Name: Verzamelen en Cryopreservatie van Hamster Eicellen en muis embryos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: Leer een stapsgewijze methode voor het verzamelen en cryopreserveren van hamstereicellen en muisembryo's met hoge overlevingspercentages na ontdooien. Deze techniek is essentieel voor reproductief onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door het Spaanse Ministerio de Educación y Ciencia (BIO 2006 tot +11.792) en de Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437). Auteurs willen graag Marc Puigcerver en Jonatan Lucas bedanken voor hun technische bijstand bij de voorbereiding van de media. Alle medewerkers van de Servei d&#39;Estabulari is erkend voor huisvesting van de dieren, en vooral Juan Jose Martin en Javier Benito voor hun extra bijdrage over het opnemen van een deel van deze video. NCB is een fellow van de Portugese Fundação para a Ciência e Tecnologia en SG is een fellow van het Spaanse Ministerio de Educación y Ciencia.

Verzorging van dieren en de procedures werden uitgevoerd volgens de richtlijnen en verordeningen zijn goedgekeurd door de ethische commissie op Animal and Human Onderzoek van de Universitat Autònoma van Barcelona, ​​Spanje. I. Oocyte collectie <ol><li> Controleer en selecteer vrouwelijke hamsters (Mesocricetus auratus, 8-12 week oud) van de Gouden Syrische stam voor de aanwezigheid van een dikke vaginale afscheiding (postovulatory ontlading). </li><li> Induceren geselecteerde vrouwen om superovulate door intraperitoneale injectie van 40 IE PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotrofine), gevolgd door 40 IE hCG (humaan choriongonadotrofine) 60 uur later. </li><li> Euthanaseren vrouwelijke hamsters 16 uur na toediening van hCG in een kooldioxide kamer. </li><li> Isoleer eileiders van de vrouwtjes, zoals aangegeven in de video en overbrengen naar een daling van KSOM-H medium. </li><li> Verzamel eicel-cumulus complexen door het scheuren van de eileider ampulla onder een stereoscopische microscoop in een druppel hyaluronidase (156 U / ml) bij 37 ° C. Eicellen zullen bevrijd worden van cumulus cellen in ongeveer 5 minuten. </li><li> Pick-up eicellen van hyaluronidase en twee keer was ze in KSOM-H medium. </li></ol> Voor het verzamelen van muizenembryo&#39;s, vrouwelijke muizen (Mus musculus, 6-8 weken oud is) worden aangezet tot superovulate door intraperitoneale injectie van 5 IE PMSG gevolgd door 5 IE hCG 48 uur later en gekoppeld met mannelijke muizen. Vrouwtjes zijn opgeofferd door cervicale dislocatie op 24-26, 44-46 of 54-56 uur na de toediening van hCG voor de verkrijging van pronuclear, 2-cel of 4-cellig stadium embryo&#39;s, respectievelijk. Het verzamelen van pronuclear embryo&#39;s is precies uitgevoerd zoals beschreven voor de hamster eicellen. Embryo&#39;s op de 2-cel en 4-cel fasen worden verzameld door het spoelen van de eileiders met KSOM-H medium [6]. NB: Naar aanleiding van dit protocol ongeveer 20 tot 30 eicellen / embryo&#39;s kunnen worden verzameld van elke vrouw. II. Voorbereiding van invriezen en ontdooien oplossingen <ol><li> Bereid oplossing die ik door het verdunnen van 0,57 ml van propilenglycol in 5 ml KSOM-H (1,5 M van propilenglycol). </li><li> Bereid ontdooien oplossing door toevoeging van 2 ml van KSOM-H in een buis met 0,2052 g sucrose (0,3 M sucrose). </li><li> Bereid bevriezen oplossing door toevoeging van 2 ml van oplossing I, een buis met 0,0684 g sucrose (1,5 M van propilenglycol en 0,1 M sucrose). </li></ol> Let op: Oplossing I en invriezen en ontdooien oplossingen moeten worden voorbereid vlak voor het gebruik ervan. Echter, mogen de gespecificeerde hoeveelheden sucrose te worden gebruikt voor de bereiding van het invriezen en ontdooien oplossingen worden gewogen op voorhand en opgeslagen in een 3 ml-buizen bij kamertemperatuur gedurende enkele maanden. III. Invriezen protocol <ol><li> Transfer eicellen / embryo&#39;s uit de KSOM-H medium tot een daling van de oplossing I en incubeer gedurende 7-15 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Ondertussen bereiden een 