Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Het algemene doel van deze procedure is om een nauwkeurig model en een eenvoudig uitvoerbare methode vast te stellen om de ontwikkeling van transplantvasculopathie te onderzoeken. Dit wordt bereikt door gebruik te maken van een PVG- naar CI-stamcombinatie. De tweede stap van de procedure is het oogsten van de aorta van de donor.

De derde stap van de procedure is het voorbereiden van de ontvanger. De laatste stap van de procedure is het anastomoseren van de aorta van de donor met de aorta van de ontvanger. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die neointimavorming aantonen middels pathohistologie.

Hallo, ik ben Sonya Schwefel, professor in de transplantatie-immunologie in Thet Eye Lab aan het University Heart Center in Hamburg, Duitsland. En ik ben Manish Duboff, eveneens van het TS Eye Lab.

Mijn laboratorium is geïnteresseerd in transplantatie-immunologie. In deze video introduceren we het orthotope aortatransplantatiemodel, een eenvoudig en valide model om de ontwikkeling van transplantatie-vasculopathie bij ratten te bestuderen. In ons laboratorium gebruiken we deze procedure om chronische afstoting bij cardiovasculaire transplantaties te onderzoeken.

In het orthotope aortatransplantatiemodel kan de aorta eenvoudig histologisch worden geëvalueerd. Daarnaast is de PVG naar een CI-model bijzonder nuttig voor studies naar transplantatievasculopathie, aangezien acute vasculaire afstoting geen belangrijke storende factor is en de ontwikkeling van vasculopathie vergelijkbaar is met de bevindingen in de klinische praktijk.

Laten we beginnen. De donor die wordt gebruikt bij deze ORTHOTOPE aortatransplantatie is een PVG-rat met een gewicht van ongeveer 250 tot 300 gram. Nadat het dier is geanestheseerd, scheert u de haren op de buik en de borstkas.

Plaats de rat op haar rug en breng een gezichtsmasker aan over de neus en mond. Om de anesthesie te handhaven, wordt het abdominale en thoracale gebied ruim gedesinfecteerd met Provo-jodium, gevolgd door 80% ethanol. Controleer vervolgens de reflexen van het dier door in de achterpoten te knijpen.

Om te bevestigen dat het dier voldoende is geanestheseerd. Bloed de rat leeg door het abdomen te openen en een gat in de aorta abdominalis te maken. Open voorzichtig de thorax om de aorta thoracica descendens te lokaliseren.

Dissecteer de aortathoracica uit het omliggende weefsel, zoals vet, zenuwen en de slokdarm. Neem een stuk aorta van 1,5 centimeter weg met behulp van acuta-scharen zonder het aortawefsel te beschadigen. Spoel het aortagraft grondig door met koude zoutoplossing en bewaar het graft bij vier graden Celsius.

De ontvanger voor deze orthotope aortatransplantatie is een A CI rat met een gewicht van ongeveer 250 tot 300 gram. Om met deze procedure te beginnen, scheert u het buikgebied van de geanestheseerde rat en brengt u oogzalf aan om uitdroging van de ogen tijdens de anesthesie te voorkomen. Plaats de rat op de rug en plaats een gezichtsmasker over de neus en mond om de anesthesie in stand te houden.

Desinfecteer vervolgens het buikgebied met provo jodium, gevolgd door 80% ethanol. Nadat er in de achterpoten is geknepen om te bevestigen dat de rat voldoende is geanestheseerd, wordt de buik geopend door een mediane abdominale incisie te maken en de huid en spieren te scheiden. Twee stappen.

Zodra de buikholte is geopend, plaatst u de darmen in de met zoutoplossing bevochtigde handschoen. Vouw de handschoen om de darmen heen om vochtverlies te voorkomen. Verwijder het vetweefsel dat de abdominale aorta bedekt.

Dissecteer de aorta vanaf de infrarenale regio tot aan de bifurcatie, waarbij zorgvuldig moet worden voorkomen dat de zijtakken van de vaten beschadigd raken. Ligeer indien nodig de takken van de aorta na de dissectie van de aorta. Gebruik vervolgens een microsurgische klem op het infrarenale deel van de aorta om de bloedstroom te stoppen.

Plaats vervolgens een tweede klem dicht bij de bifurcatie van de aorta. Nu de bloedstroom is gestopt, wordt een kort segment van de aorta verwijderd. Neem daarna het donor-aorta-transplantaat dat in 0.9% zoutoplossing op ijs is bewaard.

Verkort het tot de juiste lengte en plaats het in de opening in de aorta. Verbind de aortadonor met de aorta van de ontvanger door middel van doorlopende 8-0 Prolene-hechtingen, beginnend met de craniale end-to-end anastomose. Wanneer de distale end-to-end anastomose is voltooid, wordt de distale klem voorzichtig geopend.

Open vervolgens voorzichtig de schedelklem. Aan het distale uiteinde van de aorta moet een zichtbare puls waarneembaar zijn. Plaats nu de darmen terug in de buikholte en spoel de buikholte met voorverwarmde steriele zoutoplossing.

Sluit de spierlaag van de buikwand met een doorlopende hechting van 6-0 Prolene. Gebruik vervolgens doorlopende 5-0 Prolene-hechtingen om de huid te sluiten terwijl de rat nog onder narcose is. Injecteer subcutaan vier tot vijf milligram per kilogram carprofen.

Plaats het dier terug in de kooi. Voeg gedurende drie dagen methimazol toe aan het drinkwater als pijnbestrijding. Na transplantatie.

De histopathologische resultaten na 120 dagen worden gedemonstreerd op onze histologiemicroscoop. De beelden zullen de ontwikkeling van transplant-vasculopathie duidelijk laten zien. De ontstane luminale vernauwing wordt toegelicht middels computeranimatie.

We hebben zojuist laten zien hoe een autotopische aortatransplantatie bij ratten wordt uitgevoerd. Daarnaast hebben we via histopathologie de succesvolle ontwikkeling van transplantatie-vasculopathie na 120 dagen aangetoond. Deze methode maakt het mogelijk om de initiële effecten van geneesmiddelen op chronische allograft-vasculopathie te onderzoeken.