Name: Selectie van Aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van Alzheimer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 23 s
Description: Leer de selectie van RNA-aptameren voor amyloïde β-eiwit met behulp van in-vitro-evolutiemethoden. Deze techniek biedt mogelijkheden voor diagnostische en therapeutische toepassingen bij de ziekte van Alzheimer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies AG030709 van NIH / NIA en 07-65798 van het California Department of Public Health. Wij erkennen Margaret M. Condron voor peptide synthese en aminozuur analyse, dr. Elizabeth F. Neufeld voor het helpen en ondersteunen van de eerste stappen van het project, Dr Chi-Hong Chen B. voor het verlenen van steun en reagentia, en Dr Andrew D . Ellington voor nuttige discussies.

<ol><li>Monien, B. H., Apostolova, L. G., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+diagnostics+and+therapeutics+for+Alzheimer%27s+disease-how+early+can+we+get+there%5BTitle%5D)+AND+%22Expert.+Rev.+Neurother%22%5BJournal%5D)">Early diagnostics and therapeutics for Alzheimer's disease-how early can we get there.</a> Expert. Rev. Neurother. 6, 1293-1306 (2006).</li>
<li>Nestor, P. J., Scheltens, P., Hodges, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+early+detection+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in the early detection of Alzheimer's disease.</a> Nat. Med. 10, S34-S41 (2004).</li>
<li>Kawas, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Early+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Early Alzheimer's disease.</a> N. Engl. J. Med. 349, 1056-1063 (2003).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+%CE%B2-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid β-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>Kirkitadze, M. D., Bitan, G., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradigm+shifts+in+Alzheimer%27s+disease+and+other+neurodegenerative+disorders%3A+the+emerging+role+of+oligomeric+assemblies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Paradigm shifts in Alzheimer's disease and other neurodegenerative disorders: the emerging role of oligomeric assemblies.</a> J. Neurosci. Res. 69, 567-577 (2002).</li>
<li>Rahimi, F., Shanmugam, A., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-function+relationships+of+pre-fibrillar+protein+assemblies+in+Alzheimer%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Alzheimer+Res%22%5BJournal%5D)">Structure-function relationships of pre-fibrillar protein assemblies in Alzheimer's disease and related disorders.</a> Curr. Alzheimer Res. 5, 319-341 (2008).</li>
<li>Jayasena, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamers%3A+an+emerging+class+of+molecules+that+rival+antibodies+in+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Aptamers: an emerging class of molecules that rival antibodies in diagnostics.</a> Clin. Chem. 45, 1628-1650 (1999).</li>
<li>Bunka, D. H., Stockley, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamers+come+of+age+-+at+last%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Aptamers come of age - at last.</a> Nat. Rev. Microbiol. 4, 588-596 (2006).</li>
<li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li>
<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment%3A+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li>
<li>Lee, J. F., Stovall, G. M., Ellington, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer+therapeutics+advance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aptamer therapeutics advance.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 10, 282-289 (2006).</li>
<li>Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+specifically+interact+with+the+prion+protein+PrP%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers specifically interact with the prion protein PrP.</a> J. Virol. 71, 8790-8797 (1997).</li>
<li>Bibby, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+novel+in+vitro+selection+technique+to+isolate+and+characterise+high+affinity+DNA+aptamers+binding+mammalian+prion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Application of a novel in vitro selection technique to isolate and characterise high affinity DNA aptamers binding mammalian prion proteins.</a> J. Virol. Methods. 151, 107-115 (2008).</li>
<li>Rhie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+2%27-fluoro-RNA+aptamers+that+bind+preferentially+to+disease-associated+conformations+of+prion+protein+and+inhibit+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of 2'-fluoro-RNA aptamers that bind preferentially to disease-associated conformations of prion protein and inhibit conversion.</a> J. Biol. Chem. 278, 39697-39705 (2003).</li>
<li>King, D. J., Safar, J. G., Legname, G., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioaptamer+interactions+with+prion+proteins%3A+sequence-specific+and+non-specific+binding+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Thioaptamer interactions with prion proteins: sequence-specific and non-specific binding sites.</a> J. Mol. Biol. 369, 1001-1014 (2007).</li>
