Name: Dissectie van de imaginaire Discs uit 3e Instar Drosophila Larven (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: Leer de dissectie van imaginale schijven uit Drosophila-larven van het derde instar voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode toont isolatie van vleugel-, been- en oogschijven met scherpe pincet en chirurgisch mes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben niets te melden.

dissectie van de imaginaire discs uit 3e instar drosophila larven

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Dit protocol laat de dissectie techniek die wordt gebruikt voor het isoleren van verbeelding schijven van Drosophila larven in de 3e instar stadium. Methoden voor de vaststelling van het weefsel na het zeggen en het verwijderen van de vleugel, poot, en ogen schijven worden gedemonstreerd direct op een objectglaasje voor verdere visualisatie.

Dissectie van de imaginaire Discs uit 3e Instar Drosophila Larven

Vandaag ga ik u laten zien hoe u imaginale schijven dissecteert uit Drosophila-larven in het derde stadium. Larvale schijven uit het derde stadium kunnen worden gebruikt voor een reeks ontwikkelingsprocessen. In ons lab bestuderen we ze om het proces van apoptose te observeren, maar u kunt er ook diverse eiwitten in tot expressie brengen om ze op die manier te bestuderen en allerlei ontwikkelingsprocessen te zien die zich in de schijven voltrekken.Om dit te doen, gebruik ik verschillende zeer belangrijke hulpmiddelen. Ten eerste is er de pincet voor het oppakken, waarmee we de larven uit hun schaaltjes halen. Vervolgens zijn de dissectie-pincetten van groot belang; deze moeten extreem scherp zijn om de dissectie succesvol uit te kunnen voeren.Vervolgens gebruiken we een chirurgisch mesje, een chirurgisch mesje nummer 11, om de schijven uit de kop te verwijderen. Daarna plaatsen we de schijven op een objectglas met Vector Shield als montagemedium. Het eerste wat we gaan doen is het verzamelen van enkele derdeste-instadiumlarven van *Drosophila melanogaster*.Ik gebruik hier gewoon mijn plukstokje om ze als het ware van de wand van het flesje los te wrikken. Soms helpt het als het stokje een beetje nat is, waarna je ze in een druppel PBS plaatst. Oké, hier hebben we onze derde sterlarve.Omdat ik rechtshandig ben, draai ik zijn kop naar rechts en gebruiken we een paar referentiepunten om ons te leiden naar de plek waar we hem moeten vastpakken. Eerst is er het hoofdgedeelte van de trachea hier en hier. En vervolgens is er een kleine dwarsdoorsnede hierboven richting de kop.Eerst pak ik de larve voorzichtig vast, ongeveer twee derde van het lichaam vanaf de kop. Vervolgens pak ik met mijn rechterhand een paar millimeter achter het dwarsstuk vast, waarbij ik probeer ongeveer tot het midden van de breedte van de larve te reiken. Dat is een goede grip.U ziet dat ik ongeveer halverwege ben. Vervolgens trek ik met mijn rechterhand voorzichtig naar voren; u ziet alle darmen naar buiten komen. Oké. Het hoofdgedeelte van het lichaam kan nu worden weggegooid.En hier hebben we de kop, inclusief de imaginale schijven die aan de monddelen vastzitten. Ik pak hem daarom bij de monddelen vast, zodat ik geen van de schijven beschadig, en verplaats hem naar een nieuwe druppel PBS. Nu hebben we onze gefixeerde larvale kop.We gaan al het overtollige weefsel verwijderen en de larve vervolgens ofwel bij de monddelen vastpakken zoals eerder gedaan, of met de pincet tegen de dissectieplaat drukken. De monddelen bevinden zich nu aan de linkerzijde. Oké, hier zien we het darmkanaal, dat we niet nodig hebben, en daar bevindt zich een speekselklier.Er is wat vetlichaam aanwezig. Blijf dit weghalen, vooral vet, omdat dit bepaalde assays en kleuringen kan storen en alles kan kleuren wat u niet wilt. We hebben nu de gereinigde larvale kop.We hebben nu de larvale koppen, die zijn gedisseceerd van het lichaam, gefixeerd en gewassen, waarbij het overbodige weefsel is verwijderd, en ze zijn behandeld met de benodigde reagentia, zoals een antilichaamskleuring in C2-tunnel of een andere functionele kleuring. We hebben ze nu op een objectglas geplaatst en we zijn klaar om de eigenlijke schijven van de kop te disseceren. De monddelen.Oké, deze keer bevinden de monddelen zich hier aan de linkerkant. Ik ga mijn pincet pakken en deze gewoon tegen het preparaatglas drukken. In mijn rechterhand heb ik een scalpelblad nummer 11, wat ook een fijner instrument is om mee te dissekeren.Eerst zal ik het centraal zenuwstelsel (CZS) en de optische lobben verwijderen. Hier ziet u het CZS, de twee optische lobben en de daaraan bevestigde oog-antenne-schijven. Ik verwijder het CZS door mijn mesje tussen de optische lobben en de oogschijven te steken en langzaam te trekken, waardoor de oogschijven een beetje uitrekken.Oké, daar hebben we dus het CZS en de optische lobben. We hebben nu de twee oogschijven die van het CZS zijn losgekoppeld. Nu ga ik ze weghalen bij de monddelen door voorzichtig aan de basis te knippen en te trekken.Oké, dus er is één oog-antenne-schijf, de andere oog-antenne-schijf. Oké. En nu kunnen we de vleugelschijf hier uitsteken zien. Ik ga, opnieuw, voorzichtig de basis inknippen en trekken.Dus hier hebben we een vleugelschijf en een daaraan gehechte pootschijf, samen met een klein stukje trachea. Oké, dus daar is je vleugelschijf met een aangehechte pootschijf, en er zijn duidelijk meerdere pootschijven. We kunnen dus in dit gebied zoeken en meer schijven vinden door voorzichtig met het scalpellmes te tasten.Dat zijn alle schijven die we in deze zullen vinden. Er zijn nog een paar poot-imaginale schijven.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.

Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc

Beschrijven we een nieuw rood fluorescerend eiwit (RFP) reporter dat specifiek wordt uitgedrukt in...

A Novel RFP Reporter Steun in de visualisatie van het oog denkbeeldige Disc in Drosophila</em

Drosophila melanogaster larven zorgen voor een ideaal modelsysteem om de mechanismen van het axonaal transport te onderzoeken binnen de larvale segmentale zenuwen. Met behulp van deze procedure, kan 3 e instar larven dragen verschillende mutaties worden vergeleken met wild-type larven.

Visualisatie van larvale Segmentale zenuwen in 3 Rd Instar Drosophila Larvale Voorbereidingen

Dissectie en Immunohistochemie van larven, popstadium en Volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Netvliezen

Bij het kleuren van Drosophila imaginal schijven, vaak een ruwe dissectie wordt uitgevoerd waar de schijven worden blootgesteld, maar blijven bevestigd aan het lichaam. Eenmaal bevlekt, worden de schijven van belang geïsoleerd en gemonteerd. Het voorbeeldprotocol demonstreert een procedure voor vleugel imaginaire schijfdissectie en montage.

Drosophila Larva Imaginal Disc Dissectie: Een methode om de ontwikkeling van Epithelia te observeren

Dit protocol Gegevens een gestroomlijnde methode voor live cell imaging uitvoeren in het kader van een intact larvale hersenen. Live cell imaging benaderingen zijn van onschatbare waarde voor de studie van asymmetrische neurale stamcellen divisies evenals andere neurogene en ontwikkelingsprocessen, consequent blootleggen van mechanismen die eerder over het hoofd gezien.

Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvale neuroblasts

De volwassen structuren van Drosophila zijn afgeleid van zak-achtige structuren die imaginale schijven worden genoemd. Analyse van deze schijven biedt inzicht in vele ontwikkelingsprocessen, waaronder weefselbepaling, oprichting van compartimentgrenzen, celproliferatie, celbestemmingsspecificatie en cellulaire planaire polariteit. Dit protocol wordt gebruikt om imaginale schijven voor te bereiden op licht-/fluorescentiemicroscopie.

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit Drosophila melanogaster

Het doel van deze techniek is om onderzoekers in staat te stellen dissectie, immunokleuring en montage van poppenoogschijfjes uit Drosophila melanogaster van elke leeftijd uit te voeren.

Dissectie en Plaatsing van<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye Discs

Dit protocol laat zien hoe fluorescent gemerkt, genetisch bepaald klonale tumoren in de Drosophila oog / antennaal verbeelding schijven (EAD) te genereren. Het beschrijft hoe de EAD en de hersenen ontleden van de derde instar larven en hoe ze te verwerken te visualiseren en te kwantificeren genexpressie veranderingen en tumor invasiviteit.

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

We beschrijven een protocol voor het meten van contacten tussen cellen in aangrenzende epitheellagen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel met behulp van een op GFP-reconstitutie gebaseerde benadering.

Een op GFP-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel

Dit artikel beschrijft een efficiënt protocol voor beeldende schijfdissectie en antistofkleuring dat zuinig is met reagentia en het hanteren van imaginale schijven in kleine aantallen vergemakkelijkt.

Kleinschalige dissectie en antilichaamkleuring van oog-antenne en vleugelbeeldschijven van Drosophila melanogaster

Leer de dissectie van imaginale schijven uit Drosophila-larven van het derde instar voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode toont isolatie van vleugel-, been- en oogschijven met scherpe pincet en chirurgisch mes.

Dissectie van de imaginaire Discs uit 3e Instar Drosophila Larven

Meer video's verkennen