Name: Monitoring Heart Functie in larvale Drosophila melanogaster Voor Fysiologische Studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-16T17:02:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Leer hartfunctie monitoren in Drosophila melanogaster larven voor fysiologisch onderzoek. Deze methoden omvatten intacte en gedisseceerde preparaten met visuele observatie, elektrische pacing en veldpotentiaalopnames.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Financiering verstrekt door de G. Ribble Fellowships van de afdeling Biologie, de Kentucky Young Researchers en het Undergraduate Education-eUreKa! Office (Univ. of KY).

<ol><li>Ashton, K., Wagoner, A. P., Carrillo, R., Gibson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+trait+loci+for+the+monoamine-related+traits+heart+rate+and+headless+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Quantitative trait loci for the monoamine-related traits heart rate and headless behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 157, 283-294 (2001).</li>
<li>Azpiazu, N., Frasch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinman+and+Bagpipe%3A+Two+homeo+box+genes+that+determine+cell+fates+in+the+dorsal+mesoderm+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Tinman and Bagpipe: Two homeo box genes that determine cell fates in the dorsal mesoderm of Drosophila.</a> Genes & Development. 7, 1325-1340 (1993).</li>
<li>Badre, N. H., Martin, M. E., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+and+behavioral+effects+of+carbon+dioxide+on+Drosophila+melanogaster+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">The physiological and behavioral effects of carbon dioxide on Drosophila melanogaster larvae.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 140, 363-376 (2005).</li>
<li>Baker, J. D., McNabb, S. L., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hormonal+coordination+of+behavior+and+physiology+at+adult+ecdysis+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The hormonal coordination of behavior and physiology at adult ecdysis in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 3037-3048 (1999).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Bodmer, R., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+homeobox-containing+gene%2C+msh-2%2C+is+transiently+expressed+early+during+mesoderm+formation+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A new homeobox-containing gene, msh-2, is transiently expressed early during mesoderm formation of Drosophila.</a> Development. 110, 661-669 (1990).</li>
<li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+activity+of+Drosophila+larvae%3A+Impedance+%26+video+microscopy+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">Monitoring activity of Drosophila larvae: Impedance & video microscopy measures.</a> Drosophila Information Service. 87, 85-87 (2004).</li>
<li>Dasari, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+influence+of+serotonin+on+the+larval+heart+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Direct influence of serotonin on the larval heart of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Physiol. B. 176, 349-357 (2006).</li>
<li>Dasari, S., Viele, K., Turner, A. C., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+p-CPA+and+MDMA+on+physiology%2C+development+and+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22European+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Influence of p-CPA and MDMA on physiology, development and behavior in Drosophila melanogaster.</a> European J. Neurosci. 26, 424-438 (2007).</li>
<li>Dowse, H., Ringo, J., Power, J., Johnson, E., Kinney, K., White, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+congenital+heart+defect+in+Drosophila+caused+by+an+action-potential+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A congenital heart defect in Drosophila caused by an action-potential mutation.</a> J. Neurogenetics. 10, 153-168 (1995).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Neurosci. 25, 271-280 (2005).</li>
<li>Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J. Neurogenetics. 18, 377-402 (2004).</li>
<li>Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+ion+channel+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of ion channel dysfunction in Drosophila.</a> Kidney International. 3, 766-771 (2000).</li>
<li>GG, G. u <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+heartbeat+in%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila.+J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of heartbeat in.</a> Drosophila. J. Neurobiol. 28, 269-280 (1995).</li>
<li>He, B., Adler, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+in+the+development+of+the+Drosophila+arista%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms in the development of the Drosophila arista.</a> Mechanisms of Development. 104, 69-78 (2001).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J. Comp. Physiol. B. 167, 89-97 (1997).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Bray, N., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+identification+of+ion+channels+central+to+the+Drosophila+cardiac+pacemaker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological identification of ion channels central to the Drosophila cardiac pacemaker.</a> J. Neurogenetics. 12, 1-24 (1998).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+heterologous+neuropeptides+are+cardioactive+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Native and heterologous neuropeptides are cardioactive in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 1, 1229-1236 (2000).</li>
<li>Johnson, E., Sherry, T., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+cardiac+pacemaker+of+Drosophila%3A+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.%2C+Systemic%2C+Environmental+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the cardiac pacemaker of Drosophila: cellular mechanisms.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem., Systemic, Environmental Physiol. 172, 227-236 (2002).</li>
<li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+standard+food+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Inform.+Serv%22%5BJournal%5D)">A new standard food medium.</a> Drosophila Inform. Serv. 34, 117-117 (1960).</li>
