Question 1

Wat is de structuur van een bacteriofaag?

Accepted Answer

Bacteriofagen zijn virussen die bestaan uit een genoom van nucleïnezuren, zijnde DNA of RNA, omgeven door een eiwitlaag genaamd een capside. Sommige fagen hebben een aanvullende lipidenenvelope en stekelvormige oppervlakte-appendages of staarten. Deze ultramicroscopische partikels zijn te klein om met een lichtmicroscoop te worden bekeken en kunnen alleen worden waargenomen met een elektronenmicroscoop.

Question 2

Hoe infecteren en reproduceren bacteriofagen zich in bacteriële cellen?

Accepted Answer

Bacteriofagen hechten zich aan het oppervlak van de bacteriële cel en injecteren hun genetisch materiaal in de gastheer. Het virale genoom wordt gerepliceerd en capside-eiwitten worden geproduceerd met behulp van de biochemische machinerie van de gastheercel. Zodra de faagdeeltjes zijn geassembleerd, komen ze vrij door lysis van de gastheercel, waarbij ze vaak uit de cel barsten en de bacterie in dit proces doden.

Question 3

Wat is een plaque-assay en hoe meet deze de fagenconcentratie?

Accepted Answer

Een plaque-assay mengt fagen met bacteriën en zachte agar, die vervolgens op reguliere agarplaten wordt aangebracht. De bacteriën vormen een continu gazon, en wanneer fagen de bacteriën infecteren en lyseren, ontstaan plaques als heldere zones. Door de afzonderlijke plaques te tellen en de plaque-vormende eenheden (PFU's) per milliliter te berekenen, wordt de oorspronkelijke fagenconcentratie in het monster bepaald.

Question 4

Waarom zijn colifagen nuttige indicatoren voor waterverontreiniging?

Accepted Answer

Colifagen infecteren E. coli, een veelvoorkomende darmbacterie die duidt op fecale contaminatie. Ze zijn betrouwbare surrogaatindicatoren voor ziekteverwekkende enterovirussen die eveneens via de feces worden overgedragen, maar moeilijker te analyseren zijn. Snelle en goedkope enumeratiemethoden maken colifagen tot aantrekkelijke instrumenten voor het beoordelen van fecale contaminatie in watermonsters uit het milieu.

Question 5

Welke condities zijn noodzakelijk voor het prepareren van bacteriën in een plaque-assay?

Accepted Answer

Bacteriën moeten zich in de logaritmische groeifase bevinden om te garanderen dat elke bacterie levensvatbaar is en de faag in staat stelt om nakomelingen te produceren. Inoculeer drie uur voor de assay een overnight-cultuur in vers bouillonmedium en incubeer dit bij 35-37°C onder schudomstandigheden. Deze timing zorgt ervoor dat de bacteriën een optimale metabolische activiteit bereiken om de replicatie van fagen te ondersteunen.

Question 6

Hoe kunnen plaque-assays worden aangepast om andere virussen dan bacteriofagen te detecteren?

Accepted Answer

Plaque-assays kunnen worden uitgevoerd met mammalievirussen zoals influenza door mammalia-cellen als monolagen in weefselkweekschalen te kweken. Mediums met virussen worden toegevoegd om infectie mogelijk te maken, waarna de cellen worden bedekt met een immobiliserend medium zoals agarose. Na een incubatie van maximaal twee weken worden de geïnfecteerde cellen gefixeerd en gekleurd om de plaques te visualiseren en te tellen.

Question 7

Hoe worden individuele faagisolaten verkregen uit milieu-monsters met behulp van plaque-assays?

Accepted Answer

Fagen worden door filtratie verzameld uit milieu-monsters zoals bodem en vervolgens gebruikt om gevoelige bacteriën te infecteren in een plaque-assay. Individuele plaques worden opgepikt en uitgestreken op nieuwe agarplaten, die zijn bedekt met een toplaag van topagar bevattend bacteriën. De fagenconcentratie neemt af langs de uitstrijklijn, waardoor afzonderlijke plaques van enkelvoudige fagtypes kunnen worden geïsoleerd en verder geanalyseerd.

Detectie van Bacteriofagen in Milieumonsters - Beoordelingsquiz