Name: Denatureren Ureum polyacrylamide gel elektroforese (Urea PAGE) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-29T07:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Leer denaturerende ureum polyacrylamide gelelektroforese voor het scheiden van enkelstrengs DNA of RNA fragmenten. Deze methode maakt nauwkeurige analyse van oligonucleotiden mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Singapore Academic Research Council (ARC) [subsidie ​​nummer 90/07]. Wij danken radiodurans voor de steun.

De volledige en gedetailleerde tekst protocol voor dit experimentele procedure is beschikbaar in Current Protocols in Molecular Biology. Gedetailleerde stap-voor-stap instructies voor de montage van de gel-sandwich en voor gel apparatuur is te vinden op de website van BioRad 3. Benodigde apparatuur: Glasplaten (binnenste en buitenste) 10 cm cel: 10,1 x 7,3 cm (binnenste plaat), 10,1 x 8,2 cm (buitenste plaat), BioRad 20 cm cel: 20 x 20 cm (binnenste plaat), 20 x 22,3 cm (buitenste plaat), BioRad 0,5-1,5 mm gel kam en spacers Gel gieten stand Gel apparaten met deksel en kabels Hoogspanningsvoeding Verwarmingsblok of waterbad Serologische pipetten en Pipette hulp Pipet en Pipetpunten Gel droger of een scanner Reagentia en oplossingen: Ureum (ultrapuur) 40% polyacrylamide-oplossing (29:1) 10 x TBE-oplossing (Tris-boraat, EDTA buffer) Gedeïoniseerd, gedestilleerd water TEMED 30% (w / v) ammoniumpersulfaat-oplossing 0,5 x TBE-oplossing Formamide EDTA Xyleen cyanol Broomfenolblauw Methanol Ethanol <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Volume </td><td colspan="3" style="text-align:center;"> 50 ml </td><td colspan="3" style="text-align:center;"> 60 ml </td><td colspan="3" style="text-align:center;"> 10 ml </td></tr><tr><td> Acrylamide concentratie </td><td> 10% </td><td> 12,5% </td><td> 15% </td><td> 10% </td><td> 12,5% </td><td> 15% </td><td> 10% </td><td> 12,5% </td><td> 15% </td></tr><tr><td> g ureum </td><td> 24 </td><td> 24 </td><td> 24 </td><td> 28,8 </td><td> 28,8 </td><td> 28,8 </td><td> 4.8 </td><td> 4.8 </td><td> 4.8 </td></tr><tr><td> ml 40% Acryl (29:1) </td><td> 12,5 </td><td> 15.625 </td><td> 18,75 </td><td> 15 </td><td> 18,75 </td><td> 22,5 </td><td> 2.5 </td><td> 3.125 </td><td> 3.75 </td></tr><tr><td> ul 30% APS </td><td> 166 </td><td> 166 </td><td> 166 </td><td> 199,2 </td><td> 199,2 </td><td> 199,2 </td><td> 33 </td><td> 33 </td><td> 33 </td></tr><tr><td> ul TEMED </td><td> 20 </td><td> 20 </td><td> 20 </td><td> 24 </td><td> 24 </td><td> 24 </td><td> 4 </td><td> 4 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> 10 x TBE </td><td> 5 </td><td> 5 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 6 </td><td> 6 </td><td> 1 </td><td> 1 </td><td> 1 </td></tr><tr><td colspan="10"> Vul het volume met gedeïoniseerd, gedestilleerd water </td></tr></tbody></table> Tabel 1: reagentia en oplossingen die nodig zijn voor verschillende acrylamide concentraties en volumes voor het oplossen van enkelstrengs oligonucleotiden Gel-sandwich montage en gel voorbereiding <ol><li> Monteer de gel volgens fabrikanten beschrijving en bevestig de gel in de gel-casting kamer 3. Gebruik 0,5-1,5 mm dik afstandhouders. </li><li> Maak de aangewezen polyacrylamide oplossing volgens de huidige protocollen in de moleculaire biologie of zoals vermeld in tabel 1. Voor een denaturerende acrylamide gel van 20 cm x 22 cm x 1,5 mm, 60 ml gel-oplossing en voor een 10,1 x 8,2 cm x 1 mm gel 5 ml gel-oplossing is voldoende. Grotere gels worden gebruikt als de verwachte producten / bands zich binnen het bereik van een paar bases, dan is een langere gel zal lossen bands met een verschil van een enkele nucleotide. Als de verwachte bands verschillen in meer dan 10 nucleotiden, zullen kleinere gels geschikt zijn om de