Name: LAD-Ligatie: een muizenmodel van myocardinfarct (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Leer de LAD-ligatie-techniek voor myocardinfarctonderzoek bij muizen. Deze chirurgische methode maakt betrouwbare inductie van myocardischemie mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs danken Christiane Pahrmann voor haar technische bijstand en het uitvoeren van histologie.

<html> Balb / C-muizen met een gewicht van minimaal 20g op een leeftijd van 8 tot 12 weken worden gekocht van Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Muizen zijn gehuisvest onder gangbare condities, gevoed standaard muis pellets en water ad libitum. Verdoven muis met isofluraan (2%) met behulp van een inductie kamer. <ol><li> Scheer de nek en de linker zijkant van de ribbenkast en desinfecteren met 80% ethanol. </li><li> Plaats de muis op zijn rug en zet een masker over zijn neus en mond te houden van de anesthesie. </li><li> Controleer de reflexen knijpen de staart en achterpoten voeten om er zeker van dat de muis is voldoende anesthesized. </li><li> Onder microscopisch zicht het uitvoeren van een middellijn cervicale incisie het scheiden van de huid, spieren en weefsel die de luchtpijp. </li><li> Wanneer de luchtpijp wordt blootgesteld gesneden een klein gaatje in het weefsel tussen twee cartridge ringen onder de glottis naar de endotracheale tube (figuur 1) in te voegen. Plaats de endotracheale tube die de craniale deel van de luchtpijp met behulp van micro-chirurgische forecepts. Controleer de thoracale beweging om er zeker van dat beide longen goed worden geventileerd. </li><li> De ademhaling (RR) zou ongeveer 110 per minuut, met een inspiratoire druk van 17 tot 18cm H 2 O. Draai de muis, liggend op de rechterzijde, met uitzicht op de linkerkant. Voer een leftsided thoracotomie tussen de 3 e en de 4 e rib, en zorgvuldig ontleden het weefsel en spieren, met behulp van een Cauter om het bloeden te voorkomen. </li><li> Voorzichtig open de thorax, zodra de thorax is geopend, vinden het hart, zonder het aanraken van de long met een scherp voorwerp. Verwijder nu het deel van de hartzak dat is voor het hart. </li><li> De LAD is gelegen tussen de longslagader en de linker oorschelp. Gebruik een 8-0 Prolene hechtdraad (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) aan de LAD proximale met een enkele hechting (figuur 2) afbinden. </li><li> Plaats een kist buis (28G, omkoopbare katheter), tussen de 4 e en de 5 e rib. </li><li> Sluit de thoracale incisie in lagen, met behulp van 6-0 Prolene lopen hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) aan de ribben en 4-0 Prolene lopen hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) aan te passen om de huid te sluiten. </li><li> Afvoer van de thorax met de hulp van een 2 ml injectiespuit voorzichtig (figuur 3). Plaats de muis op zijn rug. Neem nu de endotracheale tube uit en aan te passen de tracheale cartridge ringen met een enkele steek met 7-0 Prolene hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). </li><li> Plaats het masker op de muis en sluit de huid met 4-0 Prolene lopen hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). </li></ol> Validatie Er zijn verschillende mogelijkheden om het succes van de LAD-ligatie te bevestigen. De troponine test kan worden uitgevoerd 6 tot 18 uur na de operatie, met behulp van slechts 150 liter bloed zonder de noodzaak om het dier te euthanaseren. Het bloed wordt toegepast op een aangepaste troponine test kit (TROP T Gevoelig, Roche, Mannheim) (figuur 4). Troponine is een regulatief eiwit in de actine filamenten van de spiercel, zijn er verschillende isotypen in de drie soorten spieren. De isotypen cTnI en cTnT zijn te vinden in het hart en zijn uitgebracht in weefselschade. De gestandaardiseerde test voor troponine T (cTnT) is gebaseerd op twee hart van specifieke monoklonale antilichamen, een vallen de troponine in het bloed, de tweede is een marker. Het infarct gebied kan macroscopisch worden geïdentificeerd na 3 dagen (figuur 5). TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride) kleuring maatregelen levensvatbaarheid van het weefsel gebruikt om infarctgrootte te evalueren. Evans blauwe kleurstof (1,5%, 1,0 ml) in fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) wordt ingespoten in de linker ventrikel holte aan het myocard ischemische gebied te meten. De muis is gedood en het hart is geoogst en coupes in plakjes. Het weefsel plakjes worden geïncubeerd in 1% TTC PBS-oplossing, pH 7,4 bij 37 ° C voor 20min. Weefsels worden gefixeerd in 10% PBS-gebufferde formaline gedurende de nacht bij 2-8 ° C. TTC wordt toegediend ex vivo te verven Evans blue-negatieve gebieden (Figuur 6). Voor histologie de muis ze worden gedood en het hart moet worden ingesloten voor verdere verwerking. Na het uitvoeren van paraffine secties, dia&#39;s gekleurd met H &amp; E (hematoxyline en eosine) of trichroom om fibrotische weefsel (figuur 7) te visualiseren. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1: tracheale tube. 1A: Exposed luchtpijp, na het ventrale cervicale incisie. 1B: Luchtpijp is geopend twee kraakbeen ringen caudaal van het strottenhoofd. 1C: Tracheale buis wordt ingebracht in de luchtpijp. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2: Het hart is blootgesteld via een linkszijdige thoracotomie, de LAD wordt geligeerd. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Figuur 3" /> Figuur 3: Na de thorax gesloten is, een pleura drain wordt uitgevoerd. De muis is nog steeds onder narcose. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Figuur 4" /> Figuur 4: Twee lijnen verschijnen na een paar minuten wanneer de troponine test positief is. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Figuur 5" /> Figuur 5: Geeft de geëxplanteerd hart. 5A: Macroscopische uitzicht op het hart met de ischemische gebied met een vervaagde witachtige kleur. 5B: Dwarsdoorsnede van het infarct hart, het ischemische gebied shows in de rechter bovenhoek.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Financiering De huidige studie werd ondersteund door het Universitair Ziekenhuis Hamburg (MK, Woman Habilitation Grant), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Research Award 2009). Verklaring Alle dieren kregen menselijke zorg in overeenstemming met de beginselen van het Laboratory Animal Care, werden experimenten op dieren uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de Nationale Vereniging voor Medisch onderzoek en de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren gepubliceerd door de National Institutes of Health (National Institutes of Health publicatie 85-23, herzien 1985). Alle dieren werden verkregen van Charles River Laboratories (Sulzfeld, Duitsland) en werden gehouden in het dier opvang van het Universitair Ziekenhuis Hamburg Eppendorf. De dieren kregen standaard chow en water ad libitum.

