Name: Chronisch Salmonella Infected Muis Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Leer een chronisch Salmonella typhimurium infectiemodel bij muizen opzetten met streptomycine en sondevoeding. Deze methode maakt langdurige darmkolonisatie en gastheerresponsstudies mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de NIDDK KO1 DK075386 te verlenen en de American Cancer Society RSG-09-075-01-MBC tot Jun zon

Dit protocol omvat drie delen: bacteriecultuur, muis maagsonde, en Salmonella detectie. 1. Salmonella groei conditie. <ol><li> Bereid de Salmonella Luria-Bertani bouillon (LB) Plaat uit, incubeer bij 37 ° C gedurende de nacht. </li><li> Kies een kloon van de LB plaat en in 7 ml LB in een 12 ml tube, en schud bij 37 ° C gedurende ongeveer 5 uur. </li><li> Inoculeren 50 ml LB met 0,05 ml van een stationaire fase cultuur en incubeer bij 37 ° C zonder schudden gedurende ongeveer 18 uur. </li><li> Spin 's nachts bacteriecultuur bij kamertemperatuur met 6000 rpm gedurende 10 minuten, schorten de bacteriën in HBSS met behulp verhouding 100:3 (LB: HBSS). Bijvoorbeeld: Elke 50 ml LB cultuur worden gesuspendeerd in 1,5 ml HBSS. </li><li> Voor het dier maagsonde, verder te verdunnen de bacteriecultuur op 01:10-verhouding. Bijvoorbeeld: Elke 1,5 ml LB cultuur worden gesuspendeerd in 15 ml HBSS. </li></ol> 2. Salmonella-infectie model *. <ol><li> Bereid de streptomycine oplossing. Elke muis krijgt 7,5 mg streptomycine in 100 pi HBSS. Bijvoorbeeld, voor te bereiden in totaal 90 mg streptomycine in 1,2 ml HBSS voor 10 muizen. Altijd wat extra volume bij het opstellen van het streptomycine oplossing. </li><li> Te trekken water en voedsel 4 uur voor orale sondevoeding behandeling. </li><li> Maagsonde muizen met streptomycine met 7,5 mg van streptomycine (100 ul van HBSS voor controle muizen). Pak de huid over de muis schouder stevig met de duim en middelvinger, rek het hoofd en de hals met de wijsvinger naar de slokdarm straight te maken. Richt de bal-tip van de voeding naald langs het dak van de mond en in de richting van de rechterzijde van de achterkant van de keelholte, vervolgens voorzichtig naar beneden gaan in de slokdarm en injecteer de 100 pi oplossing. Geen weerstand zou moeten worden gevoeld. </li><li> Op 20 uur na de behandeling streptomycine, teruggetrokken water en voedsel weer voordat de muizen besmet zijn met bacteriën. </li><li> Maagsonde elke muis met 100 ul schorsing in HBSS of behandeld met steriele HBSS (controle) door orale sondevoeding. De maagsonde procedure is hetzelfde als 2.3) maagsonde muizen met streptomycine. </li></ol> * Dierproeven werden uitgevoerd door het gebruik van specifieke-pathogeen-vrije vrouwelijke C57BL / 6 muizen (Taconic, Hudson, NY) die 6-7 weken oud zijn als eerder beschreven 1. Het protocol werd goedgekeurd door de Universiteit van Rochester University Comite voor de Resources (UCAR). 3. Detectie van Salmonella in de darmen. <ol><li> Verzamel muis fecale (ongeveer 100 mg). </li><li> Overdracht fecale monster tot een 1,5 micro-centrifugebuis met 1 ml PBS en vortex krachtig. </li><li> Centrifugeer gedurende 10 min bij 800 rpm. Breng de bovenstaande in een schone microfugebuis. </li><li> Centrifugeren bij 6000 rpm voor 5min. Supernatans verwijderd en 200 pi PBS wordt toegevoegd aan de pellets en gevortexed. </li><li> Streak de 200 ul PBS met een wegwerp cel spreader op een BBL CHROMagar plaat om Salmonella te detecteren. Salmonella species verschijnen mauve (steeg tot paars, zie figuur 1). Als 200 ul levert te veel kolonies op de plaat, gebruikt 100 ul of 50 ul voor de streep. </li></ol> 4. Representatieve resultaten. Wanneer het protocol goed wordt gedaan, kan Salmonella typhimurium kolonisatie worden gedetecteerd in de muis darm meer dan 6 maanden. Salmonella kan worden gedetecteerd door fecale cultuur meer dan 6 maanden (Fig.1). Als een typische komen van dit model, body weegt verlies en dood binnen 4 weken na infectie. Afhankelijk van de Salmonella-stammen gebruikt voor infectie, kunnen sommige muizen geen overleven meer dan 6 maanden. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Intestinale Salmonella in de Salmonella species verschijnen mauve (roze tot paars) in kleur, als gevolg van metabole verschillen in de aanwezigheid van de gekozen chromogenen. Andere bacteriën zijn ofwel geblokkeerd of produceren blauw-groen of kleurloze kolonies. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Survival proporties van muizen die besmet zijn met Salmonella mutante stam PhoP c, c PhoP Avra-, en PhoP c AvrA-/AvrA +, PhoP c Avra gedurende 4 weken (28 dagen). Tabel 1. Lichaamsgewicht van muizen die besmet zijn met Salmonella gedurende 4 weken. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 week </td><td> 2 weken </td><td> 3 weken </td><td> 4 week </td></tr><tr><td> controle </td><td> 16.78 ± 1.05 </td><td> 16.91 ± 1.28 </td><td> 18.26 ± 1.23 </td><td> 19.31 ± 1.26 </td><td> 20.26 ± 1.15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16.89 ± 1.03 <td> 17.14 ± 1.19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18.68 ± 1.78 </td><td> 20.05 ± 1.11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16.91 ± 1.12 </td><td> 16.96 ± 1.39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18.71 ± 2.18 </td><td> 20.15 ± 1.56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16.94 ± 0.96 </td><td> 17.17 ± 1.02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18.44 ± 2.03 </td><td> 20.09 ± 1.17 </td></tr></tbody></table> * In vergelijking met de controlegroep p &lt;0,05 ** Ten opzichte van de groep p &lt;0,01 controle Tabel 2. Salmonella-stammen die in deze studie. <table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Beschrijving </td><td> Referentie of bron </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Wild-type S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Niet-pathogene complex regulator mutant </td><td> Miller et al.., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-mutatie </td><td> Collier-Hyams et al.., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c Avra-met aangevuld plasmide coderend voor Avra </td><td> Collier-Hyams et al.., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Voor het gebruik van dit systeem, is het noodzakelijk dat de onderzoeker om te leren hoe de dieren maagsonde. We detail een methodiek voor te bereiden bacteriecultuur en maagsonde de muizen. We hebben ook laten zien hoe je de Salmonella persistentie in de gastro-intestinale (GI) stelsel te controleren. De kritische stappen in dit protocol, waaronder: <ol><li> Streptomycine-voorbehandeling: streptomycine-voorbehandeling kan ontdoen van een aantal commensale darmflora en maken de muizen gevoelig zijn voor de ...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani bouillon</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Voedingsnaald</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Wegwerpcelspreiders</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