<li>Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+circulation+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22General+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of circulation in insects.</a> General Pharmacol. 29, 23-38 (1997).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mechanisms of Development. 118, 51-59 (2001).</li>
<li>Muller, K. J., Nicholls, J. G., Stent, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMuller%2C+KJ+%22Neurobiology+of+the+Leech%22">Neurobiology of the Leech</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 254-254 (1981).</li>
<li>Nichols, R., Kaminski, S., Walling, E., Zornik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+activity+of+a+cardioacceleratory+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulating the activity of a cardioacceleratory peptide.</a> Peptides. 20, 1153-1158 (1999).</li>
<li>Ocorr, K., Akasaka, T., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cardiac+disease+model+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Age-related cardiac disease model of Drosophila.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 128, 112-116 (2007a).</li>
<li>Ocorr, K. A., Crawley, T., Gibson, G., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+for+cardiac+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genetic variation for cardiac dysfunction in Drosophila.</a> PLoS ONE. 2, e601-e601 (2007).</li>
<li>Papaefthmiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+method+for+recording+the+electrical+activity+of+the+isolated+heart+of+the+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">An in vitro method for recording the electrical activity of the isolated heart of the adult Drosophila melanogaster.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biol. Animal. 37, 445-449 (2001).</li>
<li>Peron, S., Zordan, M. A., Magnabosco, A., Reggiani, C., Megighian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+action+potential+to+contraction%3A+Neural+control+and+excitation-contraction+coupling+in+larval+muscles+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.Physiol.+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiol%22%5BJournal%5D)">From action potential to contraction: Neural control and excitation-contraction coupling in larval muscles of Drosophila.</a> Comp. Biochem.Physiol. A: Molecular & Integrative Physiol. 154, 173-183 (2009).</li>
<li>Ponzielli, R., Astier, M., Chartier, A., Gallet, A., Therond, P., Semeriva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+tube+patterning+in+Drosophila+requires+integration+of+axial+and+segmental+information+provided+by+the+Bithorax+Complex+genes+and+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Develop%22%5BJournal%5D)">Heart tube patterning in Drosophila requires integration of axial and segmental information provided by the Bithorax Complex genes and hedgehog signaling.</a> Develop. 129, 4509-4521 (2002).</li>
<li>Sl ma, K., Farkas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+patterns+during+the+postembryonic+development+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat patterns during the postembryonic development of Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 51, 489-503 (2005).</li>
<li>St hmer, W., Roberts, W. S., Almers, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSt+hmer%2C+W+%22Single+channel+recordings%22">Single channel recordings</a>. Sakmann, B., Neher, E. The loose patch clamp, Plenum Press. New York. 123-132 (1983).</li>
<li>Wessells, R. J., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+assays+for+heart+function+mutants+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Screening assays for heart function mutants in Drosophila.</a> Biotechniques. 37, 58-66 (2004).</li>
<li>Zornik, E., Paisley, K., Nichols, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+transmitters+and+a+peptide+modulate+Drosophila+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Neural transmitters and a peptide modulate Drosophila heart rate.</a> Peptides. 20, 45-51 (1999).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;ol&gt; &lt;li&gt;Dissectie-instrumenten: Fijne #5 pincetten en fijne scharen (allemaal verkregen van Fine Science Tools (USA), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139)&lt;/li&gt; &lt;li&gt;Dissectiemicroscoop met zoomfunctie voor dissectie en het tellen van de hartslag. Deze is ook nodig voor focale stimulatie van het hart.&lt;/li&gt; &lt;li&gt;Voor extracellulaire en intracellulaire registraties wordt een samengestelde microscoop met rechtopstaande objectieven (4 x en 20X) gebruikt.&lt;br/&gt;Standaard intracellulaire versterker en A/D-bord voor online registratie naar een computer. Elektrische signalen worden online geregistreerd op een &lt;a href=&quot;http://www.adinstruments.com/products/pl3504#overview&quot; target=&quot;_blank">PowerLab/4s interface&lt;/a&gt; (ADInstruments, Australië). We gebruiken standaard &lt;a href=&quot;http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/&quot; target=&quot;_blank">software van ADInstruments genaamd Chart of Scope&lt;/a&gt;.&lt;/li&gt; &lt;li&gt;Chemicaliën: Alle zoutoplossingschemicaliën zijn verkregen van het chemische bedrijf Sigma (St. Louis, MO).&lt;/li&gt; &lt;li&gt;Voor intracellulaire registraties gebruiken we glazen capillaire buisjes (catalogus # 30-31-0 van FHC, Brunswick, ME, 04011, USA) en voor focale macropatch-registratie en stimulerende elektroden gebruiken we Kimax-51, Kimble Products Art. No. 34502, ID 0.8-1.1mm, lengte 100mm. De intracellulaire elektrode moet een weerstand hebben van 20 tot 30 mOhm. De macropatch-elektrode wordt vervaardigd door de punt van het glas af te breken nadat er met een elektroden-puller een fijne punt is gemaakt. De afgebroken punt moet een schone loodrechte breuk hebben van ongeveer 20&amp;mu;M in diameter. De punt wordt vervolgens hittegepolijst tot een binnendiameter van ongeveer 10&amp;mu;M voor de focale extracellulaire registratie. Voor de stimulerende elektrode om het hart aan te sturen gebruiken we een uiteindelijke punt van ongeveer 20-50 &amp;mu;M in diameter. De schacht van de elektrode wordt over een heating element geleid om deze ongeveer 45 graden geleidelijk te buigen. Dit resulteert in een vlakke of loodrechte elektrode-opening over de hartbuis, aangezien de hoek met de micromanipulator ongeveer nog eens 45 graden ten opzichte van het preparaat zal bedragen.&lt;/li&gt; &lt;/ol&gt;</td></tr></tbody></table>