fragmenten op te lossen. Kies het percentage van polyacrylamide die uw scheiding eisen voldoet, zal een hogere concentraties polyacrylamide op te lossen lager moleculair gewicht fragmenten. Gebruik ultrapure ureum en meng met de gewenste hoeveelheid acrylamide. Voeg TBE buffer om de gel mengen tot een uiteindelijke concentratie van 0,5-1 x TBE te krijgen en vullen van het volume met gedeïoniseerd, gedestilleerd water. Verwarm de oplossing gedurende 20 seconden in de magnetron en meng het. Voor grotere volumes gel herhaalt u deze stap totdat de oplossing is met de hand warm. </li><li> Giet de gel onmiddellijk met behulp van een serologische pipet en een automatische pipet steun tussen de twee glasplaten. Voorkomen dat er luchtbellen. Plaats de kam en laat de gel polymeriseren gedurende 30-60 minuten. </li></ol> Stel de elektroforese apparatuur en prerun de gel <ol><li> Demonteer de gel uit de casting kamer en montage aan de gel inrichting volgens instructies van de fabrikant 3. </li><li> Vul de onderste buffer Kamer wit loopbuffer (0,5-1 x TBE), dat de glazen platen zal onder wordenfuseerde 2-3 cm met buffer. Vul de bovenste buffer kamer naar de top van de gel met stromend buffer. </li><li> Verwijder voorzichtig de kam en spoel de putten met het runnen van buffer met behulp van een pipet en het laden van gel tips. </li><li> Bevestig het deksel van de gel-systeem en sluit de kabels aan een hoge spanning voeding. Voordat u kunt laden uw monsters moet je de gel prerun voor ten minste 30 minuten om de gel te warmen en om de resterende ureum uit de gel. De optimale temperatuur moet tussen de 45-55 ° C. Vermijd temperaturen hoger dan 60 ° C als banden kon uitstrijkje of de glazen platen kon kraken. Kies een constante watt voor de prerun (15-25 W per gel). </li></ol> Monstervoorbereiding <ol><li> In de tussentijd de voorbereiding van uw monsters. Daarom voegt de juiste hoeveelheid van 2 x gel laden mix aan je steekproef. Het laden mix bevat meestal 90% formamide, 0,5% EDTA, 0,1% xyleen cyanol en 0,1% broomfenolblauw. </li><li> Voordat de monsters kunnen worden geladen op de gel moeten de monsters worden gedenatureerd warmte door verwarming van de monsters tussen de 70-90 ° C voor een paar minuten. </li></ol> Laden en run de gel <ol><li> Wanneer de prerun klaar is, verwijder het deksel en spoel de zakken goed zoals eerder beschreven als ureum is uitgeloogd in de putten. </li><li> Zorgvuldig toepassen van de monsters van de bodem van de zak. Voorkomen dat er luchtbellen. Laadbuffer moet worden toegepast om lege zakken om gelijke voorwaarden te houden tijdens de run. </li><li> Monteer het deksel en laat de gel bij constante Watt tot een gel temperatuur van 55 ° C te houden vergelijkbaar met de prerun. Let op de migratie van de marker kleurstoffen totdat de kleurstof front bereikt de onderkant van de gel. De run duur is afhankelijk van het percentage van de gebruikte acrylamide, ionische sterkte van de buffer en de gel dikte. Een run kan duren tussen 2-4 uur. Controle van de temperatuur van de gel. Een gel thermometer kan helpen om de juiste temperatuur te controleren tijdens de run. </li></ol> Verwerk de gel <ol><li> Wanneer de kleurstof voorzijde heeft het einde van de gel bereikte de gel uit de lagere buffer kamer. Haal de gel uit de kamer en draai de klemmen. Trek de spacers en zorgvuldig huichelen de glazen platen. Indien nodig wegsnijden van de bovenste putje met gel deel. </li><li> Breng voorzichtig de gel in een schaal met gel fixatie oplossing (dezelfde concentratie van TBE plus 5-10% methanol en ethanol). Laat de gel in de oplossing voor 5-10 minuten en wijzigen van de buffer tweemaal. </li><li> De gel is klaar voor verdere verwerking met behulp van een vacuüm-gel droger of direct scannen van de gel. </li></ol>