chronisch salmonella infected muis model

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

De bacteriële infectie muis model is een krachtig modelsysteem voor de bestudering van gebieden, zoals infecties, ontstekingen, immunologie, signaaltransductie, en tumorigenese. Veel onderzoekers hebben gebruik gemaakt van de colitis veroorzaakt door<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium voor de studies op de vroege fase van de ontsteking en infectie. Echter, slechts weinig rapporten zijn op de chronische infectie<em&gt; In vivo</em&gt;. Muizen met<em&gt; Salmonella</em&gt; Aanhoudende bestaan ​​in het maag-darmkanaal kunnen we op de lange termijn gastheer-bacteriële interactie, signaaltransductie, en tumorigenese te verkennen. We hebben een chronische bacteriële infectie muismodel met<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium kolonisatie in de muis darm meer dan 6 maanden. Voor het gebruik van dit systeem, is het noodzakelijk dat de onderzoeker om te leren hoe de bacteriële cultuur voor te bereiden en maagsonde de dieren. We detail een methodiek voor te bereiden bacteriecultuur en maagsonde muizen. We hebben ook laten zien hoe je de sporen<em&gt; Salmonella</em&gt; Persistentie in het maagdarmkanaal. In het algemeen zal dit protocol hulp onderzoekers met behulp van de bacteriële infectie muismodel van fundamenteel belang biologische en microbiologische vragen te beantwoorden.

Stel een chronische bacteriële infectie muismodel met persisterende<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium kolonisatie in de darm voor 27 weken.