90 mm petrischaaltje de rietjes lading door het plaatsen van 90 pl druppels van invriezen en ontdooien oplossingen zoals het is weergegeven in de video (een druppel van elke oplossing / stro). </li><li> Breng de gewenste aantal eicellen / embryo&#39;s op de bevriezing oplossing daalt. Opmerking: Wij dragen doorgaans tussen de 5 tot 30 eicellen of embryo&#39;s / drop. </li><li> Bevestig een rietje om een ​​mond gecontroleerd afzuigsysteem en laad het in deze volgorde: oplossing I, lucht, bevriezing druppel met de eicellen, lucht, ontdooien drop, lucht. </li><li> Zodra het stro is geladen, houd opzuigen tot de eerste druppel geïntroduceerd (oplossing I) bereikt het polymeer aan de bovenkant van het rietje en afdichtingen dit doel. Thermo-seal het andere uiteinde van het rietje of zegel met een plastic plug. </li><li> Schakelaar op de programmeerbare vriezer en selecteer de bevriezing programma. De bevriezing programma dat gebruikt wordt in dit protocol is gebaseerd op de koelsnelheden oorspronkelijk gepubliceerd door Lassalle et al.. [7]: <ul><li> 2 ° C / min van kamertemperatuur tot -7 ° C 0 ° C / min gedurende 10 min om te zorgen voor de temperatuur evenwicht en inductie van zaaien (zie hieronder) </li><li> 0,3 ° C / min van -7 ° C tot -30 ° C 0 ° C / min gedurende 2 minuten, zodat de temperatuur evenwicht </li><li> 35 ° C / min van -30 ° C tot -130 ° C </li></ul></li><li> Laad de rietjes op de slots van de houder van de programmeerbare vriezer, om ervoor te zorgen dat het deel van het stro met de daling van het ontdooien oplossing is naar buiten gericht. Start het programma bevriezen. </li><li> Bij het monster temperatuur -7 ° C en de koeling in de wacht heeft bereikt, handmatige zaaien: duik de tang in vloeibare stikstof, trek de houders iets uit de vriezer om het deel van de rietjes met de druppels van de oplossing ontdooien bloot te leggen, en onmiddellijk druk dit deel van de rietjes met de tang. Herhaal dit voor iedere houder en iedere stro in de houder, en laat het bevriezen programma loopt tot eind. </li><li> Wanneer het programma voltooid is, duiken de houders in vloeibare stikstof. </li><li> Haal de rietjes uit dehouders en overbrengen naar een gelabelde gobelet. </li><li> Tot slot, slaan de gobelet in een vloeibare stikstof tank. </li></ol> IV. Ontdooien protocol <ol><li> Verwijder het rietje uit de vloeibare stikstof tank. </li><li> Handhaaf het stro bij kamertemperatuur gedurende 40 seconden. </li><li> Geniet van het stro in een waterbad op 30 ° C gedurende 40 seconden. </li><li> Haal de stekker uit het stro of knip de thermo-verzegelde tip. </li><li> Lege het stro in een 35-mm petrischaal en meng de twee druppels met het invriezen en ontdooien oplossingen. </li><li> Laat eicellen / embryo&#39;s in het mengsel gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Transfer oöcyten / embryo &#39;om een ​​nieuwe daling van KSOM-H voor een extra 15 minuten bij 37 ° C. </li><li> Oöcyten / embryo &#39;s zijn nu klaar voor verdere manipulatie. </li></ol> Opmerking: Tijdens de stappen 6 en 7 moet je zien dat de ontdooide eicellen / embryo langzaam opzwellen als gevolg van rehydratatie. V. representatieve resultaten Het gebruik van de cryopreservatie protocol hier gerapporteerde resultaten in een overleving van ongeveer 95% voor de hamster en de eicellen van&gt; 90%, 85% en 80% voor de muis B6CBAF1 embryo&#39;s in het pronuclear, twee-cel en 4-cel podia, respectievelijk. Wanneer de muis embryo&#39;s worden gekweekt in vitro in KSOM na het ontdooien, ten minste 70 tot 80% zou de blastocyst stadium bereiken in optimale kweekomstandigheden. Het is aanbevolen dat je een controle groep (stro) van de eicellen / embryo &#39;in elke bevriezing experiment en dat ook u ontdooien deze groep voordat de rest van de eicellen / embryo&#39;s worden gebruikt voor verdere manipulaties. Als de overlevingskans voor de controle groep zijn lager dan verwacht, dooi een andere stro van dezelfde partij. Als de overlevingskans voor deze tweede groep zijn ook laag, gooi de resterende rietjes uit deze bevriezing veel.