monitoring heart functie in larvale drosophila melanogaster voor fysiologische studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Wij presenteren verschillende methoden om de hartfunctie in de larve vast te leggenDrosophilaDe benaderingen maken het mogelijk om de hartslag te meten bij zowel ongebonden als gebonden volledige larven. Voor directe controle van de omgeving rond het hart maakt een andere benadering gebruik van gedissekeerde larven en het verwijderen van de interne organen om het hart te baden in gewenste verbindingen. Het blootgelegde hart maakt het daarnaast mogelijk om membraanpotentialen te monitoren, wat inzicht kan geven in de ionische stromen gegenereerd door de myocyten en in de elektrische geleiding langs de hartbuis. Deze benaderingen hebben diverse voordelen en nadelen voor toekomstige experimenten, die verder worden besproken. De larvale hartpreparatie biedt een aanvullend model naast deDrosophilaskeletale NMJ om de rol van intracellulaire calciumregulatie op de cellulaire functie te onderzoeken. Door meer te leren over de onderliggende ionenstromen die de actiepotentialen in myocyten van verschillende soorten vormgeven, kan men hopen inzicht te krijgen in de bekende ionendysfuncties die geassocieerd zijn met specifieke genen die verantwoordelijk zijn voor diverse ziekten bij zoogdieren.

We presenten verschillende manieren om de hartfunctie in de larve van Drosophila te monitoren voor het beantwoorden van vragen over de functie van gap junctions, ionkanaalmutaties, modulatie van pacemakeractiviteit en farmacologische studies.

Monitoring Heart Functie in larvale Drosophila melanogaster Voor Fysiologische Studies

Wij presenteren verschillende methoden om de hartfunctie bij de Drosophila-larve vast te leggen. Deze benaderingen maken het mogelijk om de hartslag te meten in onbeperkte en ...