Chronisch Salmonella Infected Muis Model

Het bacteriëlinfectiemodel bij muizen is een krachtig modelsysteem voor het bestuderen van gebieden zoals infectie, inflammatie, immunologie, signaaltransductie en ...

Het algemene doel van deze procedure is het opzetten van een chronisch met salmonella geïnfecteerd muismodel. Dit wordt bereikt door eerst een salmonella-oplossing te bereiden. De tweede stap van de procedure is het toedienen van streptomycine via een sonde aan de muizen, gevolgd door salmonella of enkel streptomycine.De derde stap van de procedure is het isoleren van salmonella uit de feces van muizen en het detecteren van een salmonellainfectie in de darm van de muis met behulp van BL chroma-platen. De laatste stap van de procedure is het observeren en registreren van de lichaamsmassa van de muis en het noteren van veranderingen in de vitaliteit na de salmonellainfectie. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die aantonen dat een salmonellainfectie kan worden vastgesteld in de darm van muizen die via gavage met salmonella zijn behandeld.Hoi, ik ben Michelle P uit het laboratorium van Dr. Johnson van de afdeling Geneeskunde aan de University of Rochester. Ik ben ook van het Sun Lab en ik ben Y van het Sun Lab. Vandaag laten we u een procedure zien voor het opzetten van een Alytic Lennar-geïnfecteerd massamodel.Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om signaaltransductie bij interacties tussen gastheer en bacteriën en tumorigenese te bestuderen. Laten we beginnen. Bereid vóór de experimenten voldoende Luria-Bertani- of LB-bouillonplaten voor voor elke Salmonella-stam die gedurende het experiment wordt gebruikt.De platen kunnen worden gekoeld en gedurende enkele maanden worden bewaard. Bereid vervolgens de salmonellacultuur. Haal een vial met stock-salmonella die is ingevroren bij minus 80 degrees Celsius uit de vriezer en laat deze ontdooien op het aanrecht om de salmonella uit te platen.Verhit een inoculatieoef in een Bunsenbrander en dip deze in de ontdooide bacteriële stok. Beweeg de lus in een zigzagpatroon heen en weer over het bovenste derde deel van de LB-plaat. Verhit de lus opnieuw en roteer de plaat.Beweeg de loot in een zigzagpatroon over de voorgaande strepen om de bacteriën over het tweede derde deel van de plaat te verspreiden. Herhaal dit nogmaals. Vlam de loot opnieuw af.Zorg dat de entlus niet in de agar dringt. Laat de kolonies groeien door de platen gedurende één nacht in een incubator bij 37 °C te bewaren. Bij een correcte uitvoering moet de salmonella-plaat in ten minste één sectie individuele kolonies vertonen.De volgende dag. Selecteer een kloon van de LB-plaat met een steriel tandenstoker of een bacteriële lus en breng deze over in zeven milliliter LB in een buis van 12 milliliter. Schud de buis gedurende ongeveer vijf uur bij 37 °C.Gebruik 0,05 milliliters van deze cultuur voor inoculatie van 50 milliliters LB in een Falcon-buis. Incubeer gedurende ongeveer 18 uur bij 37 graden Celsius zonder schudden.Centrifugeer de overnight-bacteriecultuur van 50 milliliter bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten bij 5.000 RPM en verwijder het supernatant. Voeg vervolgens 1,5 milliliter Hank's gebufferde zoutoplossing of HBSS toe aan de buis om de bacteriën te resuspenderen, oftewel een verhouding van 100 delen LB tegenover drie delen HBSS. Breng daarna het totale volume aan met HBSS aan tot 15 milliliter, oftewel een verhouding van 1 op 10 LB ten opzichte van HBSS.Elke muis vereist 100 µL verdunde salmonellacultuur, of tussen 1 × 10⁶ en 1 × 10⁸ colony forming units vóór aanvang van de gavage; onttrek vier uur vóór het experiment water en voedsel aan de muizen. Bereid vervolgens direct vóór de gavage een streptomycine-oplossing door 7,5 mg streptomycinepoeder te verdunnen in 100 µL HBSS. Zorg ervoor dat er voor elke geïnjecteerde muis een extra volume wordt bereid om rekening te houden met verlies vóór de gavage bij de muis.Bereid eerst een voedingsnaald voor met 100 µL streptomycine-oplossing. Haal de eerste muis uit de kooi voor de gavage en houd de muis met de kop richting het werkblad. Pak de huid over de schouder van de muis stevig vast met de duim en middelvinger, en strek de kop en nek met de wijsvinger om de slokdarm recht te maken.Richt de bolvormige punt van de voedingsnaald langs het gehemelte en naar de rechterkant van de achterzijde van de farynx. Voer de naald vervolgens voorzichtig door naar de slokdarm en injecteer de 100 µL streptomycine-oplossing. Er mag geen weerstand gevoeld worden.Herhaal dit proces voor alle experimentele en controlemuizen die aan het experiment