<ol><li>Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+mouse+embryos+frozen+to+-196+and+-269+%C2%B0C%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C.</a> Science. 178, 411-414 (1972).</li>
<li>Wilmut, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cooling+rate%2C+warming+rate%2C+cryoprotective+agent+and+stage+of+development+on+survival+of+mouse+embryos+during+freezing+and+thawing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing.</a> Life Sci. 11, 1071-1079 (1972).</li>
<li>Parkening, T. A., Tsunoda, Y., Chang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+various+low+temperatures%2C+cryoprotective+agents+and+cooling+rates+on+the+survival%2C+fertilizability+and+development+of+frozen-thawed+mouse+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Effects of various low temperatures, cryoprotective agents and cooling rates on the survival, fertilizability and development of frozen-thawed mouse eggs.</a> J. Exp. Zool. 197, 369-374 (1976).</li>
<li>Schneider, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiological+principles+of+embryo+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+In+Vitro+Fert.+Embryo+Transf%22%5BJournal%5D)">Cryobiological principles of embryo freezing.</a> J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 3, 3-9 (1986).</li>
<li>Vajta, G., Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+cryopreservation+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Improving cryopreservation systems.</a> Theriogenology. 65, 236-244 (2006).</li>
<li>Duselis, A. R., Vrana, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrieval+of+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Retrieval of mouse oocytes.</a> JoVE. 3, (2007).</li>
<li>Lassalle, B., Testart, J., Renard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryo+features+that+influence+the+success+of+cryopreservation+with+the+use+of+1%2C2+propanediol%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Human embryo features that influence the success of cryopreservation with the use of 1,2 propanediol.</a> Fertil. Steril. 44, 645-651 (1985).</li>
<li>Ibáñez, E., Grossmann, M., Vidal, F., Egozcue, J., Santaló, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+caprine+beta-lactoglobulin+transgenic+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of caprine beta-lactoglobulin transgenic mouse embryos.</a> Cryobiology. 35, 290-298 (1997).</li>
<li>Dinnyes, A., Wallace, G. A., Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+genotype+on+the+efficiency+of+mouse+embryo+cryopreservation+by+vitrification+or+slow+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Effect of genotype on the efficiency of mouse embryo cryopreservation by vitrification or slow freezing.</a> Mol. Reprod. Dev. 40, 429-435 (1995).</li>
<li>Tateno, H., Kamiguchi, Y., Mikamo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+freezing+and+thawing+method+of+hamster+oocytes+designed+for+both+the+penetration+test+and+chromosome+assay+of+human+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">A freezing and thawing method of hamster oocytes designed for both the penetration test and chromosome assay of human spermatozoa.</a> Mol. Reprod. Dev. 33, 202-209 (1992).</li>
<li>Biggers, J., McGuinnis, L. K., Raffin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+preimplantation+development+of+the+mouse+in+the+protein-free+KSOM%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Amino acids and preimplantation development of the mouse in the protein-free KSOM.</a> Biol. Reprod. 63, 281-293 (2000).</li>
</ol>

Met dit protocol hamster eicellen en embryo&#39;s muis met succes kan worden ingevroren. Eenmaal bevroren, kunnen eicellen / embryo&#39;s worden opgeslagen in vloeibare stikstof tanks voor onbepaalde tijd en teruggewonnen op elk gewenst moment of plaats gewenst. Dit biedt het voordeel van het hebben van monsters bijna klaar voor gebruik wanneer dat nodig is. Aan de andere kant kan dit protocol ook gebruikt worden om embryo cryobanks genereren uit waardevolle muizenstammen (zoals transgene lijnen), als een economische en veiliger alternatief...

<table><tbody><tr><td>Naam materiaal</td><td>Type</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerking</td></tr><tr><td>Franse type mini-straw 0,25 ml</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>13407/0010</td><td></td></tr><tr><td>hCG</td><td></td><td>Farma-Lepori, Spanje</td><td>749036.4</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td></td><td>Sigma</td><td>H-3884</td><td></td></tr><tr><td>KSOM-H medium</td><td></td><td></td><td></td><td>Ref. [11]</td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td></td><td>Air Liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic pluggen</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>19046</td><td></td></tr><tr><td>PMSG</td><td></td><td>Intervet, Spanje</td><td>1.614/8447</td><td></td></tr><tr><td>Propyleenglycol</td><td></td><td>Fluka</td><td>82280</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td></td><td>Merck</td><td>107687</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische scharen</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BC-060R; BG-061R</td><td></td></tr><tr><td>Thermo-sealer</td><td></td><td>SIZ</td><td>220</td><td></td></tr><tr><td>35 en 90 mm kweekschalen</td><td></td><td>Nunc</td><td>153066; 150350</td><td></td></tr><tr><td>10 ml buisjes</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>163160</td><td></td></tr><tr><td>Stikstoftank</td><td></td><td>MVE, Cryogenics</td><td>XC 43/28</td><td></td></tr><tr><td>Programmeerbare vriezer</td><td></td><td>Planner Products Ltd.</td><td>Kryo-10 Series III</td><td></td></tr><tr><td>Pincetten</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BD-331R; BD-053R; OC-020R</td><td></td></tr></tbody></table>