Drosophila zijn genetisch gezien zeer geschikt voor onderzoek naar de ontwikkeling en functie van het hart en de onderliggende pacemakeractiviteit. Deze procedure laat zien hoe preparaten van zowel intacte als gedisseceerde larven worden gemaakt en hoe de hartslag wordt gemonitord. Het gedisseceerde preparaat maakt daarnaast registraties van extracellulaire of intracellulaire potentialen mogelijk om de functie van ionkanalen verder te bestuderen.Hoi, ik ben Robin Cooper, docent bij de afdeling Biologie aan de University of Kentucky. Vandaag zullen mijn studenten, Ann Cooper, Kyla Ryman, Matt Ward en Easter Boku, u verschillende procedures laten zien om de hartslag in Drosophila-larven te monitoren. De volgende methode zonder fixatie wordt de 'mierenboerderij' genoemd omdat de larven binnen één brandvlak worden gevisualiseerd.Voor de beste visualisatie van de larven dient een dissectiemicroscoop te worden gebruikt met een 2x basisobjectief en een 0,5x buisobjectief voor de beste ruimtelijke resolutie en vergroting over een rechthoek van 1 centimeter bij 0,5 centimeter. Foto's en video's kunnen worden opgenomen via een camera op een oculairhouder. Om met deze methode te beginnen, plaatst u een larve met een dunne laag voedsel ertussen tussen twee objectglazen.De objectglazen worden op een afstand van 1 tot 1,5 millimeter gehouden met plastic spacers aan alle vier de zijden. Kantel het preparaat gedurende enkele minuten tussen 20 en 45 graden om de larve aan te moedigen de kop naar beneden gericht te houden. Stel de microscoopspiegel in voor het beste contrast van het hart of de twee tracheae om de hartslag te observeren.De lijmmethode is een permanente montage om larven op een glazen objectglas vast te zetten. Om te beginnen met de lijmmethode, plaats men een schoon dekglas bovenop een glazen objectglas. Breng een kleine druppel secondelijm aan op een hoek van het dekglas.Spoel de larven vervolgens af met water. Om overtollig voedsel te verwijderen, absorbeert u de vloeistof met een tissue of de hoek van een papieren handdoek. Zodra de larve grondig is afgespoeld, pakt u deze voorzichtig op met schone pincetten en plaatst u deze op het objectglas, uit de buurt van het dekglas, onder de microscoop; oriënteer de larve op zijn buik.De maag vertoont vage horizontale groeven met fijne zwarte haren. De rugzijde van de larven moet naar boven gericht zijn en vertoont twee strepen, wat de trachea zijn. Gebruik een tweede set pincetten die uitsluitend is bestemd voor het hanteren van de lijm, neem een kleine hoeveelheid van de druppel aan het uiteinde van het objectglas en breng dit aan op de hoek aan de tegenovergestelde zijde.Gebruik een minimale hoeveelheid, net genoeg om de punt van de pincet te bedekken. Pak het dier op en plaats het op de lijm, terwijl u ervoor zorgt dat het met de buikzijde naar beneden op de zwarte opening blijft.De haken moeten zich op of nabij de rand van het dekglas bevinden, samen met de mondhaken en de bruine spiraal. Ze mogen de lijm niet raken. Druk de larve voorzichtig plat.Om een testsubstantie toe te dienen, is het raadzaam om met een spuit kleine druppels nabij de kop van de larve te dispenseren. Observeer de hartslag door het aantal keren te tellen dat de spiralen per minuut pulseren. Voor langere observaties kunnen larven ter plaatse gevoed en bevochtigd worden om uitdroging te voorkomen; om een dissectieplaat te maken die onder de microscoop bruikbaar is, gebruikt u een scalpel om een gat van twee centimeter diameter in het midden van een stuk magneettape te snijden en plakt u dit op een objectglas.Gebruik dissectiepinnen die zijn gebogen en op paperclips zijn gelijmd om het vastzetten te vergemakkelijken. Plaats tijdens de dissectie een intacte larve in het derde stadium op de dissectieplaat. Met de dorsale zijde naar boven moet de trachea door de cuticula zichtbaar zijn.Plaats twee spelden in de larven aan weerszijden van de mondhaken en nog twee spelden aan weerszijden van de spiralen. Voeg vervolgens zoutoplossing toe om de larven vochtig te houden. Maak daarna een horizontale incisie bij het coddle-uiteinde, gevolgd door een longitudinale snede die langs de spiralen richting de kop van het dier moet lopen.Til één dorsale speld op en haak