Kortom, deze video visualiseert de LAD-ligatie model stap-voor-stap en identificeert LAD-ligaties bij muizen zo gemakkelijk mogelijk chirurgische procedures.

lad-ligatie: een muizenmodel van myocardinfarct

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Onderzoek modellen van infarct en myocardiale ischemie zijn essentieel voor de acute en chronische pathobiological en pathofysiologische processen te onderzoeken in myocardiale ischemie en het ontwikkelen en optimaliseren van toekomstige behandeling. Twee verschillende methoden van het creëren van myocardischemie worden uitgevoerd in het laboratorium knaagdieren. De eerste methode is het creëren van cryo infarct, een snelle maar onjuist techniek, waarbij een cryo-pen wordt aangebracht op het oppervlak van het hart (1-3). Met behulp van deze methode wordt de wetenschapper kan niet garanderen dat de cryo-litteken leidt tot ischemie, ook een groot myocard letsel is ontstaan ​​dat laat zien pathofysiologische bijwerkingen die niet gerelateerd zijn aan een hartinfarct. De tweede methode is de permanente ligatie van de linker anterior descending arterie (LAD). Hier is de LAD wordt geligeerd met een enkele steek, de vorming van een ischemie dat kan vrijwel direct te zien. Door het sluiten van de LAD, is geen verdere bloedstroom toegestaan ​​in dat gebied, terwijl de omliggende myocard weefsel is bijna niet beïnvloed. Deze chirurgische procedure imiteert de pathobiological en pathofysiologische aspecten die voorkomen in infarct-gerelateerde myocardischemie. De methode die in deze video demonstreert de chirurgische procedure van een muis infarct model door het ligeren van de LAD. Dit model is handig voor pathobiological en pathofysiologische evenals immunobiologische studies over hart-infarct. De getoonde techniek biedt een hoge nauwkeurigheid en correleert goed met histologische secties.

Deze video laat zien hoe u een snelle en betrouwbare model te gebruiken om pathobiological en pathofysiologische processen van myocardischemie te bestuderen.

LAD-Ligatie: een muizenmodel van myocardinfarct

Onderzoeksmodellen voor infarct en myocardiale ischemie zijn essentieel om de acute en chronische pathobiologische en pathofysiologische processen te onderzoeken ...