verzamelen en cryopreservatie van hamster eicellen en muis embryo&#39;s

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

Embryo&#39;s en eicellen werden voor het eerst met succes meer dan 30 jaar geleden ingevroren, toen Whittingham<i&gt; Et al..</i&gt;<sup&gt; 1</sup&gt; En Wilmut<sup&gt; 2</sup&gt; Apart beschreven dat de muis embryo&#39;s kunnen worden ingevroren en bewaard bij -196 ° C, en een paar jaar later, Parkening<i&gt; Et al.</i&gt;.<sup&gt; 3</sup&gt; Meldde de geboorte van levende nakomelingen als gevolg van in-vitrofertilisatie (IVF) van gecryopreserveerd eicellen. Sindsdien is het gebruik van cryopreservatie technieken zich snel verspreiden naar een essentieel onderdeel in de praktijk van mens en dier begeleide voortplanting en in het behoud van dierlijke genetische hulpbronnen worden. Momenteel zijn er twee manieren gebruikt worden om eicellen en embryo&#39;s cryopreserve: langzaam invriezen en verglazing. Een grote verscheidenheid van benaderingen zijn gebruikt om te proberen beide technieken en miljoenen dieren en duizenden kinderen te verbeteren, zijn geboren uit ingevroren embryo&#39;s. Evenwel nog belangrijke tekortkomingen verbonden aan cryopreservatie nog moeten worden overwonnen, omdat ijs-kristalvorming, oplossing effecten en osmotische shock lijken meerdere cryoinjuries in de post-ontdooide eicellen en embryo&#39;s kunnen veroorzaken. Langzame bevriezing met programmeerbare diepvriezers heeft het voordeel van het gebruik van lage concentraties van cryoprotectants, die meestal worden geassocieerd met chemische toxiciteit en osmotische shock, maar hun vermogen om ijs-kristalvorming te vermijden bij lage concentraties is beperkt. Langzame bevriezing induceert ook onderkoeling effecten die moeten worden vermeden met behulp van handmatige of automatische zaaien<sup&gt; 4</sup&gt;. In de verglazing proces, hoge concentraties van cryoprotectants remmen de vorming van ijskristallen en leiden tot de vorming van een glasachtig verglaasde toestand waarin water is gestold, maar niet uitgebreid. Echter, vanwege de toxiciteit van cyroprotectants bij de gebruikte concentraties, kunnen eicellen / embryo&#39;s alleen worden blootgesteld aan de cryoprotectant oplossing voor een zeer korte periode van tijd en in een minimum volume oplossing, voordat de monsters direct ondergedompeld in vloeibare stikstof<sup&gt; 5</sup&gt;. In de afgelopen tien jaar heeft verglazing steeds populairder geworden, omdat het een zeer snelle methode waarbij geen dure apparatuur (programmeerbaar diepvriezer) is vereist. Echter, langzaam invriezen nog steeds de meest gebruikte methode om eicellen / embryo cryopreservatie. In deze video-artikel tonen we, stap-voor-stap hoe te verzamelen en te langzaam te bevriezen hamster eicellen met een hoge post-dooi overleving. Dezelfde procedure kan ook worden toegepast om met succes vorst en dooi muis embryo&#39;s in verschillende stadia van pre-implantatie ontwikkeling.

In deze video-artikel stellen we een stap-voor-stap demonstratie over hoe het verzamelen en hamster eicellen cryopreserve met een hoge post-dooi overleving. Dezelfde procedure kan ook worden toegepast om met succes vorst en dooi muis embryo&#39;s in verschillende stadia van pre-implantatie ontwikkeling.