<li>Proske, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-protein-specific+aptamer+reduces+PrPSc+formation%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Prion-protein-specific aptamer reduces PrPSc formation.</a> ChemBioChem. 3, 717-725 (2002).</li>
<li>Murakami, K., Nishikawa, F., Noda, K., Yokoyama, T., Nishikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-bovine+prion+protein+RNA+aptamer+containing+tandem+GGA+repeat+interacts+both+with+recombinant+bovine+prion+protein+and+its+%CE%B2+isoform+with+high+affinity%5BTitle%5D)+AND+%22Prion%22%5BJournal%5D)">Anti-bovine prion protein RNA aptamer containing tandem GGA repeat interacts both with recombinant bovine prion protein and its β isoform with high affinity.</a> Prion. 2, 73-80 (2008).</li>
<li>Luhrs, T., Zahn, R., Wuthrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+formation+by+recombinant+full-length+prion+proteins+in+phospholipid+bicelle+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Amyloid formation by recombinant full-length prion proteins in phospholipid bicelle solutions.</a> J. Mol. Biol. 357, 833-841 (2006).</li>
<li>Bunka, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+RNA+aptamers+specific+for+amyloid+fibril+epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of RNA aptamers specific for amyloid fibril epitopes.</a> J. Biol. Chem. 282, 34500-34509 (2007).</li>
<li>Ylera, F., Lurz, R., Erdmann, V. A., Furste, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+RNA+aptamers+to+the+Alzheimer%27s+disease+amyloid+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Selection of RNA aptamers to the Alzheimer's disease amyloid peptide.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 290, 1583-1588 (2002).</li>
<li>Rahimi, F., Murakami, K., Summers, J. L., Chen, C. H., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+generated+against+oligomeric+A%CE%B240+recognize+common+amyloid+aptatopes+with+low+specificity+but+high+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers generated against oligomeric Aβ40 recognize common amyloid aptatopes with low specificity but high sensitivity.</a> PLoS ONE. 4, e7694-e7694 (2009).</li>
<li>Bitan, G., Lomakin, A., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+%CE%B2-protein+oligomerization%3A+prenucleation+interactions+revealed+by+photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Amyloid β-protein oligomerization: prenucleation interactions revealed by photo-induced cross-linking of unmodified proteins.</a> J. Biol. Chem. 276, 35176-35184 (2001).</li>
<li>Rahimi, F., Maiti, P., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins+%28PICUP%29+applied+to+amyloidogenic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Photo-induced cross-linking of unmodified proteins (PICUP) applied to amyloidogenic peptides.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li>
<li>Bitan, G., Fradinger, E. A., Spring, S. M., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxic+protein+oligomers-what+you+see+is+not+always+what+you+get%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">Neurotoxic protein oligomers-what you see is not always what you get.</a> Amyloid. 12, 88-95 (2005).</li>
<li>Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+study+of+metastable+amyloidogenic+protein+oligomers+by+photo-induced+cross-linking+of+unmodified+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Structural study of metastable amyloidogenic protein oligomers by photo-induced cross-linking of unmodified proteins.</a> Methods Enzymol. 413, 217-236 (2006).</li>
<li>Chen, C. H., Chernis, G. A., Hoang, V. Q., Landgraf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+heregulin+signaling+by+an+aptamer+that+preferentially+binds+to+the+oligomeric+form+of+human+epidermal+growth+factor+receptor-3%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Inhibition of heregulin signaling by an aptamer that preferentially binds to the oligomeric form of human epidermal growth factor receptor-3.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 9226-9231 (2003).</li>
<li>Adams, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+DS+%22Lab+math%3A+a+handbook+of+measurements%2C+calculations%2C+and+other+quantitative+skills+for+use+at+the+bench%22">Lab math: a handbook of measurements, calculations, and other quantitative skills for use at the bench</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2003).</li>
<li>Gopinath, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+developed+for+SELEX%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Methods developed for SELEX.</a> Anal. Bioanal. Chem. 387, 171-182 (2007).</li>
<li>Takahashi, T., Tada, K., Mihara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+aptamers+selected+against+amyloid+%CE%B2-peptide+%28A%CE%B2%29+inhibit+the+aggregation+of+A%CE%B2%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biosyst%22%5BJournal%5D)">RNA aptamers selected against amyloid β-peptide (Aβ) inhibit the aggregation of Aβ.</a> Mol. Biosyst. 5, 986-991 (2009).</li>
</ol>