deze onder de cuticula. Gebruik de speld om het weefsel te spreiden. Open de lichaamsholte.Herhaal dit bij de andere drie spelden. Zodra het dier is vastgezet, worden de ingewanden verwijderd, waarbij u er zorg voor draagt de trachea of het hart niet te beschadigen. Sommige structuren, waaronder de hersenen en enkele vetlichamen, zijn aan het hart bevestigd en kunnen het beschadigen wanneer ze worden verwijderd.Laat het preparaat drie tot vijf minuten rusten in een HL drie zoutoplossing na de dissectie; intracellulaire en veldregistraties worden in dit preparaat uitgevoerd terwijl farmacologische middelen direct op het hart worden aangebracht. De totale tijd voor deze dissectiestap is drie tot zes minuten. Om elektrische pacing uit te voeren, moeten eerst focale elektroden worden gemaakt; om een focale elektrode te maken, wordt een glaselektrode over een heating element gehaald voor vlampolijsting en om een geleidelijke buiging van ongeveer 45 graden te maken. Monteer een focale elektrode, gevuld met HL drie zoutoplossing op kamertemperatuur, in de manipulator met de punt naar beneden gericht.Zorg ervoor dat de stimulatiedraad de zoutoplossing in de elektrode raakt en dat de stimulator is uitgeschakeld. Bevestig een verse hartdissectiepreparaat op de microscoop. Plaats de aarddraad in de zoutoplossing.Zorg ervoor dat u de pinnen niet aanraakt en de preparatie niet verstoort. Houd de focus op de elektrode terwijl u de manipulator gebruikt om deze naar beneden in de zoutoplossing te bewegen. Positioneer, zodra deze zich in de zoutoplossing bevindt, de tip van de elektrode met het lumen plat tegen het hart, zodat deze het hart licht aanraakt.Zodra de elektrode is geplaatst, stelt u de frequentie van de stimulator in op twee hertz met het voltage op de laagste stand. Zet de stimulator aan. Stem de frequentie af op ongeveer drie hertz en verhoog langzaam het voltage totdat de hartslag versnelt om overeen te komen met het ritme van de stimulator.Het ritme kan nu via de stimulator worden gemanipuleerd. Er kunnen verbindingen worden toegevoegd om te zien of deze de contractie of elektrische geleiding beïnvloeden. Om veldpontentiaalmetingen uit te voeren, vult u een macro-patch-registratie-elektrode met badmedium en plaatst u deze in een manipulator op een compound-microscoop.Sluit de elektrode aan op een versterker en een registratiesysteem. Gebruik de manipulator om het lumen van de elektrode boven het hart van een dissectiepreparaat te laten zakken dat aan de microscoop is bevestigd. Raak het hart zeer lichtjes aan met de tip van de elektrode.Veldregistraties kunnen nu worden uitgevoerd om veldpotentialen uit een ander gebied van het hart vast te leggen. Til de punt van de elektrode voorzichtig op en verplaats deze met de manipulator naar een nieuw gebied, en voer vervolgens opnieuw de veldpotentiaalregistraties uit. Maak nauwkeurige monitoring van de frequentie en duur van de elektrische signalen in het hart mogelijk om de transmembraanpotentialen van larvale myocyten te meten.Zorg er eerst voor dat het lumen van een scherpe elektrode, gevuld met drie molair kaliumchloride, plat tegen het hart ligt onder een hoek van ongeveer 45 graden ten opzichte van de verticale as. Wanneer de elektrode correct is gepositioneerd, raakt u het hart voorzichtig aan met de elektrodepunt en tikt u de punt in een cel. De elektrode kan opnieuw worden gebruikt mits deze niet is gebroken.Intracellulaire registraties maken het mogelijk om de ionische basis van het actiepotentiaal en de karakteristieke vormen van de potentialen te meten om de effecten van ionkanaalmutaties of kanaalmodulatoren te onderzoeken. We hebben u zojuist laten zien hoe u hartregistraties uitvoert, alsook hoe u intracellulaire potentialen en veldpotentialen meet. U kunt deze technieken gebruiken om hartafwijkingen, farmacologische manipulaties en genetische veranderingen te bestuderen.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om niet aan een gerelateerde structuur te trekken die aan het hart is bevestigd en om niet te hard te drukken met de focale elektrode. Let bij de lijmmethode er daarnaast op dat de mond of de bol niet wordt dichtgeplakt. Dat is alles.Bedankt voor het kijken en veel succes met de experimenten.