<ol><li>Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chain+length+determination+of+small+double-+and+single-stranded+DNA+molecules+by+polyacrylamide+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis.</a> Biochemistry. 14, 3787-3794 (1975).</li>
<li>Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAlbright%2C+LM+%22Curr+Protoc+Nucleic+Acid+Chem%22">Curr Protoc Nucleic Acid Chem</a>. , (2001).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22PROTEAN+II+xi+Cell+and+PROTEAN+II+xi+2-D+Cell+Instruction+Manual%22">PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual</a>. , Biorad. (2001).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

<ol><li> De band scherpte hangt af van verschillende factoren. Het volume van het monster geladen voor een scherpe bands moet zo klein mogelijk, dat wil zeggen idealiter tussen 1-5 pl. Echter, tot en met 15 ul worden geladen die nog steeds acceptabele oplossing zorgt. Minder monstervolume resulteert in scherpere bands. </li><li> De band kwaliteit is ook afhankelijk van de dikte van gel. Dunnere gels, zoals 0,75 mm tonen betere resultaten dan 1,5 mm dik gels. </li><li> De vorm van banden kunnen ook worden beïnvloed tijdens het laden van gel, als...

denatureren ureum polyacrylamide gel elektroforese (urea page)

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE)

Ureum PAGE of denaturering ureum polyacrylamidegelelektroforese maakt gebruik van 6-8 m ureum, waar secundaire DNA of RNA-structuren gedenatureerd en wordt gebruikt voor hun scheiding in een polyacrylamide gel matrix op basis van het molecuulgewicht. Fragmenten van 2 tot 500 basen, met een lengte verschillen zo klein als een single nucleotide, kunnen worden gescheiden met behulp van deze methode 1. De migratie van het monster is afhankelijk van de gekozen acrylamide concentratie. Een hoger percentage van polyacrylamide lost een lager molecuulgewicht fragmenten. De combinatie van ureum en temperaturen van 45-55 ° C in de gel run zorgt voor de scheiding van ongestructureerde DNA of RNA-moleculen. In het algemeen is deze methode nodig om te analyseren of te zuiveren enkelstrengs DNA of RNA-fragmenten, zoals gesynthetiseerd of gelabelde oligonucleotiden of producten van enzymatische splitsing reacties. In deze video artikel tonen we hoe voor te bereiden en uit te voeren de denaturering ureum polyacrylamide gels. Technische tips zijn opgenomen, in aanvulling op het oorspronkelijke protocol 1,2.

Denaturerende ureum polyacrylamidegelelektroforese wordt gebruikt voor het enkelstrengs DNA gescheiden of tot RNA tot een limiet van 500 nucleotiden. Ureum in combinatie met de hitte gedenatureerd monsters en ongestructureerde enkele strengen migreren binnen de gel matrix op basis van hun moleculair gewicht.

Denatureren Ureum polyacrylamide gel elektroforese (Urea PAGE)

Urea-PAGE of denaturerende urea-polyacrylamidegelelektroforese maakt gebruik van 6-8 M urea, wat secundaire DNA- of RNA-structuren denatureert en wordt gebruikt voor hun ...