Het uitgangspunt van het SELEX proces is de synthese van een willekeurige oligonucleotide bibliotheek meestal met daarin 10 12 -10 15 sequenties. In DNA SELEX, deze bibliotheek direct wordt gebruikt na een ssDNA pool wordt gegenereerd, terwijl in RNA SELEX, toonde hier, is het ssDNA bibliotheek eerst omgezet in een RNA-pool enzymatisch door in-vitro transcriptie. Vervolgens wordt SELEX iteratief uitgevoerd, waarbij elke cyclus bestaat uit de belichting en binding van oligonucleotiden aan h...

<table><tbody><tr><td>A&amp;#946;40</td><td>UCLA Biopolymerlaboratorium</td><td></td><td>Gevriesdroogd poeder</td></tr><tr><td>MX5 Automated-S Microbalance</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>met silicium gecoate buisjes van 1,6 ml</td><td>Denville Scientific</td><td>C19033 of C19035</td><td></td></tr><tr><td>1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanol (HFIP)</td><td>TCI America</td><td>H0424</td><td>Gebruik in een zuurkast.</td></tr><tr><td>Ammoniumpersulfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7460</td><td>Vortex tot de oplossing helder is. APS wordt elke keer vers bereid en dient binnen 48 uur te worden gebruikt.</td></tr><tr><td>Tris(2,2'-bipyridyl)dichlororuthenium(II)hexahydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>224758-1G</td><td>Vortex tot de oplossing helder is. Bedek de RuBpy-buis met folie om het reagens te beschermen tegen omgevingslicht. RuBpy wordt elke keer vers bereid en moet binnen 48 uur worden gebruikt.</td></tr><tr><td>Dithiothreïtol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>D-Zout&amp;#8482; Excellulose&amp;#8482; ontzoutingskolommen</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>20449</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumacetaat</td><td>Fisher Scientific</td><td>A637-500</td><td></td></tr><tr><td>met silicium gecoate buisjes van 0,6 ml</td><td>Denville Scientific</td><td>C19063</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine-gels (10&amp;#8211;20%)</td><td>Invitrogen</td><td>EC6625B0X</td><td>10-well; mini formaat (8 cm X 8 cm); 25 &amp;#x03BC;laadvolume per put; scheidingsbereik 5 kDa tot 40 kDa</td></tr><tr><td>Kwarts cuvette</td><td>Hellma</td><td>105.250-QS</td><td></td></tr><tr><td>Beckman DU 640 spectrophotometer</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssDNA-bibliotheek</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Op maat besteld</td><td>De bibliotheek was zo ontworpen dat deze 49 willekeurige nucleotiden bevatte, geflankeerd door twee constante regio's met primerbindingsplaatsen en kloonplaatsen: 5&amp;rsquo;-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA ATT CCG CGT GTG C (N:25:25:25:25%) (N)&lt;sub&gt;49&lt;/sub&gt; 5'-G TCC GTT CGG GAT CCT-3'&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Taq DNA-polymerase</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71160</td><td>Recombinant &lt;em&gt;Thermus aquaticus&lt;/em&gt; DNA-polymerase geleverd met 10&amp;#215; PCR-buffer en een aparte buis met 25 mM MgCl2&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; voor routinematige PCR.</td></tr><tr><td>PCR-nucleotidemix, 10 mM oplossing</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>77212</td><td>(elk 10 mM dATP, dCTP, dGTP, dTTP)</td></tr><tr><td>Forward primer</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Op maat besteld</td><td>5&amp;rsquo;-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA ATT CCG CGT GTG C-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Reverse primer</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>Op maat besteld</td><td>5&amp;rsquo;-GAG GAT CCC GAA CGG AC-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td>Denville Scientific</td><td>Techne TC-312</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit (50)</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Denville Scientific</td><td>CA3510-8</td><td></td></tr><tr><td>Conische, steriele 1,6-ml buisjes met dopjes voorzien van O-ringen</td><td>Denville Scientific</td><td>C19040-S</td><td></td></tr><tr><td>RiboMAX&amp;#8482; Systeem voor grootschalige RNA-productie&amp;#8211;T7</td><td>Promega Corp.</td><td>P1300</td><td>De kit bevat: 120 &amp;#x03BC;Enzymenmengsel (RNA-polymerase, recombinant RNasin)&amp;#174; ribonucleaseremmer en recombinant anorganisch pyrofosfatase); 240 &amp;#x03BC;l transcriptiebuffer 5; 100 &amp;#x03BC;elk van de 4 rNTP's, 100 mM; 110 U RQ1 RNase-vrije DNase, 1 U/&amp;#x03BC;l; 10 &amp;#x03BC;lineair controle-DNA, 1 mg/ml; 1 ml 3M natriumacetaat (pH 5,2); 1,25 ml nucleasevrij water</td></tr><tr><td>&amp;alpha;-&lt;sup&gt;32&lt;/sup&gt;P-cytidine 5&amp;rsquo;-trifosfaat, 250 &amp;mu;Ci (9,25 MBq), </td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>BLU008H250UC</td><td>Specifieke activiteit: 3000 Ci (111 TBq)/mmol, 50 mM tricine (pH 7,6)</td></tr><tr><td>Citraat-verzadigd fenol:chloroform:isoamylalcohol (125:24:1, pH 4,7)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>77619</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform:isoamylalcohol (24:1)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0549</td><td></td></tr><tr><td>Absoluut ethanol voor moleculaire biologie</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Z216-MK gekoelde microcentrifuge</td><td>Denville Scientific</td><td>C0216-MK</td><td></td></tr><tr><td>illustra ProbeQuant&amp;#8482; G-50 microkolommen</td><td>GE Healthcare</td><td>Verworven van Fisher Scientific (45-001-487)</td><td>Vooraf gevuld met Sephadex&amp;#8482; G-50 DNA Grade en vooraf geëquilibreerd in STE-buffer met 0,15% Kathon als biocide</td></tr><tr><td>Triathler benchtop-scintillatieteller</td><td>Hidex Oy, Turku, Finland</td><td>Triathler LSC Model: 425-034</td><td></td></tr><tr><td>Novex&amp;#174; TBE-ureum monsterbuffer (2&amp;#215;)</td><td>Invitrogen</td><td>LC6876</td><td></td></tr><tr><td>6% TBE-Urea-gels 1,0 mm, 10 putjes</td><td>Invitrogen</td><td>EC6865BOX</td><td></td></tr><tr><td>Novex&amp;#174; TBE-runbuffer (5x)&amp;#215;)</td><td>Invitrogen</td><td>LC6675</td><td></td></tr><tr><td>Radioactiviteitsdecontaminatiemiddel</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-67</td><td></td></tr><tr><td>Tips voor het laden van gels</td><td>Denville Scientific</td><td>P3080</td><td></td></tr><tr><td>XCell &lt;em&gt;SureLock&lt;/em&gt; Mini-cel</td><td>Invitrogen</td><td>EI0001</td><td>XCell &lt;Elektronenmicroscopie&gt;SureLock&lt;/em&gt; Mini-cel</td></tr><tr><td>Autoradiografische film</td><td>Denville Scientific</td><td>E3018</td><td>Gebruik in volledige duisternis</td></tr><tr><td>Autoradiografie-film, Hyperfilm&amp;#8482; ECL</td><td>Amersham</td><td>RPN3114K</td><td>Kan worden gebruikt onder rood veiligheidslicht.</td></tr><tr><td>Membraanschijfjes</td><td>EMD Millipore</td><td>GSWP02500</td><td>Gemengde cellulose-ester, hydrofiel, 0,22-&amp;#x03BC;m-disc membranen</td></tr><tr><td>Gefritte glazen ondersteuningsbodem voor 125-ml kolf</td><td>VWR international</td><td>26316-696</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-11YZ</td><td></td></tr><tr><td>Ureum</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC32738-0050</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>118430010</td><td></td></tr><tr><td>Glycogeen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1767</td><td></td></tr><tr><td>2-propanol voor moleculaire biologie</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant RNase-remmer</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71571</td><td></td></tr><tr><td>ImProm-II&amp;#8482;Omgekeerd transcriptiesysteem</td><td>Promega Corp.</td><td>A3802</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant RNase-inhibitor</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>71571</td><td></td></tr><tr><td>RapidRun&amp;#8482; Laadkleurstof</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>77524</td><td></td></tr></tbody></table>

