Name: Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-12T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: Leer de BiFC-methode voor het detecteren van eiwit-eiwitinteracties in ui-epidermale cellen met behulp van de Helios Gene Gun. Deze techniek visualiseert interacties tussen transcriptiefactoren in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Drs. Steve Mount en Xiaoning Zhang voor de 35S:: GFP pGlowbug bouwen en de Hokensen Doctoral Fellowship aan CH Onderzoek in het laboratorium Z. L&#39;s wordt ondersteund door de Amerikaanse National Science Foundation (IOB0616096 en MCB0744752). ZL wordt gedeeltelijk ondersteund door de Universiteit van Maryland Agricultural Experiment Station.

I. Plasmide voorbereiding Het plasmide DNA wordt gebruikt voor het bombardement moet zijn van de hoge zuiverheid en bij een concentratie van 500ng/μl of hoger. Voor BiFC waarbij twee plasmide constructen, is 25 ug van elk plasmide nodig. Met andere woorden, 01:01 molaire verhouding van de twee plasmiden worden gemengd om aanleiding te geven tot 50 ug totaal plasmide DNA voor de bereiding van cartridges. Wees ervan bewust dat het toevoegen van meer dan 50 ug DNA kan agglomeratie van de gouddeeltjes oorzaak en moet worden vermeden. In de handel verkrijgbare plasmide DNA-extractie kits worden aanbevolen voor het isoleren van plasmide DNA. Plasmide vectoren moeten relatief klein in omvang, zoals pUC19. We gekloonde SEU en LUH cDNA in pUC19-SPYNE en pUC19-spyce, respectievelijk 3. Binaire vectoren voor Agrobacterium-gemedieerde transformatie zijn te groot en niet geschikt voor het bombardement. II. Cartridge voorbereiding Cartridge voorbereiding impliceert coating gouddeeltjes met plasmide DNA en laden ze in plastic buizen, dat vervolgens wordt verdeeld in halve centimeter lange stukken, die kan worden geladen in het gen pistool patroon houders. Cartridge voorbereiding is beschreven in grote details in een apart Jupiter artikel 4 en is dus hier niet beschreven. Voor bombardement van ui cellen, raden wij aan het mengen van 50 ug van plasmide DNA met 12,5 mg goud deeltjes per voorbereiding, die ongeveer rendementen tot 50 cartridges bij 1 ug DNA/0.25 mg goud / cartridge. Elke cartridge is voor een schot. De gouddeeltjes kan zowel 0,6 micrometer of 1,0 micrometer in diameter (Cat # 1652262 of Cat # 1652263; Biorad). Wij bevelen ook het gebruik van 0,5 mg / ml PVP-oplossing voor de patroon voorbereiding. Voor BiFC, combineren de twee plasmide DNA's van elke vermeende interactie partner in hetzelfde patroon voorbereiding. Na de cartridge voorbereiding is het belangrijk om de cartridges te testen door het afvuren van de nieuw gemaakte cartridges op een helium-druk tussen 150 en 200 psi in een vierkant Parafilm dat is gewikkeld rond een petrischaal. Dit zal worden nagegaan of de gouddeeltjes efficiënt kunnen worden aangedreven vanaf de cartridges, je moet zien flauwvallen gouddeeltjes op de Parafilm. Dit geeft u een idee van het gebied dat elk shot zal dekken. Mogelijk ziet u verschillende bedragen van gouddeeltjes aangedreven op de Parafilm bij verschillende helium druk (150-200 psi bereik). Als er geen significant verschil, kies dan de lagere druk voor bombardement. III. Voorbereiden ui weefsels Op de dag van schieten, loslaten buitenste schil van een grote gele ui. Met behulp van een schoon en scherp scheermes, gesneden 4-5 lagen diep een rechthoekig gebied van ongeveer 2 x 8 cm. Haal de rechthoekige ui weefsel, gooi de buitenste twee lagen, snijd de overige lagen van de ui in ongeveer 2x1.5 cm stukken. Leg de stukken ui in een petrischaal met filtreerpapier (Whatman 3MM papier gesneden in cirkels), bevochtigd met steriel water. Dek de petrischaal en ze zijn klaar om te gaan. IV. Bombardement <ol><li> Laad de cartridges in het witte ronde cartridge houders. Patronen met verschillende plasmide constructen moeten worden geladen in verschillende cartridge houders. Elke cartridge houder kan maximaal tot 12 cartridges voor 12 opnamen. </li><li> Plaats de batterij en de verse vat folie in de Helios Gene Gun. Zorg ervoor dat zowel het vat liner en het geweer respectieve bijgevoegde o-ringen te hebben. </li><li> Plaats eerst een lege cartridge houder in het gen pistool, met Mark # 12 op de patroonhouder naar de bovenkant van het pistool. Advance cartridge houder van een of twee keer om te controleren of deze correct is geplaatst. </li><li> Bevestig pistool aan de helium tank en stel de druk tussen 150 en 200 psi. </li><li> Draag gehoorbescherming en vuur pistool een paar keer met de lege patroonhouder schoon te maken uit de kamer van het pistool en ervoor te zorgen dat de druk stabiel is. </li><li> Verwijder de lege patroonhouder en plaats een geladen patroonhouder. Vooraf de patroonhouder, zodat de cartridge die u wilt brand is gepositioneerd aan de onderkant (zes) van de patroonhouder. Opnemen van een stukje ui hier biedt een vorm van negatieve controle voor achtergrond fluorescentie. </li><li> Leg ui stukken in het midden van een lege petrischaal met de innerlijke meeste laag van de ui naar boven. Rest van het gen kanon vat liner op petrischaaltje en vuur het kanon door het ingedrukt houden van de zijkant te drukken terwijl overhalen van de trekker. Breng de ui gebombardeerd tot een petrischaal met een vochtig 3MM filtreerpapier. </li><li> Naar het volgende patroon en vuur een andere ui stuk. Herhaal deze stap tot vier tot vijf