtypen, waaronder neuronen, zenuwcellen ondersteunen van cellen, gladde spiercellen, bot / kraakbeen cellen en melanocyten te genereren. EPI-NCSC zijn gemakkelijk toegankelijk in de behaarde huid en kan worden geïsoleerd als een zeer zuivere populatie van stamcellen. Deze video geeft een gedetailleerd protocol voor het bereiden van de muis EPI-NCSC culturen uit whisker follikels. De snorhaar pad van een volwassen muis is verwijderd, en snorhaar follikels ontleed. De follikels worden dan de lengte en vervolgens dwars doorgesneden boven en onder de bobbel regio. De bobbel is verwijderd uit het collageen capsule en in een petrischaal. EPI-NCSC beginnen om te emigreren uit de uitstulping explantaten 3 tot 4 dagen later.
Protocol
Dissectie van de Ardennen tegen Adult Mouse Whisker Follikels
- We maken gebruik van 10 weken tot 6 maanden oude muizen. Jongere muizen vaak opbrengst meer cellen. Euthanaseren muis en dompel hele dier in 1:1 mengsel van betadine (jodium-oplossing) en waterstofperoxide (verkrijgbaar bij apotheek) voor ongeveer 3 minuten.
- Squirt hele muis, in het bijzonder het gezicht regio, met 75% ethanol, en draag muis om dissectie microscoop in laminaire flow kap.
- Ontleden snorhaarkussentjes, zorgvuldig vermeden snijden in haarzakjes, en zwembad in HBSS.
- Ontleden whisker follikels en zwembad in HBSS bij kamertemperatuur. Dit doen door d....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Op grond van hun vermogen tot migratie, kan EPI-NCSC worden geïsoleerd als een zeer zuivere populatie van stamcellen, die kunnen worden uitgebreid in vitro. Als embryonale resten in een volwassen locatie, EPI-NCSC zijn potentieel aantrekkelijke kandidaten voor toekomstige celvervangingstherapieën, biomedische engineering en / of de regeneratieve geneeskunde. We hebben getest EPI-NCSC in een muismodel van dwarslaesie, waar ze tonen wenselijke eigenschappen. Door middel van gen expressie profilering door LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / geo, .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Ondersteund door: USPHS subsidie NS38500, Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke, NIH, USA; Biomedische Technologie Alliantie van Southeastern Wisconsin, Milwauke, WI, USA; Bryon Riesch Paralysis Foundation, Milwaukee, WI, USA, Broederlijke Orde van Eagles, Midwest hoofdstuk , USA; National ruggenmergletsel Association, Milwaukee hoofdstuk, USA, North East England Stem Cell Institute, Newcastle University, UK.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Referenties
- Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle. Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).
- Sieber-Blum, M., Grim, M. The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells. Birth Defects....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