selectie van aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van alzheimer

Selection of Aptamers for Amyloid &beta;-Protein, the Causative Agent of Alzheimer&#39;s Disease

De ziekte van Alzheimer (AD) is een progressieve, leeftijd-afhankelijk, neurodegeneratieve aandoening met een verraderlijke cursus die maakt haar presymptomatische diagnose moeilijk 1. Definitieve diagnose AD wordt pas postmortem, dus tot oprichting van presymptomatische, vroege diagnose van AD is cruciaal voor het ontwikkelen en beheren van effectieve therapieën 2,3. Amyloid β-eiwit (Aß) staat centraal in AD pathogenese. Oplosbaar, oligomere Aß assemblages worden verondersteld om neurotoxiciteit onderliggende synaptische dysfunctie en neuronen verlies zullen beïnvloeden in AD 4,5. Verschillende vormen van oplosbare Aß vergaderingen zijn beschreven, echter, hun onderlinge relaties en de relevantie voor AD etiologie en pathogenese zijn complex en niet goed begrepen 6. De specifieke moleculaire herkenning instrumenten kan ontrafelen van de relaties tussen Aß assemblies en vergemakkelijken detectie en karakterisatie van deze vergaderingen vroeg in het ziekteverloop voordat de symptomen ontstaan. Moleculaire herkenning vertrouwt vaak op antilichamen. Echter, een andere klasse van moleculaire herkenning tools, aptameren, biedt belangrijke voordelen ten opzichte van antilichamen 7,8. Aptameren worden oligonucleotiden gegenereerd door in-vitro selectie: systematische ontwikkeling van liganden door de exponentiële verrijking (SELEX) 9,10. SELEX is een iteratief proces dat vergelijkbaar is met de evolutietheorie van Darwin maakt selectie, versterking, verrijking, en bestendiging van een onroerend goed, bijvoorbeeld, Avid, specifieke, ligand binding (aptameren) of katalytische activiteit (ribozymen en DNAzymes). Ondanks de opkomst van aptameren als hulpmiddelen in de moderne biotechnologie en de geneeskunde 11, zijn ze nog onvoldoende benut in het amyloid veld. Weinig RNA of ssDNA aptameren zijn geselecteerd tegen diverse vormen van prion-eiwitten (PrP) 12-16. Een RNA-aptameer gegenereerd tegen recombinant bovine PrP bleek de runder-PrP β 17 herkennen, een oplosbaar, oligomere, β-sheet-rijke conformationele variant van volledige lengte PrP dat amyloïd fibrillen 18 vormen. Aptameren gegenereerd met behulp van monomere en diverse vormen van fibrillair β 2-microglobuline (β 2 m) bleken fibrillen bepaalde andere amyloidogenic eiwitten binden naast β 2 m fibrillen 19. Ylera et al.. beschreven RNA aptameren geselecteerd op grond van geïmmobiliseerd monomere Aβ40 20. Onverwacht, deze aptameren gebonden fibrillair Aβ40. Al met al deze gegevens maken een aantal belangrijke vragen op. Waarom heeft aptameren geselecteerd op grond van monomere eiwitten herkennen hun polymere vormen? Zou aptameren tegen monomere en / of oligomere vormen van amyloidogenic eiwitten worden verkregen? Om deze vragen te beantwoorden, hebben we geprobeerd om aptameren te selecteren voor covalent-gestabiliseerd oligomere Aβ40 21 gegenereerd met behulp van foto-geïnduceerde verknoping van niet-gemodificeerde eiwitten (PICUP) 22,23. Net als bij eerdere bevindingen 17,19,20, deze aptameren reageerde met fibrillen van Aß en enkele andere amyloidogenic eiwitten waarschijnlijk het herkennen van een mogelijk gemeenschappelijke amyloid structurele aptatope 21. Hier presenteren we de SELEX methodologie die wordt gebruikt bij de productie van deze aptameren 21.