stukken van uien zijn geschoten. Elke ui stuk is een keer neergeschoten. </li><li> Wijzigen om een ​​andere cartridge houder geladen met cartridges met een ander plasmide of ander plasmide combinatie. Vergeet niet om het vat liner veranderens goed om besmetting te voorkomen. Schiet vier tot vijf ui stukken. </li><li> Na het bombardement, geeft alle uien aan perti gerechten. Bedek de petrischalen met deksels. Wikkel ze met Parafilm om uitdroging te voorkomen. Incubeer de ui stukken bij kamertemperatuur in het donker voor 16-48 uur. </li><li> Schakel gas en laat de druk voor het losmaken van het gen geweer van de helium tank. Schroef het vat liner, en verwijder de patroonhouder en de gebruikte (of ongebruikte) cartridges. </li><li> Reinigingscartridge houders en vat liners door onderdompeling ze in een beker met water en zeep. Plaats het bekerglas in een bad ultrasoonapparaat en ultrasone trillingen gedurende 20 minuten. Daarna, spoel ze met water om alle zeepresten te verwijderen. Week ze in 70% ethanol voor een uur en daarna droog ze op keukenpapier. </li></ol> V. Observatie <ol><li> Na het incuberen gebombardeerd ui stukken voor 16-20 uur bij kamertemperatuur, kunnen we zien GFP of YFP fluorescentie met behulp van een fluorescentie microscoop, zoals de Zeiss Axio Observer.z1 gebruikt in deze studie. </li><li> Een tang met platte uiteinden om langzaam te schillen een enkele cel laag uit het binnenste van de ui epidermis (de laag die direct het pistool gezichten tijdens het bombardement). Leg de schil op een druppel water op een dia. Voeg dekglaasje maar wees voorzichtig om bubbels te minimaliseren. </li><li> Onder felle gebied van de microscoop, controleer dan eerst voor de cytoplasmatische streaming om ervoor te zorgen dat de cellen in leven zijn. Om dit te doen, bloot de dia om het heldere licht veld voor een paar minuten op te warmen de ui weefsel en kijk dan voor het verplaatsen van plastiden. Cytoplasmatische streaming is niet altijd gemakkelijk te zien, dus wees niet ontmoedigd als je niet kunt zien geen. </li><li> Voor fluorescentie detectie, maken gebruik van passende excitatie en detectie filters voor GFP of YFP. Het is belangrijk om ook negatieve controles, zoals ui stukken geschoten met een niet-fluorescerende plasmide. Lichtgele signalen kunnen blijken uit gewonde cellen, luchtbellen, of puin. Het is ook van belang om positieve controles. Een plasmide constitutief tot expressie gebracht met fluorescerende reporter, zoals 35S:: GFP is een uitstekende positieve controle. Zichtbaar GFP signalen van ui epidermale cellen (Figuur 1A, D) aangegeven dat de cartridges, de ui weefsels, en het gen pistool afvuren goed worden voorbereid en uitgevoerd. Vervolgens zagen we interacties tussen SEU-pSPYNE en LUH-pSPYCE in ui stukken gebombardeerd met cartridges met een mengsel van 35S:: SEU-pSPYNE en 35S:: LUH-pSPYCE DNA's. Faint YFP fluorescentie werd waargenomen in de kern van alleen (Figuur 1 B, E) met vermelding van de directe fysieke interactie tussen SEU en LUH dat de splitsing YFP fragmenten bij elkaar gebracht in de kern. Merk op dat de YFP signaal van BiFC aanzienlijk zwakker is dan het GFP-signaal van 35S:: GFP. </li></ol> Representatieve resultaten In onze studie gerapporteerd hier, de 35S:: GFP positieve controle plasmide geeft ze een sterke fluorescentie dat de hele cel, met inbegrip van zowel de kern en het cytoplasma (Figuur 1A, D) vult. GFP-eiwit is klein genoeg om in de kern diffuse zonder een nucleair lokalisatie signaal. In tegenstelling, SEU en LUH zijn twee Arabidopsis transcriptie factoren eerder aangetoond om samen te werken in een gist twee-hybride analyse 2. SEU-pSPYNE (SEU gefuseerd met het N-terminale fragment van YFP) en LUH-pSPYCE (SEU gefuseerd met het N-terminale fragment van YFP), beide te groot om te diffunderen in de kern, bevatten nucleaire lokalisatie signalen 2,5. De YFP fluorescerende signaal gedetecteerd in de ui celkern (zie figuur 1 B, E) geeft aan dat de SEU-pSPYNE en LUH-pSPYCE kan deelnemen aan ui kernen. Geen fluorescerend signaal wordt gedetecteerd in uien gebombardeerd met plasmide mix van vector plasmide pSPYNE die de N-terminale fragment van YFP en LUH-pSPYCE (figuur 1C, F). De BiFC-gemedieerde YFP fluorescentie is aanzienlijk zwakker is dan het GFP-gemedieerde fluorescentie van de 35S:: GFP plasmide. In onze studie, ze toonde ook aan verschillende subcellulaire lokalisatie (vergelijk figuur 1A met B). Daarnaast is het aantal fluorescerende cellen is significant lager voor BiFC, zoals BiFC werkt alleen wanneer zowel partner plasmiden met succes in te voeren en worden uitgedrukt in dezelfde ui cellen. <img src="/files/ftp_upload/1963/1963fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Fluorescent (A, B, C) ​​en helder veld (D, E, F) beelden van de ui cellen gebombardeerd met verschillende plasmide constructen. (A) en (D), ui cellen gebombardeerd met 35S:: GFP. GFP verspreidt zich door het cytoplasma en kern. (B) en (E), ui cellen gebombardeerd met gelijke molaire mixen van 35S:: SEU-pSPYNE (SEU gefuseerd met het N-terminale fragment van YFP) en 35S:: LUH-pSPYCE (LUH gefuseerd met het C-terminale fragment ) plasmide DNA. Een interactie tussen SEU-pSPYNE en LUH-pSPYCE blijkt uit een fluorescerende kern. (C) en (f), een negatieve controle met ui cellen gebombardeerd met mixen van vector pUC19-SPYNE en LUH-pSPYCE plasmids. Geen fluorescerend signaal wordt gedetecteerd.