Verzamelen en Cryopreservatie van Hamster Eicellen en muis embryo&#39;s

Embryo's en oocyten werden voor het eerst succesvol cryopreserveerd meer dan 30 jaar geleden, toen Whittingham et al. 1 en Wilmut 2 afzonderlijk beschreven dat muis...

collection-and-cryopreservation-of-hamster-oocytes-and-mouse-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol laat de techniek voor de extractie van eicellen of een vroeg stadium bevrucht embryo uit de eileider van muizen. De mogelijkheid om de infindibulum identificeren en steek een stomp uiteinde naald in is het essentieel om de juiste uitvoering van de procedure.

Ophalen van Muis Eicellen

Eicellen zijn gevoelig voor te wijten aan fouten in chromosoom segregatie aneuploïdie tijdens de meiotische rijping. Aneuploïde eieren kan leiden tot onvruchtbaarheid, miskramen of ontwikkelingsstoornissen, zoals het syndroom van Down. Hier beschrijven we methoden om materialen van keuze te introduceren in eicellen en methoden om meiotische rijping onderzoeken en te beoordelen ploïdie.

Eicel muis micro-injectie, rijping en ploïdie Assessment

Een ethyleen-glycol-gebaseerde methode voor verglazing muis embryo's wordt beschreven. Is het voordelig om andere methoden in zijn eenvoud en lage embryonale toxiciteit, en kan dus worden breed toepasbaar voor vele stammen van muizen, met inbegrip van inteelt en gen-gemodificeerde muizen.

Invriezen van embryo&#39;s door Mouse Ethyleen Glycol-Based Vitrificatie

De vergelijkende soort aanpak maakt het mogelijk gedrag neurowetenschappers te verkennen verschillende neurobiologische factoren die samenhangen met specifiek gedrag gezien als kenmerk van een specifiek dier model. Door gebruik te maken van natuurlijk voorkomende verschillen in gedrag tussen nauw verwante soorten, werkt deze techniek niet nodig invasieve technieken om de expressie van het gedrag te manipuleren.

Met behulp van een vergelijkende Soorten aanpak van de neurobiologie van Paternal antwoorden Onderzoek

Hier laten we zien de nieuw ontwikkelde I • Cryo-kit voor de muis sperma cryopreservatie. Twee-cellig stadium embryo ontwikkeling met ingevroren-ontdooid sperma werd steeds verbeterd in 5 muizenstammen met het gebruik van deze kit. Over een periode van 1,5 jaar werden 49 genetisch gemodificeerde muis lijnen gearchiveerd door sperma cryopreservatie met de I • Cryo-kit en later met succes teruggevorderd door IVF.

Muis Sperma Cryopreservatie en herstel met behulp van de I · Cryo Kit

Hier presenteren we een protocol specifieke siRNA-gemedieerde mRNA afbraak gevolgd door immunofluorescentie analyse meiotische spileenheid en organisatie evalueren muizen oöcyten. Dit protocol is geschikt voor in vitro depletie van transcripties en functionele beoordeling van verschillende spil en / of MTOC geassocieerde factoren in oöcyten.

Meiotische Spil Assessment in Muis Eicellen door siRNA-gemedieerde silencing

Dit artikel beschrijft een protocol om efficiënt ontlenen en cultuur pluripotente stamcellijnen uit muis embryo's in het blastocyst stadium.

Afleiding van stamcellijnen uit muis voor inplanting embryo 's

Hier presenteren we een aangepaste methode voor cryopreservatie van eencellige embryo's, evenals een protocol dat het gebruik van gevriesontdooide embryo's en elektroporatie koppelt voor de efficiënte generatie van genetisch gemodificeerde muizen.

Gebruik van gevriesde embryo's voor hoogrendementproductie van genetisch gemodificeerde muizen

Dit manuscript beschrijft een protocol voor de minimale volume vitrification van onrijpe katoocyten met laboratorium-gemaakte media op commerciële steunen. Het dekt elke stap van eicelisolatie van ex vivo gonaden tot vitrificatie en opwarming.

Minimale volume vitrificatie van onvolwassen feline oocyten

Dit protocol beschrijft procedures voor in-vitro rijping van muis-oocyten, in-vitrofertilisatie en daaropvolgende embryokweek tot het blastocyststadium.

Muize-oocyt in vitro rijping, bevruchting en kweek van pre-implantatie embryo's

Leer een stapsgewijze methode voor het verzamelen en cryopreserveren van hamstereicellen en muisembryo's met hoge overlevingspercentages na ontdooien. Deze techniek is essentieel voor reproductief onderzoek.

Verzamelen en Cryopreservatie van Hamster Eicellen en muis embryo's

Meer video's verkennen