Er wordt een midline cervicale incisie gemaakt om de trachea bloot te leggen en er wordt een klein gaatje in de trachea gemaakt voor de inbreng van een endotracheale tube. De muis wordt op zijn rechterzijde gelegd en er wordt een linkszijdige thoracotomie uitgevoerd tussen de derde en vierde rib. Het hart wordt blootgelegd en de LAD wordt afgebonden met een enkele hechting.Na het plaatsen van een thoraxdrain en het sluiten van de incisie wordt de thorax gedraineerd door de spuit voorzichtig leeg te zuigen. Ten slotte wordt de muis op zijn rug gelegd.De trachealtube wordt verwijderd en de trachea en de cervicale incisie worden gesloten. Hallo, ik ben Sonya Refa. Ik ben professor in de immunologie en cardiale chirurgie bij de afdeling cardiovasculaire chirurgie van het University Heart Center in Hamburg.Mijn laboratorium richt zich op de immunobiologie van stamcellen en transplantatie-immunologie. Vandaag introduceren we het LID-ligatiemodel. In ons lab gebruiken we dit model om het effect van stamceltherapie bij het herstel van het hart na een myocardinfarct te bestuderen.Ik ben KA Wan, student aan de Stanford University en summer fellow in het TSI-laboratorium van Drer. En ik ben M

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Tal van genetische manipulaties en / of intramyocardial injecties van genen, eiwitten, cellen en / of biomaterialen wordt toegevoegd aan de dimensie van de tijd in studies van de acute ischemie / reperfusie schade en chronische remodeling bij muizen. Deze video illustreert de microchirurgische procedures voor ischemie / reperfusie, permanent coronaire ligatie, en intramyocardial injectie studies.

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

De chirurgische procedure gebruikt om experimentele myocardinfarct bij de muis begint met linker thoractomie tussen de derde en vierde ribben om visualiseren het voorste oppervlak van het hart en linker long. De linker coronaire arterie geligeerd, wordt de borst gesloten en de muis mag spontaan herstellen.

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

In this video, we describe a surgical procedure to generate a mouse model of myocardial infarction by permanently ligating the left anterior descending coronary artery.

Generating Murine Model of Myocardial Infarction: A Surgical Procedure for Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery in Mouse Model

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Hartfalen is de belangrijkste oorzaak van ziekenhuisopname en een belangrijke doodsoorzaak. Een model van permanente ligatie van de linker voorste afdalende kransslagader bij muizen wordt toegepast om ventriculaire remodellering en cardiale disfunctie na een myocardinfarct te onderzoeken. De techniek van invasieve hemodynamische metingen bij muizen wordt gepresenteerd.

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

We bieden een betrouwbare methode voor ligatie van de linker voorwaartse dalende slagader (LAD) in een muismodel. Deze methode is relatief minder invasief dan andere methoden, waarbij endotracheale intubatie, een linkszijdige thoracotomie-aanpak en thoracentese betrokken zijn. Deze methode kan worden gebruikt als model voor zowel acuut als chronisch myocardinfarct (MI).

Murine Left Anterior Descending (LAD) coronaire Ligatie: een verbeterde en vereenvoudigd model voor myocardinfarct

Hierin beschrijven we een chirurgische ingreep die laat zien hoe u permanente ligatie van de linker-anterieure aflopende coronaire slagader bij muizen bereikt. Dit model is van groot belang om de pathofysiologie van myocardiaal infarct en de gelijktijdige biologische processen te onderzoeken.

Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

Hier beschrijven we een eenvoudige en reproduceerbare methode die myocardinfarct of myocardischemie-reperfusieletsel bij muizen kan induceren door precisieligatie van de linker voorste dalende kransslagader door middel van micromanipulatie.

Inductie van myocardinfarct en myocardischemie-reperfusieletsel bij muizen

Hier wordt een chirurgische procedure gepresenteerd voor permanente ligatie van de linker kransslagader bij muizen. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologie en bijbehorende ontstekingsreactie na een hartinfarct te onderzoeken.

Ligatie van de linker kransslagader: een chirurgisch muizenmodel van myocardinfarct

Murine eilandjes van Langerhans Isolatie

Leer de LAD-ligatie-techniek voor myocardinfarctonderzoek bij muizen. Deze chirurgische methode maakt betrouwbare inductie van myocardischemie mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

LAD-Ligatie: een muizenmodel van myocardinfarct

Meer video's verkennen