Name: Flash Invriezen en Cryosectioning E12.5 hersenen van muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Leer cryosectioning van embryonale muizenhersenen met flash freezing en OCT-inbedding. Deze methode toont praktische tips voor het gebruik van een cryostaat en het voorkomen van scheuren in weefselsecties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Fix weefsel in 4% paraformaldehyde in PBS voor de gewenste tijd. </li><li> Sucrose trekken weefsel (cryoprotection) <ol><li> Maak 30% sucrose-oplossing in PBS w / v in 2059 buis. </li><li> Spoel weefsel 3x in PBS (~ 5 min met schommelen). </li><li> Plaats weefsel in 30% sucrose oplossing. Weefsel zal niet zinken. </li><li> Plaats het weefsel in 4 ° C &#39;s nachts, of totdat het is gezonken. </li></ol></li><li> Label juiste grootte cryomold met informatie en oriëntatie. </li><li> Vul cryomold met oktober (vermijd luchtbellen). </li><li> Overdracht weefsel oktober bad en coaten met oktober </li><li> Overdracht weefsel LGO cryomold. </li><li> Orient het weefsel onder de microscoop. </li><li> Giet vloeibaar stikstof in plastic petrischaal. </li><li> Snel en zorgvuldig lager het weefsel in cryomold in de stikstof. (Niet onderdompelen de top van de cryomold.) </li><li> Wanneer de LGO solide is wit, plaats de bevroren weefsel in -80 ° C vriezer voor de opslag. </li><li> Evenwicht weefsel tot ~ 20 ° C gedurende ten minste 30 minuten. voorafgaand aan snijden. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose-oplossing</td><td></td><td></td><td>30% sucrose-oplossing in PBS w/v</td></tr><tr><td>paraformaldehyde</td><td></td><td></td><td>4% paraformaldehyde in PBS </td></tr></tbody></table>

flash invriezen en cryosectioning e12.5 hersenen van muizen

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Aangetoond in deze video zijn de technieken voor flash invriezen en snijden embryonale hersenweefsel van de muis. Nuttige tips voor het gebruik van de cryostaat worden gegeven, waaronder het oplossen van problemen methoden die gebruikt kunnen worden tijdens het snijden om ervoor te zorgen dat de resulterende weefsel secties zijn vrij van scheuren en andere vervormingen.</p>

Flash Invriezen en Cryosectioning E12.5 hersenen van muizen

<p>Hallo, ik ben Spencer Curley van de University of California Irvine en het laboratorium van Ed Maki, en ik ga demonstreren hoe cryosectie wordt uitgevoerd. Hiervoor gebruik ik eerst deze veelgebruikte reagentia. Het insluitmiddel of de inbeddingsmedia die ik gebruik, wordt OCT genoemd, wat staat voor optimal cutting temperature.</p><p>Het is een heldere oplossing, zeer dik en viskeus, en het houdt het weefsel goed vast terwijl u het kunt oriënteren waarna het bevriest; uiteindelijk is het wateroplosbaar, zodat u het tijdens elke vorm van kleuringsprocedure kunt verwijderen. Daarom bedrijf ik het weefsel in een mal. Deze cryomallen voor biopsiecontainers zijn verkrijgbaar in verschillende formaten.</p><p>Ik gebruik hier deze kleinere mal omdat ik embryonaal weefsel van muis gebruik. We vriezen ons weefsel snel in met vloeibare stikstof. Eerst vul ik deze beschermende vacuümfles met vloeibare stikstof uit onze tank hier.</p><p>Voordat het weefsel snel wordt ingevroren, moet het weefsel worden cryoprotecteerder; anders zal het vriesproces zelf het weefsel vernietigen. Hiervoor wordt het weefsel gedurende één nacht ondergedompeld in een 30% sucrose-oplossing. Als dit langer duurt, is dat geen probleem, zol</p>

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates the cryopreservation of a mouse’s brain to isolate discrete anatomical areas or specific cell populations from the tumor tissues. This technique is critical in obtaining optimal optical resolution of brain tissue morphology for subsequent analysis.

Cryopreservation of Murine Brain by Snap Freezing: A Technique to Rapidly Freeze Whole Mouse Brain Specimen for Histological Analysis

In this video, we demonstrate the sectioning of a frozen mouse brain tumor tissue using a cryostat. The frozen brain tissue sections so obtained are stored at low temperatures until further analysis.