Aptameren zijn korte ribo-/deoxyribo-oligonucleotides geselecteerd door<em&gt; In-vitro</em&gt; Evolutie methoden op basis van affiniteit voor een specifieke doelgroep. Aptameren zijn moleculaire herkenning gereedschappen met veelzijdige therapeutische, diagnostische en wetenschappelijke toepassingen. Tonen we methoden voor de selectie van aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van Alzheimer.

Selectie van Aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van Alzheimer

De ziekte van Alzheimer (AD) is een progressieve, leeftijdsafhankelijke, neurodegeneratieve aandoening met een sluipend beloop, waardoor de presymptomatische diagnose ervan ...

Het algemene doel van selectie-experimenten is het selecteren van RNA-moleculen die specifiek en sterk binden aan een doeleiwit in RNA Selects. Dit wordt bereikt door RNA in vitro te transcriberen vanuit een bibliotheek van willekeurige DNA-oligonucleotiden, gevolgd door incubatie van de getranscribeerde RNA-pool met het doeleiwit. Als tweede stap wordt filterbinding toegepast.Hiermee worden de target-bindende RNA-moleculen gescheiden van de pool met ongebonden RNA. Vervolgens worden de target-bindende RNA-moleculen geïdentificeerd. Deze worden reverse getranscribeerd naar D-N-A, via P-C-R geamplificeerd en opnieuw getranscribeerd naar RNA.Deze RNA-pool, die nu verrijkt is met bepaalde bindende aptameren, wordt gebruikt voor binding aan het doelwit in de volgende selectiecyclus. Over het algemeen worden na acht tot 20 cycli zeer affiene, doelwitspecifieke aptameren geselecteerd en gekarakteriseerd. Hallo, ik ben Gal Bean van de afdeling neurologie aan UCLA, vandaag met Farah Rahimi.Een senior postdoc in mijn laboratorium zal een proces demonstreren dat cellex wordt genoemd. We hebben dit proces in het laboratorium gebruikt om abers voor amyloïde beta-oligomeren te selecteren. Laten we beginnen.Voor de lezing is het aan u. In dit geselecteerde experiment worden homogene, aggregaatvrije stabiele eiwitligamenten, bestaande uit amyloïd bèta-eiwit Aβ40, geprepareerd middels de pick-up procedure zoals beschreven in een eerder JoVE-videoprotocol, met modificaties die verder worden toegelicht in het bijbehorende schriftelijke protocol. Reinig na crosslinking het crosslinked ligamentmengsel met gebruik van 5 mL ontziltingskolommen.Plaats eerst de kolom in een statief met een bekerglas onder de uitlaat van de kolom. Verwijder de bovenkap van de kolom en verwijder de uitlaatplug. Laat de bewaarbuffer doorstromen en vang deze op in het bekerglas.Equilibreer vervolgens de kolom met vijf resinbedvolumes in aliquots van 3 mL 10 millimol ammoniumacetaat bij pH 8,3. Breng na het equilibreren van de kolom een aliquot van 0,5 mL van het pickup-reactiemengsel aan op de kolom. Laat het eiwitmengsel in de resin trekken en verwierp de doorloop.Plaats de eerste opvangbuis in het bekerglas onder de uitlaat van de kolom. Voeg 0,5 milliliter van de acetaatbuffer toe aan de kolom en vang de eerste fractie van 0,5 milliliter op die erdoorheen stroomt. Herhaal de elutie om in totaal 8,5 milliliter aan fracties in de overeenkomstige buizen op te vangen.De monsters worden gekarakteriseerd via SDS-PAGE en absorbentie. Combineer de fracties met het hoogste eiwitgehalte en meng deze voorzichtig met een pipet, zoals beschreven in het geschreven protocol. Bewaar een aliquot van 10 µL voor aminozuuranalyse en bewaar de rest.Bereid vervolgens de RNA-pool voor. Begin met het amplificeren van de synthetische enkelstrengs DNA-bibliotheek via PCR, zoals beschreven in het bijbehorende schriftelijke protocol. Zuiver het geamplificeerde DNA-product en verifieer de DNA-hoeveelheid via 2% agros gelelektroforese.Over het algemeen zijn de concentratie en opbrengst van DNA 160 plus of minus 10 nanograms per microliter in 50 microliters per buis. Transcribeer het DNA vervolgens in vitro in aanwezigheid van radioactief CTP gedurende de nacht, gevolgd door digestie van de geamplificeerde DNA-template met DNase gedurende vier uur om een P 32 gelabelde RNA-pool te genereren, zoals gedetailleerd in het bijbehorende schriftelijke protocol. Hoewel de fabrikant Promega een incubatie van 15 minuten met DNase aanbeveelt, hebben we in onze experimenten vastgesteld dat een incubatie van vier uur resulteert in de volledige verwijdering van alle DNA-template na de incubatie met DNase.Extraheer het RNA door één volume citraatverzadigde fenylchloroform en isoamylalcohol toe te voegen, vortex gedurende ongeveer één minuut en