In het algemeen is dit type gel vereist voor het scheiden van enkelstrengs DNA- of RNA-fragmenten, zoals gesynthetiseerde of gelabelde oligonucleotiden of producten van enzymatische splitsingsreacties. Het scheidingsbereik is afhankelijk van de polyamideconcentratie; ureum in combinatie met hitte denatureert de monsters, waardoor enkelstrengs moleculen binnen de gelmatrix migreren op basis van hun molecuulgewicht. Deze video demonstreert het gieten, draaien en verwerken van een typische gel.Hallo, mijn naam is Haki. Ik ben verbonden aan de Nanyang Technological University. In deze demonstratie ga ik u laten zien hoe u een denaturerende polyacrylamidegelelektroforese uitvoert.Gebruik schone glasplaten en stel de gel-sandwich samen volgens de beschrijving van de fabrikant. Fixeer de gel in de standaardkamer voor het gieten van gellen. Behandel de glasplaten van grote gellen met een glijmiddel als de gel de neiging heeft aan de glasplaten te kleven.Kies een gelgrootte en -dikte op basis van uw scheidingsvereisten. Bereid de geloplossing volgens de huidige protocollen in de moleculaire biologie.Kies een polyamideconcentratie die aansluit bij uw scheidingsvereisten. Een hoger percentage acrylamide zorgt voor een betere resolutie van fragmenten met een lager molecuulgewicht. Gebruik Alta pure UIA en meng dit met de gewenste hoeveelheid polyacrylamide in een bekerglas of fles.Voeg 10 XTBE-buffer toe aan de oplossing en vul aan tot het vereiste volume met water. Verhit de oplossing 20 seconden in de magnetron en meng deze voorzichtig totdat alle UIA is opgelost. Indien nodig kunt u de oplossing bewaren voor grotere gelvolumes.Herhaal de stap in de magnetron totdat de oplossing handwarm is. Vermijd het te sterk verhitten van de oplossing. Verhit niet te veel, omdat uria begint af te breken boven de 60 °C.Centigrade kan worden gedetecteerd aan de geur van ammoniak. Wanneer de oplossing helder is en is afgekoeld tot ongeveer kamertemperatuur, voegt u een PS en tamid toe aan de geloplossing en mengt u dit voorzichtig. Als de geloplossing te warm is, zal de gel polymeriseren in de pipet.Giet de gel met een serologische pipette en een pipetteerkunsthulp tussen de twee glasplaten. Voorkom dat er luchtbellen ontstaan. Plaats de kam voorzichtig.Probeer te voorkomen dat er luchtbellen ontstaan en laat de gel 30 tot 60 minuten polymeriseren. Verwijder de gel uit het gietframe en bevestig deze aan de bovenste bufferkamer. Plaats de gel volgens het protocol van de fabrikant in de onderste bufferkamer en vul het onderste reservoir met gel-runbuffer, wat gewoonlijk 0,5 tot 1 XTBE is.Vul de bovenste bufferkamer met gel-loopbuffer tot aan de rand van de glasplaat, met dezelfde concentratie als voor de gel. Voordat u de monsters kunt laden, moet de gel gedurende ten minste 30 minuten worden voorgerund om de gel op te warmen en resterende ureum uit de gel te verwijderen. De optimale temperatuur moet tussen 45 en 55 °C liggen, net als bij de eigenlijke gel-run.Vermijd temperaturen boven de 60 °C, omdat banden kunnen uitvloeien of de glasplaten kunnen barsten. Verwijder voorzichtig de kam zonder de randen te verstoren en spoel de wells door om ureum te verwijderen dat erin is gelekt. Gebruik gel-laadpunten en pipetteer de vloeistof meerdere keren op en neer.Sluit voor elk systeem het deksel van het gelsysteem en sluit de kabels aan op een hoogspanningsvoeding. Kies voor het voorbereidende run een constant wattage, ongeveer 15 tot 20 watt per gel. Wanneer de voeding is ingeschakeld, duiden luchtbellen op een goede geleidbaarheid.Bereid in de tussentijd uw monsters voor door de juiste hoeveelheid van twee x gelladingsbuffer aan uw monster toe te voegen. Wanneer de pre-run is voltooid, verwijdert u het deksel en wast u de pockets grondig zoals eerder beschreven; het is zeer belangrijk om de gelpockets zorgvuldig te spoelen. Dit is nodig om ureumresten te verwijderen, aangezien ureum een dichte laag vormt die voorkomt dat het monster de gel binnendringt.Verwarm uw monster door het gedurende enkele minuten te incuberen bij ten minste 70 °C. Breng de monsters voorzichtig aan vanuit de bodem van het pocket.Voor sommige toepassingen interfereert de