<ol><li>Hu, C. D., Chinenov, Y., Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+interactions+among+bZIP+and+Rel+family+proteins+in+living+cells+using+bimolecular+fluorescence+complementation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation.</a> Mol Cell. 9 (4), 789-789 (2002).</li>
<li>Sitaraman, J., Bui, M., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LEUNIG_HOMOLOG+and+LEUNIG+perform+partially+redundant+functions+during+Arabidopsis+embryo+and+floral+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">LEUNIG_HOMOLOG and LEUNIG perform partially redundant functions during Arabidopsis embryo and floral development.</a> Plant Physiol. 147 (2), 672-672 (2008).</li>
<li>Walter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+protein+interactions+in+living+plant+cells+using+bimolecular+fluorescence+complementation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation.</a> Plant J. 40 (3), 428-428 (2004).</li>
<li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Azhakanandam, S., Nole-Wilson, S., Bao, F., Franks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SEUSS+and+AINTEGUMENTA+mediate+patterning+and+ovule+initiation+during+gynoecium+medial+domain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">SEUSS and AINTEGUMENTA mediate patterning and ovule initiation during gynoecium medial domain development.</a> Plant Physiol. 146 (3), 1165-1165 (2008).</li>
<li>Zhang, X. N., Mount, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+alternatively+spliced+isoforms+of+the+Arabidopsis+SR45+protein+have+distinct+roles+during+normal+plant+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Two alternatively spliced isoforms of the Arabidopsis SR45 protein have distinct roles during normal plant development.</a> Plant Physiol. 150 (3), 1450-1450 (2009).</li>
</ol>

<ol><li> Voor het eerst gebruikt, raden we aan het oefenen van de gehele procedure, van de cartridge voorbereiding tot observatie, met een enkel plasmide constitutief reporter, zoals 35S:: GFP of 35S:: GUS. Wij gebruikten een 35S:: GFP plasmide verkregen van Drs. Steve Mount en Xiaoning Zhang 6 (figuur 1A, D). Het gen schot controle cartridges verkocht tegen RioRad (Cat 165-2244) zijn niet geschikt voor planten. </li><li> Voor BiFC, een tweede positieve controle noodzakelijk is, die moet bestaan ​​uit twee bekende interagerende partn...