centrifugeer bij 16, 000 Gs gedurende twee minuten bij kamertemperatuur; breng na centrifugatie de bovenste waterige fase over naar een nieuwe buis. Voeg met een micropipet één volume chloroform-isoamylalcohol toe, vortex gedurende één minuut en centrifugeer. Verwijder, zoals voorheen, de onderste fase door aspiratie met een micropipet.Let op dat het in deze stap eenvoudiger is om de onderste fase te verwijderen dan de supernatant. De onderste fase wordt weggegooid. Precipiteer vervolgens het RNA door 0,1 volume-equivalent van drie molar natriumacetaat en één volume-equivalent isopropanol toe te voegen.Meng en plaats gedurende 15 minuten in een vriezer op -20 °C. Aspireer na 15 minuten het supernatant en was het RNA-pellet met 0,5 mL 70% ethanol; centrifugeer na het wassen met ethanol en verwijder de ethanol. Droog het RNA-pellet vijf minuten bij 37 °C in een warmteblok en los het RNA-monster op in 150 mM STE-buffer pH 8,0 tot een volume dat gelijk is aan dat van de in vitro transcriptiereactie.Verhit de buis met het RNA-product 10 minuten lang bij 70 °C in een warmteblok en vortex deze. Centrifugeer op maximale snelheid gedurende één minuut bij kamertemperatuur om de oplosbaarheid van het RNA te bevorderen; bewaar één µL RNA voor scintillatietelling en TPE-ureum-polyacrylamidegelelektroforese. Verwijder na oplossen van het RNA de niet-ingebouwde nucleotiden met G 50-kolommen, volgens de instructies van de fabrikant.Vergeet niet om één microliter van het G 50 gezuiverde RNA te bewaren voor scintillatietelling en denaturerende gelelektroforese. Gebruik de twee aliquots van één microliter RNA uit de RNA-precipitatiestappen en de G 50 ontzoutingsstappen voor scintillatietelling. Bereken het percentage labelincorporatie na de scintillatietelling en de berekening van het incorporatiepercentage; bereken vervolgens de opbrengst van het RNA en de specifieke activiteit van het RNA.Analyseer ten slotte het RNA vóór en na de G 50-zuivering door de monsters op een 6% TBE-ureum-polyacrylamidegel te scheiden en het RNA te visualiseren via autoradiografie, zoals beschreven in het bijbehorende schriftelijke protocol. Indien de kwaliteit van het gelabelde product naar tevredenheid is, meng dan de RNA-bibliotheek met het eiwitmonster voor de selecties. Incubeer de RNA-voorraad 10 minuten bij 90 °C voor denaturatie en vervolgens 10 minuten bij kamertemperatuur voor langzame renaturatie.Terwijl het RNA incubeert, lossen we één eiwitbuis op in 8 µL 60 mM natriumhydroxide plus 36 µL kernvrij gedeïoniseerd water. Soniceren we het mengsel gedurende één minuut en voegen we 36 µL 2X RNA-bindingsbuffer toe. Voor de negatieve controle.Meng het RNA met 20 µL 10 X RNA-bindingsbuffer en vul het volume aan tot 200 µL met nucleasevrij water. Voor de bindingsreactie mengt u 20 µL van het eiwit- en RNA-mengsel met 20 µL 10 X RNA-bindingsbuffer en vult u het volume aan tot 200 µL met nucleasevrij water.Incubeer de buisjes 30 minuten bij kamertemperatuur; terwijl de monsters incuberen, bereidt u de filters en de opstelling voor filterbinding voor. Bevestig eerst een zijarmkolf van 125 milliliter aan de vacuüminlaat. Plaats een vooraf gereinigde poreuze glazen filterhouder op de zijarmkolf.Equilibreer vervolgens drie filtermembranen gedurende 10 tot 15 minuten in twee tot drie milliliter van een 1X RNA-bindingsbuffer in een Petrischaal van 35 bij 10 millimeter. Wanneer de incubatie van de negatieve controle en de bindingsreactie-monsters is voltooid, worden deze vijf minuten gecentrifugeerd op maximale snelheid. Zet bij kamertemperatuur de vacuümpomp aan en plaats het eerste membraan op het poreuze glas; druppel met een micropipet 0,5 milliliter RNA-bindingsbuffer op het membraan.Stel het vacuüm zo in dat elke bufferdruppel langzaam door het membraan stroomt. Dit eerste filter wordt uitsluitend gebruikt om de vacuümzuiging af te stellen. Plaats vervolgens het tweede membraan op het poreuze glas en breng, met dezelfde stroomsnelheid, de negatieve controle aan op het membraan.Nadat het monster is aangebracht, wordt dit vier keer gewassen met aliquots van 0,5 milliliter van een eenvoudige RNA-bindingsbuffer. Verwijder het membraan van de negatieve controle en plaats dit in een buisje voor scintillatietelling. Vervang het poreuze glas door een tweede, vooraf gereinigde poreuze glashouder.Plaats de derde schijf op het poreuze glas en breng het mengsel voor de bindingsreactie aan. Was het filter zoals zojuist getoond; het aantal wasbeurten kan in latere selectiecycli