Analyse van de bacteriegroeicurve en de toepassingen ervan in het milieu

1. Collectie van bacteriële cultuur aliquots

1. Een dag voor het verzamelen van de groeitijdstippen, inoculeer 20 mL trypticase soja bouillon (TSB) medium in een 50-mL kolf met E. coli.
2. Incubeer overnacht bij 27 °C. Deze relatief lange incubatieperiode resulteert in een stationaire fase populatie van wild type E. coli van ongeveer 10⁹ CFU/mL.
3. De volgende dag gebruik 100 µL van de bereide cultuur om 250 mL TSB (in een 500-mL kolf) te inoculeren. Meng grondig. Verwijder een 5-mL aliquot en bewaar onmiddellijk bij 4 °C. Dit is T = 0 of T₀ tijdstip, en zou ongeveer 4 x 10⁵ CFU/mL moeten bevatten.
4. Plaats de kolf met de resterende E. coli (245 mL) in een 37 °C schuddende incubator. Verwijder elke uur 5-mL aliquots van de cultuur, tot 8 uur. Bewaar elke aliquot bij 4 °C. Benaming deze aliquots T₁ tot T₈.

2. Serie dilatatie

1. Verwijder aliquots van E. coli uit de koelkast en plaats op ijs voor transport. Houd alle culturen op ijs tot gebruik.
2. Stel een serie verdunningsbuisjes op om verschillende dilataties van elke E. coli cultuur te verkrijgen (Figuur 3). Microfuge buisjes zijn handig voor deze functie. Elke verdunningsbuis moet 900 µL verdunningsvloeistof (steriele zoutoplossing) bevatten. Een verdunningsreeks is nodig voor elke E. coli cultuur (T₀ tot T₈); label elke buis volgens Tabel 2.
   
   Figuur 3. Schematische weergave van de procedure voor het plateren van E. coli.
3. Begin met dilataties door 100 µL E. coli van de buis gelabeld T₀ (de initiële E. coli cultuur) toe te voegen aan buis A, dit is de 10^-1 dilatatie van T₀. Vortex de buis gedurende 5 s.
4. Voeg vervolgens 100 µL van buis A toe aan de volgende buis met zoutoplossing, buis B, dit is de 10^-2 dilatatie van T₀. Continueer de benodigde dilatatiereeks voor elke tijdstip aliquot. Vergeet niet om elke buis voor overdracht te vortexen. Het is ook belangrijk om voor elke overdracht een nieuwe pipettetip te gebruiken.

E. coli cultuur	Benodigde dilataties en Buis #
	A	B	C	D	E	F	G
T0	10-1	10-2
T1	10-1	10-2
T2	10-1	10-2	10-3
T3	10-1	10-2	10-3	10-4
T4	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5
T5	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5	10-6
T6	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5	10-6	10-7
T7	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5	10-6
T8	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5