monitoring-heart-function-larval-drosophila-melanogaster-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De studie van complexe locomotorisch gedrag...

Hoge-resolutie video-Tracking van Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

Elektrofysiologische opname in de Drosophila Embryo

Techniek die nodig is voor het visualiseren van het kloppend hart in de larven en...

Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila</em

Hebben we een semi-automatische Optical Heartbeat Analysis-methode (Soha) voor het analyseren van snelle optische opnamen...

Semi-automatische Optical Heartbeat Analyse van kleine hart

Dit rapport beschrijft een methode voor het meten van Drosophila larvenactiviteit met behulp van de TriKinetics Drosophila Activiteitsmonitor. Het apparaat gebruikt infraroodstralen om bewegingen van maximaal 16 individuele dieren te detecteren. Gegevens kunnen worden geanalyseerd om bewegingsparameters weer te geven, inclusief snelheden en de posities van de dieren binnen de testkamers.

Meting van larvale activiteit in de<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Hier worden de experimentele protocollen beschreven voor het voorbereiden van Drosophila in verschillende ontwikkelingsstadia en het uitvoeren van longitudinale optische beeldvorming van Drosophila hartslagen met behulp van een aangepast systeem voor optische coherentiemicroscopie (OCM). De morfologische en dynamische veranderingen in het hart kunnen kwantitatief worden gekenmerkt door het analyseren van de structurele en functionele parameters van het hart uit OCM-beelden.

Drosophila Voorbereiding en longitudinale beeldvorming van het hart functie in vivo met behulp van Optical Coherence Microscopy (OCM)

Het protocol beschrijft een eenvoudige test om te identificeren van Drosophila melanogaster larven die hypoxie onder normale atmosferische zuurstofniveaus ondervindt. Dit protocol staat hypoxische larven te onderscheiden van andere mutanten die aantonen dat overlappende fenotypen zoals traagheid of trage groei.

Een gravende/Tunneling Assay voor het opsporen van hypoxie in Drosophila melanogaster larven

Dit protocol beschrijft een methode om vast te leggen van de aflopende elektrische activiteit van het centrale zenuwstelsel van Drosophila melanogaster zodat de kosten-efficiënte en handige testen van farmacologische agenten, genetische mutaties van neurale eiwitten, en/of de rol van onontgonnen fysiologische trajecten.

Elektrofysiologische opname van de activiteit van het centrale zenuwstelsel van derde-Instar Drosophila Melanogaster

Het huidige protocol beschrijft de generatie van Drosophila melanogaster die eNpHR2.0 of ReaChR-opsinen in het hart tot expressie brengt voor OCT-beeldvorming en optogenetische hartpacing. Gedetailleerde instructies voor Drosophila OCT beeldvorming en hartslagmodulatie, inclusief de simulatie van herstelbare hartstilstand, bradycardie en tachycardie bij levende dieren in verschillende ontwikkelingsstadia, worden gerapporteerd.

Ontwikkeling van Drosophila melanogaster modellen voor beeldvorming en optogenetische controle van de hartfunctie

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Dit protocol biedt een kader voor het beoordelen van door stress veroorzaakte gedragsveranderingen in Drosophila melanogaster. Door complementaire assays te combineren kunnen we activiteit, verkenning en besluitvorming voor individuele vliegen kwantificeren. De aanpak is flexibel en kan worden aangepast aan een breed scala aan studies die stressbiologie, metabolisme en neurogedragsfunctie onderzoeken.

Multimodale gedragsfenotypering van stress-geïnduceerde depressie-achtige toestanden bij Drosophila melanogaster

Leer hartfunctie monitoren in Drosophila melanogaster larven voor fysiologisch onderzoek. Deze methoden omvatten intacte en gedisseceerde preparaten met visuele observatie, elektrische pacing en veldpotentiaalopnames.

Monitoring Heart Functie in larvale Drosophila melanogaster Voor Fysiologische Studies

Meer video's verkennen