worden verhoogd. Om de strengheid van de selectiecondities te verhogen, verwijdert u de filterschijf en plaatst u deze in een buisje van 1,6 milliliter met het label bindingsreactie.Voer scintillatiemetingen uit voor beide filters. Bereken het niveau van de aan het filter gebonden radioactiviteit in verhouding tot de totale hoeveelheid radioactiviteit die op de membranen is aangebracht. Dit geeft een indicatie van de binding-verrijking naarmate de selectie vordert.Verwijder na het scintillatietellen het filter van de bindingsreactie uit de buis en plaats dit in een schone, droge Petrischaal van 35 bij 10 millimeter. Snijd het membraan met een schoon scalpel en een pincet in kleine stukjes. Gebruik het pincet om de gesneden stukjes terug over te brengen naar het scintillatiebuisje.Voeg 400 µL evolutiebuffer toe en incubeer de buis 10 minuten bij 95 °C. Na 10 minuten mengt men door te vortexen, centrifugeert men de buis op maximale snelheid bij kamertemperatuur, en aspireert en verzamelt men de extractiebuffer in een nieuwe gelabelde buis. Meet de resterende radioactiviteitsmetingen in de buis met de membraanstukjes via scintillatiemeting. Om de extractie-efficiëntie te beoordelen, wordt de extractie drie keer herhaald; de efficiëntie na drie extracties is gewoonlijk ongeveer 95 tot 96%. Voeg vervolgens drie tot vier µL glycogeen toe als RNA-coprecipitant en extraheer en precipiteer het uit het filter vrijgekomen RNA zoals eerder beschreven, behalve dat de buis gedurende één nacht in een vriezer bij -20 °C wordt geplaatst.Centrifugeer na de incubatie gedurende de nacht het monster; het RNA slaat neer in een vloeibare fase die nauwelijks zichtbaar is. Aspireer de bovenvloeistof voorzichtig zonder deze nauwelijks zichtbare neerslagfase onderin de buis te verplaatsen. Was het RNA-pellet met 0,5 milliliters 70% ethanol, centrifugeer vijf minuten op maximale snelheid bij vier graden Celsius en verwijder de ethanol door aspiratie zonder de nauwelijks zichtbare neerslagfase te verplaatsen.Los het RNA-pellet op in 50 µL STE-buffer en voer de G 50-zuivering uit zoals beschreven voor het nieuw getranscribeerde RNA in het bijbehorende geschreven protocol. Om door te gaan naar de volgende selectiecyclus, wordt het RNA omgezet in DNA via reverse transcriptie, gevolgd door PCR-amplificatie zoals beschreven in het bijbehorende geschreven protocol. Vergeet niet een negatieve controlemonster zonder reverse transcriptase op te nemen.Controleer de PCR-producten op een gel om vast te stellen of de baan van de negatieve controle leeg is en de andere banen overeenkomen met de verwachtingen. Ga verder met het transcriberen en labelen van het RNA voor gebruik, zoals eerder aangetoond. Selecteer in de volgende cyclus het gegenereerde oligomeer voor opname.Een beta 40-eiwit dat hier voor selecties werd gebruikt, is gezuiverd zoals getoond in dit videoprotocol en vervolgens onderzocht met behulp van absorptiemetingen (weergegeven door de rode lijn) en SDS-PAGE. Het eiwit elueert consistent van de kolom in fracties drie tot en met vijf, en het cross-linking reagens elueert na fractie zes, wat wordt aangegeven door een toename van de absorptie in fractie zeven. De SDS-PAGE toont de typische distributie van a beta 40 oligomeren.De integriteit van het RNA voor elke selectieronde is essentieel voor de iteratieve voortgang van de selecties. Na RNA-transcriptie en labeling wordt de kwaliteit van het gelabelde RNA beoordeeld via denaturerende gelelektroforese. Hier is een typisch profiel van een intact gelabeld RNA-product vóór en na G 50-zuivering; vervuilend DNA-template uit vorige selectierondes dat na de in vitro transcriptiereactie nog aanwezig is, zou de efficiëntie van de selectie kunnen verminderen, waardoor er meer rondes nodig zijn.Agarose-elektroforese van de reverse transcriptie-reactie, gevolgd door PCR-amplificatie, toont het verwachte DNA-product; de afwezigheid van DNA-product in de reactiebuisjes van de negatieve controle duidt op de succesvolle verwijdering van het DNA-template door DNAse-behandeling na de in vitro transcriptie. We hebben u zojuist laten zien hoe u aptameren selecteert voor fotogecrosslinkte, covalent gestabiliseerde amyloïd beta 40-oligomeren. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat beide moleculen een stabiele structuur moeten hebben om een hoge affiniteit te vertonen, en dat ze beiden een driedimensionale structuur hebben waarin ze met elkaar interageren.Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