Frozen Mouse Brain Tissue Sectioning: A Procedure to Obtain Thin Frozen Tissue Sections from Frozen Murine Brain Tissue

This video demonstrates a detailed step-by-step protocol for preparing frozen mouse brain tissue sections for downstream analyses.

Processing of a Mouse Brain for Downstream Analysis

Hier presenteren we een protocol om te bevriezen en afdeling hersenweefsel van meerdere dieren als een tijdbesparende alternatief voor één hersenen verwerken. Dit vermindert kleuring variabiliteit tijdens immunohistochemistry en vermindert de tijd cryosectioning en beeldvorming.

Gelijktijdige Cryosectioning van meerdere knaagdier hersenen

Deze procedure beschrijft de verzameling van discrete bevroren hersengebieden om hoogwaardige eiwitten en RNA te verkrijgen met behulp van goedkope en algemeen beschikbare tools.

Verzameling van bevroren knaagdierhersengebieden voor downstreamanalyses

Dit protocol beschrijft een methode voor het combineren van fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) en fluorescentie immunohistochemie (IHC) in zowel vers ingevroren als gefixeerde hersensecties van muizen, met als doel het bereiken van multilabel FISH en fluorescentie IHC-signaal. IHC richtte zich op cytoplasmatische en membraangebonden eiwitten.

Combinatie van multiplex fluorescentie <em>in situ</em> hybridisatie met fluorescerende immunohistochemie op vers ingevroren of vaste hersensecties van muizen

Een handige zwaartekracht-gevoede perfusiemethode voor histologische analyse van het centrale zenuwstelsel van de muis wordt gepresenteerd. Immunofluorescentie detectie van gefosforyleerd α-synucleïne wordt aangetoond in een muismodel van de ziekte van Parkinson. Dit werk beschrijft ook uitgebreid de transcardiale perfusie, dissectie, weefselbevriezing / inbedding en bevroren sectiestappen.

Een zwaartekracht-gevoede transcardiale perfusiemethode voor histologische analyse van het centrale zenuwstelsel van de muis

Het huidige protocol beschrijft een praktische strategie om de verificatiestap van stereotaxische injectiecoördinaten te versnellen voordat virale tracering wordt uitgevoerd met behulp van kleurstoffen en bevroren secties.

Voorlopige validatie van stereotaxische injectiecoördinaten via cryosectie

Deze studie presenteert een vereenvoudigd protocol voor weefselverwerking met onthoofding, fixatie, cryosectie, fluorescentiekleuring, immunokleuring en beeldvorming, dat kan worden uitgebreid tot confocale en multifotonbeeldvorming. De methode behoudt een werkzaamheid die vergelijkbaar is met complexe dissecties, waarbij de noodzaak van geavanceerde motorische vaardigheden wordt omzeild. Kwantitatieve beeldanalyse biedt een uitgebreid onderzoekspotentieel.

Directe cryosectie van <em>Drosophila-koppen</em> voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Het netvlies vertoont een complexe ruimtelijke organisatie over zijn laminaire structuur. Moderne ruimtelijke transcriptomics en sequencingtechnieken vereisen weefselcoupes &lt; 20 μm dik, waardoor hun toepasbaarheid voor retinaal onderzoek wordt beperkt. Deze vers ingevroren cryosectiemethode produceert dunne delen van het netvlies van de muis met behoud van vlakke ruimtelijke relaties, waardoor uitgebreide moleculaire kartering over laminae mogelijk is.

<em>En gezicht</em> Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Dit protocol standaardiseert cryo-elektrontomografie (cryo-ET) voor dik weefsel door hogedrukbevriezing (HPF) te integreren met de wafelmethode, cryogene focus ion beam (cryo-FIB) lift-out en dosissymmetrische, parallelle acquisitie, waardoor uniform dunne lamellen en gevitrificeerde monsters worden opgeleverd voor reproduceerbare in situ-analyse in de hippocampus van de muis.

Cryo-elektrontomografie workflow voor dik weefsel aangetoond bij de muishippocampus

Leer cryosectioning van embryonale muizenhersenen met flash freezing en OCT-inbedding. Deze methode toont praktische tips voor het gebruik van een cryostaat en het voorkomen van scheuren in weefselsecties.

Flash Invriezen en Cryosectioning E12.5 hersenen van muizen

Meer video's verkennen