<table><tbody><tr><td>Gele ui</td><td>Alle leveranciers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Helios Gene Gun</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop met passende filters voor GFP of YFP</td><td>Zeiss, Nikon, Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bimoleculaire fluorescentie complementatie (bifc) test voor eiwit-eiwit interactie in onion cellen met behulp van de helios gene gun

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Onderzoek naar gen-functie in diverse organismen is gebaseerd op kennis van hoe de genproducten met elkaar in hun normale cellulaire omgeving. De Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) Assay<sup&gt; 1</sup&gt; Stelt onderzoekers in staat te visualiseren eiwit-eiwit interacties in levende cellen en is uitgegroeid tot een onmisbaar onderzoeksinstrument. Deze test is gebaseerd op de vergemakkelijkt associatie van twee fragmenten van een fluorescerend eiwit (GFP), die elk gefuseerd aan een potentiële interagerende proteïne partner. De interactie van de twee partners eiwit zou de associatie van de N-terminale en C-terminale fragment van GFP, wat leidt tot fluorescentie. Voor plantaardige onderzoekers, ui epidermale cellen zijn een ideaal experimenteel systeem voor het uitvoeren van de test BiFC vanwege het gemak bij het verkrijgen en het voorbereiden van ui weefsels en de directe visualisatie van de fluorescentie met een minimale achtergrond fluorescentie. De Helios Gene Gun (BioRad) wordt vaak gebruikt voor het bombarderen van plasmide DNA in ui cellen. We demonstreren het gebruik van de Helios Gene Gun om plasmide constructen te voeren voor twee interactie<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Transcriptiefactoren, Seuss (SEU) en Leunig homoloog (LUH)<sup&gt; 2</sup&gt; En de visualisatie van hun interacties gemedieerd door BiFC de ui epidermale cellen.

Dit artikel illustreert hoe goed gebruik van de BioRad Helios Gene Gun om plasmide DNA te introduceren in ui epidermale cellen en hoe om te testen voor eiwit-eiwit interacties in ui cellen op basis van het principe van de Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC)

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun

Het onderzoek naar genfuncties in diverse organismen is afhankelijk van kennis over de wijze waarop genproducten in hun normale cellulaire omgeving met elkaar interageren...

Deze procedure test de in vivo proteïne-proteïne-interactie tussen twee Arabidopsis-transcriptieregulatoren, SEU (kort voor SEUS) en LUH (kort voor LUHolog). Door gebruik te maken van biomoleculaire fluorescentiecomplementatie wordt SEU gefuseerd aan het N-terminale fragment van een geel fluorescent eiwit, of YFP, en wordt LUH gefuseerd aan het C-terminale fragment van het YFP-DNA van de twee plasmideconstructen. SEU-NYFP en LUH-CYFP worden via bombardement in onion epidermale cellen gebracht om hun interactie te testen.Een interactie tussen Seuss en LUH brengt de associatie van de N-terminale en C-terminale fragmenten van YFP in kernen teweeg, wat leidt tot YFP-fluorescentie in de kernen. Na incubatie gedurende 16 tot 20 uur in het donker worden de epidermale vliezen van de ui waargenomen onder een fluorescentiemicroscoop om de fluorescentie te visualiseren. Hallo, ik ben Courtney Hollander van het laboratorium van Dr. Zhi Lu bij de afdeling Celbiologie en Moleculaire Genetica aan de Universiteit van Maryland.Vandaag laten we u een procedure zien voor het testen van eiwit-eiwitinteracties in uicellen met behulp van het BioRad Helios gene gun. Wij gebruiken deze procedure in ons la

bimolecular-fluorescence-complementation-bifc-assay-for-protein

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol wordt beschreven hoe u foto eiwit-eiwit interacties met behulp van een FRET-gebaseerde nabijheid assay.