kleurstof met uw monster en kan dit diffuse banden veroorzaken, of de kleurstof vertoont zelf een fluorescentiesignaal. In dat geval is het nuttig om één kleurstof of alle kleurstoffen te verwijderen en de standaard kleurstofhoudende buffer te laden. In een lege put wordt een groottestandaard geladen; de hoeveelheid monster die u idealiter moet laden voor scherpe banden ligt tussen één en vijf microliters, maar u kunt ook hogere volumes tot 15 microliters laden.Een kleiner monstervolume resulteert in mooiere banden. Voorkom het ontstaan van luchtbellen en laat het monster langzaam in de pocket zakken zodat er een uniforme laag wordt gevormd. Als u een fluorescent label gebruikt, wikkel het gelsysteem dan in aluminiumfolie om blootstelling aan licht te voorkomen, wat kan leiden tot fotobleking van uw monster.Plaats het deksel en schakel de voeding in. Laat de gel lopen totdat de DIA de onderkant van de gel heeft bereikt. De looptijd is afhankelijk van het acrylamidepercentage.U kiest de ionsterkte van uw buffer, de dikte van de gel en de lengte. Een run kan tussen één en enkele uren duren. Observeer de migratie van de markers om de duur van de elektroforese te bepalen.Gebruik een constant wattage en controleer de temperatuur van de gel. Een gelthermometer kan helpen om de juiste temperatuur tijdens de run te bewaken; raadpleeg anders de handleiding van het gelapparaat zodra de run is voltooid. Schakel de voeding uit en verwijder het deksel van het gelapparaat.Haal vervolgens de gel-sandwich uit het onderste bufferreservoir. Giet de buffer uit het bovenste bufferreservoir weg. Vul een schaal met gel-fixatieoplossing.Deze oplossing moet dezelfde concentratie TB hebben en tussen de 5 tot 10% methanol en azijnzuur bevatten. Verwijder de gelsandwich uit het apparaat en maak de klemmen los. Trek de spacers weg en demonteer voorzichtig de glasplaten met behulp van een spatel. Snijd indien nodig het deel met de gel waarin de wells zich bevinden of het onderste lege gelgedeelte uit en gooi de overbodige gelstukken, zoals de banen die kleurstof bevatten, weg.Voor fluorescerende monsters wordt de gel voorzichtig van de glasplaat losgemaakt en overgebracht naar een schaal gevuld met gel-fixatieoplossing. Laat de gel vijf tot 10 minuten in de oplossing liggen en ververs de buffer twee keer. Schud de schaal voorzichtig om de ureum uit de gel te wassen of plaats de gel in een kleuringsoplossing, afhankelijk van uw toepassing.De gelkwaliteit is ook afhankelijk van de geldikte. Dunnere gels van 0,75 millimeter vertonen betere resultaten dan gels met een dikte van 1,5 millimeter, maar zijn moeilijker te hanteren. De scherpte van de banden hangt af van verschillende factoren.Een laag voltage aan het begin van de run kan helpen om strakkere banden te verkrijgen en ervoor zorgen dat het monster gelijkmatig het gelfront binnengaat, wat voorkomt dat de gelpockets inklappen door een te hoog voltage. Een korte stackinggel met een laag acrylamidepercentage kan hetzelfde effect hebben op de verscherping van de banden; de toevoeging van 10% Glycerol helpt bovendien bij het laden van de gel, zodat het monster in de pocket zakt. Breng loading buffer aan in lege pockets om gelijke omstandigheden tijdens de run te handhaven.Wanneer uw gel zich in de fixeeroplossing bevindt, kunt u de gel drogen met een vacuümgeldroger voor verdere beeldvorming, of de gel direct scannen, afhankelijk van het gebruikte label of de kleuring. Deze pagina is nuttig voor het analyseren of isoleren van enkelstrengs DNA- of RNA-monsters. Gels kunnen bij kamertemperatuur worden bewaard.Wikkel de gel daarom in keukenpapier en maak deze vochtig met water of running buffer. Plaats de ingepakte, natte gel in een afsluitbaar plastic zakje en gebruik deze binnen 48 uur. Een veelvoorkomend probleem is gel smiling.Dit komt door een ongelijkmatige warmteverdeling door de gel. Als de gel niet door buffer wordt omringd, kan het bevestigen van een metalen plaat de kwaliteit van de gel verbeteren. Hallo, ik ben Hi Kasam.Ik ben verbonden aan de Nanyang Technological University. Ik heb u laten zien hoe u een denaturerende polyacrylamidegelelektroforese uitvoert. Tot de volgende keer.