deelnemen. Ongeveer 20 uur na de strp de m en gavage, en vier uur vóór de salmonella-gavage, wordt het water en voer weggenomen bij de muizen die oraal een salmonella-gavage zullen ontvangen. Dien bij elke muis op dezelfde wijze als voorheen een gavage toe, gebruikmakend van 100 µL salmonella-oplossing in HBSS.Plaats na de gavage elke muis in een nieuwe kooi om te beginnen met de verzameling van feces. Verwijder vanaf ongeveer acht uur na de gavage de ontlasting onmiddellijk na het uitscheiden uit de kooi. Verzamel 100 milligrams muisontlasting als experimenteel monster.Verzamel dagelijks of wekelijks monsters, afhankelijk van de studieduur, voor de analyse van salmonella in fecaliën. Overbreng het fecale monster naar een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter met één milliliter PBS, vortex krachtig en centrifugeer gedurende 10 minuten bij 800 RPM. Overbreng de supernatant naar een schone buis van 1,5 milliliter en centrifugeer bij 6.000 RPM gedurende vijf minuten.Verwijder het supernatant en voeg 200 µL PBS toe aan de pellets; vortex om te resuspenderen. Detecteer vervolgens salmonella met een BB l roag-plaat. Gebruik 10 tot 100 µL van de fecesoplossing per plaat en verspreid dit op de plaat zoals weergegeven in sectie twee.De salmonellasoorten vertonen een paarse kleur vanwege metabole verschillen in de aanwezigheid van geselecteerde chromogenen. Tel de salmonellakolonies op de plaat om het infectieniveau tussen individuele muizen te vergelijken. In deze experimentele procedure hebben we gebruikgemaakt van specifieke pathogeenvrije vrouwelijke C 57 black six muizen die zes tot zeven weken oud waren.Muizen werden geïnfecteerd met salmonella en streptomycine plus HBSS. De controlemuizen kregen via een sonde enkel streptomycine. De gebruikte salmonellastammen omvatten de salmonella typhimurium wildtype-stam, A TCC 1 4 0 2 8 S FP C, een niet-pathogene salmonellamutantstam en drie FPC-stammen uit het laboratorium van Dr. James Madera die het virulentie-geassocieerde AAV R age-gen dragen in PSKW 29, een low-copy plasmide. Met dit protocol kan de kolonisatie van salmonella tyrian in de darm van de muis worden gedetecteerd.Chronische salmonellainfectie werd gemeten via analyse van de feces en er werden monsters van het lichaamsgewicht en het darmweefsel verzameld voor immunofluorescentiekleuring. Gewoonlijk treden gewichtsverlies en sterfte op binnen vier weken na infectie. De overlevingspercentages vier weken na infectie worden hier weergegeven.Zodra de muizen de eerste vier weken na infectie overleven, komen zij aan in lichaamsgewicht en neemt het aantal sterfgevallen af gedurende de resterende 23 weken. Over het algemeen kunnen meer dan 65% van de muizen die geïnfecteerd zijn met salmonellastammen, FSY fsy, A VRA null of fsy. A VRA heterozygoot, meer dan zes maanden overleven met een persistente salmonellainfectie in de darmen.Na de acute infectie droegen de overlevers nog steeds salmonella bij zich, wat zes maanden na de infectie kon worden aangetoond met de methode die in dit protocol wordt beschreven. Immunofluorescentie-analyse van weefselmonsters uit de muizenintestijn laat de invasie van salmonella in het darmslijmvlies zien op 27 weken na de infectie. In deze afbeelding zijn de kernen blauw gekleurd en de salmonella-infecties worden in het groen weergegeven.Zoals in de controlegroep te zien is, is er geen heldergroene kleuring aanwezig, wat duidt op de afwezigheid van salmonellakolonisatie. Daarentegen is er bij de met salmonella geïnfecteerde muizen 27 weken na infectie wel heldergroene kleuring zichtbaar in het darmslijmvlies. Dit toont de persistentie van de salmonellainfectie aan bij de met streptomycine voorbehandelde muis.We hebben zojuist gedemonstreerd hoe een chronische infectie kan worden geïnduceerd in het muismodel. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat de kweek vers moet worden voorbereid voor de inoculatie, dat de juiste inoculatietechnieken worden toegepast en dat de aanwezigheid van ANA wordt aangetoond om er zeker van te zijn dat uw experimentele model correct functioneert. Dat is alles.Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Source: Lo, B. C., et al. Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the quantification of bacterial load in a mouse model of chronic infection with streptomycin-resistant Salmonella typhimurium. Following euthanasia and sterile dissection, cecal and splenic tissues are harvested, homogenized with steel beads to release bacteria, and serially diluted. Dilutions are plated on selective agar, and visible colonies are counted to estimate...