selection-aptamers-for-amyloid-protein-causative-agent-alzheimer-s

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Beschrijven we een techniek voor de bereiding van menselijke verduidelijkt corticale homogenaten, eiwit scheiding door SDS-PAGE, antigen retrieval en immunoblotting met een antilichaam tegen het Aß peptide. Met behulp van dit protocol, wij consequent te sporen monomere en multimere Aß in corticale weefsel van mensen met de ziekte van Alzheimer pathologie.

SDS-PAGE/Immunoblot Detectie van Aß multimeren in Human Corticale weefselhomogenaten met behulp van antigeen-epitoop

Met behulp van atoomkrachtmicroscopie in combinatie met biopanning-technologie hebben we een negatief en positief biopanning-systeem gemaakt om antilichamen te verkrijgen tegen ziektespecifieke eiwitvarianten die aanwezig zijn in elk biologisch materiaal, zelfs bij lage concentraties. We zijn erin geslaagd om antilichamen te verkrijgen voor TDP-43-eiwitvarianten die betrokken zijn bij Amyotrofe Laterale Sclerose.

Roman Atomic Force Microscopy Based Biopanning voor isolatie van morfologie specifieke reagentia tegen TDP-43 Varianten in Amyotrofische Lateraal Sclerose

Hoewel het transport van celoppervlak-eiwitten relatief gemakkelijk bestudeerd visualiseren van de handel in intracellulaire eiwitten is veel moeilijker. Hier gebruiken we constructen waarin activeerbare GFP en tonen een werkwijze om nauwkeurig volgen amyloïd precursor eiwit van het Golgi apparaat naar stroomafwaartse compartimenten en volg de klaring.

Beeldvorming van de intracellulaire mensenhandel van APP met fotoactiveerbare GFP

Om de effecten van Aβo in vivo te bestuderen, ontwikkelden we een model op basis van herhaalde hippocampische infusies van oplosbare Aβo gekoppeld aan continue infusie van Aβo-antilichaam (6E10) in de hippocampus met behulp van osmotische pompen om het neurotoxische effect van Aβo tegen te gaan.

Neurodegeneratie in een diermodel van chronische Amyloid-beta oligomeer infusie wordt tegengewerkt door antilichaambehandeling doordrongen osmotische pompen

Hierin beschrijven we een speciaal HPLC zuiveringsprotocol hoogzuivere amyloïde beta 42 (Aß42) en amyloïde beta 40 (Aβ40) peptiden, kunnen oligomeervorming oplevert. Amyloid beta is een zeer gevoelig aggregatie, hydrofoob peptide betrokken bij de ziekte van Alzheimer. De amyloidogenic aard van het peptide maakt de zuivering ervan een uitdaging.

Een op maat HPLC Zuivering Protocol dat zijn vruchten High-zuiverheid Amyloïd Beta 42 en Amyloid Beta 40 Peptiden, in staat oligomeervorming

Een verkorte fractionering protocol voor de verrijking van wasmiddel-onoplosbaar eiwit-aggregaten van menselijke postmortem hersenen wordt beschreven.

Verrijking van wasmiddel-onoplosbaar eiwit-aggregaten van menselijke Postmortem hersenen

Dit protocol wordt beschreven hoe voor te bereiden Aβ oligomeren van een synthetische peptide in vitro en relatieve hoeveelheid Aβ oligomeren evalueren door een stip bevlekken analyse.

A11-positieve β-amyloid oligomeren voorbereiding en de evaluatie met behulp van Dot bevlekken analyse

Moleculaire beeldvorming met laser matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie gebaseerde imaging massaspectrometrie (MALDI-IMS) kan de gelijktijdige koppeling van meerdere analyten in biologische monsters. Hier presenteren we een protocol voor de detectie en de visualisatie van amyloïde β eiwit op weefsels van de hersenen van Alzheimer en Cerebrale amyloïde angiopathie monsters met behulp van MALDI-IMS.

Visualisatie van amyloïde β-deposito's in de menselijke hersenen met Laser Matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie massaspectrometrie Imaging

Het huidige protocol beschrijft en vergelijkt de procedure om een volledige regio of subregio van belang analyse uit te voeren van sagittale muishersensecties om amyloïde-bètabelasting te kwantificeren in het APP / PS1 transgene muismodel van de ziekte van Alzheimer.

Volledige versus subregionale kwantificering van amyloïde-bètabelasting op hersensecties van muizen

Deze biochemische zuiveringsmethode met op massaspectrometrie gebaseerde proteomische analyse vergemakkelijkt de robuuste karakterisering van amyloïde fibrilkernen, wat de identificatie van doelen voor het voorkomen van de ziekte van Alzheimer kan versnellen.

Biochemische zuivering en proteomische karakterisering van amyloïde fibrilkernen uit de hersenen

Hier beschrijven we een gistsysteem dat menselijke γ-secretase reconstrueert. Dit systeem maakt het mogelijk om mutaties die de activiteit beïnvloeden te identificeren en te bestuderen en om γ-secretaseremmers (GSI's) te screenen. Door gebruik te maken van het functieverlies van familiale mutanten voor de ziekte van Alzheimer, is het mogelijk om te screenen op γ-secretasemodulatoren (GSM's).

Saccharomyces cerevisiae Modellen van de ziekte van Alzheimer om genen, mutaties en chemicaliën te screenen die de productie van amyloïde bèta beïnvloeden door γ-secretase

Leer de selectie van RNA-aptameren voor amyloïde β-eiwit met behulp van in-vitro-evolutiemethoden. Deze techniek biedt mogelijkheden voor diagnostische en therapeutische toepassingen bij de ziekte van Alzheimer.

Selectie van Aptameren voor amyloid β-eiwit, de verwekker van de ziekte van Alzheimer

Meer video's verkennen