denaturing-urea-polyacrylamide-gel-electrophoresis-urea-page

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video, beschrijven we de karakterisering van multiprotein complexen (MPL), door blauwe inheemse polyacrylamide gel elektroforese (BN-PAGE). In een eerste dimensie, worden gedialyseerd cellulaire lysaten gescheiden door BN-PAGE om individuele Mediterrane partnerlanden te identificeren. In een tweede dimensie SDS-PAGE, zijn mediterrane partnerlanden van belang verder onderverdeeld naar hun kiezers te analyseren door immunoblotting.

Blauwe Inheemse polyacrylamidegelelektroforese (BN-PAGE) voor de Analyse van multiprotein complexen van Cellular Lysaten

This video demonstrates a denaturing polyacrylamide-based separation technique for proteins. This technique helps in the preliminary identification of proteins based on their molecular weights.

Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis for Protein Analysis: A Technique to Separate and Visualize Proteins Based on Molecular Weight

In this video, we demonstrate a denaturing polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of phosphorylated RNA species from their non-phosphorylated counterparts. The RNA species are fluorescently labeled for laser detection on the gel.

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis for RNA Analysis: A Technique to Separate Fluorescently Labeled Phosphorylated RNA Oligonucleotides from their Non-Phosphorylated Equivalents

In this video, we demonstrate a two-dimensional gel electrophoresis method that separates individual proteins from a complex protein mixture obtained from tumor tissues of human nonfunctional pituitary adenoma (NFPA). The proteins are separated based on their electric charge in the first dimension and further separated based on molecular weights in the second dimension.

Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis: A Separation Technique for Analysis of Proteins in Complex Protein Mixture Based on Charge and Molecular Weight

RNA polymerase II synthetiseert een precursor RNA dat buiten de 3 'uiteinde van het rijpe mRNA. Het uiteinde van het rijpe RNA cotranscriptionally gegenereerd op een plaats bepaald door RNA-sequenties, via de endonuclease activiteit van de splitsing complex. Hier hebben we detail de methode om splitsingreacties studeren in vitro.

Analyse van RNA processing Reacties Met behulp van Cell Free Systems: 3 &#39;End Splitsing van pre-mRNA Substrates<em&gt; In vitro</em

Dit artikel beschrijft een eenvoudig en snel protocol om de oligomere toestand van het dynamin-achtige GTPase MxA-eiwit uit lysaten van menselijke cellen te evalueren met behulp van een combinatie van niet-denaturerende PAGE met western blot-analyse.

Karakterisering van Multi-subunit eiwitcomplexen of Human MxA het gebruik van niet-denaturerende Polyacrylamide Gel-elektroforese

Dit protocol maakt gebruik van zowel subunit co-expressie en postlysis subunit mengen voor een grondig onderzoek van recombinant proteasoom montage.

Het onderzoeken van Proteasome Montage met Recombinant Archaea Proteasomen en denaturerende PAGE: The Case voor een gecombineerde aanpak

Hier presenteren we een gevoelige, snelle en discriminerende post-gel kleuring methode om image-ASE Tagged met RNA mango aptameren I, II, III, of IV, met behulp van een native of denaturerende Polyacrylamide gel elektroforese (pagina) gels. Na het runnen van standaard pagina gels, mango-gecodeerde RNA kan gemakkelijk worden gekleurd met TOT1-Biotine en vervolgens geanalyseerd met behulp van de meest beschikbare fluorescentie lezers.

Fluorescerende visualisatie van mango-Tagged RNA in Polyacrylamide gels via een Poststaining methode

Denaturerende gradiënt Gel Elektroforese (DGGE)

Deze video toont het protocol van een in vitro angiogenese test die recapituleert verschillende stadia van angiogenese. Time-lapse beelden van kiemen, lumen vorming, vertakking en anastomose - belangrijkste kenmerken van angiogenese - worden weergegeven.

Geoptimaliseerde fibrinegel Bead Assay voor de Studie van Angiogenese

Leer denaturerende ureum polyacrylamide gelelektroforese voor het scheiden van enkelstrengs DNA of RNA fragmenten. Deze methode maakt nauwkeurige analyse van oligonucleotiden mogelijk.

Denatureren Ureum polyacrylamide gel elektroforese (Urea PAGE)

Meer video's verkennen