Imaging eiwit-eiwit interacties In vivo</em

De subcellulaire lokalisatie van eiwitten is belangrijk bij het bepalen van de spatio-temporele regulatie van cell signaling. We beschrijven hier bimoleculaire fluorescentie complementatie (BiFC) als een eenvoudige methode voor het bewaken van de ruimtelijke interacties van eiwitten in de cel.

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie

We hebben een techniek ontwikkeld om eiwit-eiwit interacties in planten te testen. Een geel fluorescerend eiwit (YFP) wordt opgesplitst in twee niet-overlappende fragmenten. Elk fragment is gekloond in-frame aan een gen van belang via de Gateway-systeem, waardoor de expressie van fusie-eiwitten. Reconstitutie van YFP-signaal treedt alleen op wanneer de lijkschouwing eiwitten met elkaar omgaan.

Detectie van eiwit interacties in Plant met behulp van een Gateway-compatibele Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) Systeem

Flowcytometrische analyse van Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie biedt een hoge doorvoer kwantitatieve methode om eiwit-eiwit interacties te bestuderen. Deze methodologie kan worden toegepast op mapping eiwitbindingsplaatsen en screenen factoren die eiwit-eiwit interactie te bepalen.

Flowcytometrische analyse van Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie: Een High Throughput kwantitatieve methode om eiwit-eiwit interactie Studie

Vorming van eiwitcomplexen in vivo kan worden gevisualiseerd door bimoleculaire fluorescentie complementatie. Interactie partners gefuseerd aan complementaire delen van fluorescente labels en tijdelijk tot expressie gebracht in tabaksbladeren, waardoor een opnieuw fluorescentiesignaal op nabijheid van de twee eiwitten.

Eiwit-eiwit interacties gevisualiseerd door Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie in Protoplasten en Bladeren Tabak

Eiwit-eiwit-interacties worden in cellen met een ruimtelijke resolutie van nanometer gevisualiseerd door bimoleculaire fluorescentie-complementatie (BiFC) te combineren met fotogeactiveerde lokalisatiemicroscopie (PALM). Hier wordt het gebruik van BiFC-PALM beschreven voor het beeldvormen van Ras-Raf-interacties in U2OS-cellen voor het visualiseren van de nanoschalige clustervorming en diffusie van individuele Ras-Raf-complexen.

Fotogeactiveerde Localization Microscopie met Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC-PALM)

Dit manuscript beschrijft een gemakkelijke en snelle experimentele procedure voor het bepalen van de eiwit-eiwitinteractie gebaseerd op de meting van luciferase activiteit.

Luciferase complementatie Imaging Assay in Nicotiana benthamiana bladeren voor Transient bepalen eiwit-eiwit interactie Dynamics

We hebben een nieuwe methode voor het uitdrukken van mede meerdere chimeer fluorescerende fusie-eiwitten in planten te overwinnen van de moeilijkheden van conventionele methoden ontwikkeld. Duurt het voordeel van het gebruik van een enkele uitdrukking plasmide waarin meerdere functioneel onafhankelijk eiwit uiting van cassettes om eiwituitdrukking mede.

Co expressie van meerdere chimeer fluorescerende Fusion eiwitten op een efficiënte manier in planten

Dit protocol toont het gebruik van de nabijheidsligatietest om te sonde voor eiwit-eiwitinteracties in situ in de C. elegans kiembaan.

In Situ Detectie van Ribonucleoprotein Complex Assembly in de C. elegans Germline met behulp van Proximity Ligation Assay

Hier presenteren we een methode om de vorming van ternaire complexen tussen drie eiwitpartners te visualiseren met behulp van fluorescerende gelabelde eiwitten door biFC-gebaseerde FRET-FLIM-assay. Deze methode is waardevol voor het bestuderen van eiwit-eiwitinteractiecomplexen in vivo.

Bepaling van de tripartiete interactie tussen twee monomeren van een MADS-box transcriptiefactor en een calciumsensoreiwit door BiFC-FRET-FLIM-assay

Het protocol presenteert een methode voor in vivo covalente hechting van biotine aan eiwitten op basis van hun nabijheid tot een biotineligase die is gefuseerd met een interessant eiwit. Deze modificatie maakt een selectieve verrijking van de eiwitten mogelijk met behulp van streptavidinekorrels als dat nodig is in eiwitinteractiestudies.

In vivo Nabijheidsbiotinylering voor onderzoek naar eiwitinteractie in Paramecium tetraurelia

Leer de BiFC-methode voor het detecteren van eiwit-eiwitinteracties in ui-epidermale cellen met behulp van de Helios Gene Gun. Deze techniek visualiseert interacties tussen transcriptiefactoren in vivo.

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun (Video) | JoVE Journal

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun

Meer video's verkennen