Quantification of Tissue Bacterial Load in a Mouse Model of Chronic Intestinal Infection

Source: Lenhard, A., et al. A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the processing of lungs from a mouse co-infected with a pathogenic bacterium and a virus. Mincing, homogenizing, and plating the lung tissue allows quantification of bacterial load, indicating bacterial spread to the lungs and disease severity.

Processing of Infected Tissues for Bacterial Enumeration in a Mouse Co-Infection Model

Citrobacter rodentium infectie biedt een waardevol model voor enterische bacteriële infecties te bestuderen, evenals het hosten immuunreacties en colitis bij muizen. Dit protocol beschrijft de meting van de barrière integriteit, pathogeen belasting en histologische schade waardoor de grondige karakterisering van pathogeen en gastheer bijdragen aan murine infectieuze colitis.

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

Dit document beschrijft een nieuwe werkwijze voor orale infectie van muizen...

Mondelinge transmissie van<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In Muizen via inname van besmet voedsel

Diermodellen hebben bewezen waardevolle instrumenten definiëren gastheer en pathogeen specifieke mechanismen die bijdragen aan de ontwikkeling van chronische ontsteking. Hier beschrijven we een muismodel van orale infectie met het humaan pathogeen Porphyromonas gingivalis en detail methoden om de progressie van inflammatie lokale en systemische plaatsen.

Een muismodel voor pathogenen geïnduceerde Chronische ontsteking op lokale en systemische sites

Dit protocol beschrijft de cefoperazon muismodel van Clostridium difficile infectie (CDI) met een klinisch relevante en genetisch handelbaar stam, R20291. Nadruk op klinische ziekte monitoring, C. difficile bacteriële opsomming, toxine cytotoxiciteit en histopathologische veranderingen in heel CDI in een muismodel worden beschreven in het protocol.

-Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

Dit protocol biedt de nodige maatregelen treffen en evalueren van neonatale sepsis in 7 dagen oude muizen.

Een gecontroleerde muismodel voor neonatale Sepsis van de Polymicrobial

Dit protocol beschrijft een muismodel van door salmonella gedreven intestinale fibrose dat lijkt op belangrijke pathologische kenmerken van de ziekte van Crohn, waaronder Transmurale ontsteking en fibrose. Deze methode kan worden gebruikt om gastheerfactoren te evalueren die fibrotische uitkomsten veranderen met Mutant muizen gehandhaafd op een C57Bl/6 genetische achtergrond.

Chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose

Dit protocol beschrijft de inductie van Gram-negatieve monobacteriële sepsis in een muismodelsysteem. Het model is nuttig bij het onderzoeken van de inflammatoire en dodelijke gastheerreacties tijdens sepsis.

Karakterisering van Salmonella Typhimurium-geïnduceerde septische peritonitis bij muizen

Dit artikel beschrijft een nieuw muismodel voor de overgang van pneumokokken van een asymptomatische kolonisator naar een ziekteverwekkende ziekteverwekker tijdens virale infectie. Dit model kan gemakkelijk worden aangepast om polymicrobiële en gastheer-pathogeen interacties te bestuderen tijdens de verschillende fasen van ziekteprogressie en tussen verschillende gastheren.

Een muismodel voor de overgang van Streptococcus pneumoniae van kolonisator naar pathogeen bij virale co-infectie vat leeftijdsverergerde ziekte samen

Leer een chronisch Salmonella typhimurium infectiemodel bij muizen opzetten met streptomycine en sondevoeding. Deze methode maakt langdurige darmkolonisatie en gastheerresponsstudies mogelijk.

Chronisch Salmonella Infected Muis Model

Meer video's verkennen