Name: Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Leer orthotope aortatransplantatie bij ratten om chronische vasculopathie te bestuderen. Deze methode maakt histologische analyse van neointima-vorming mogelijk voor onderzoek naar transplantatieafstoting.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Christiane Pahrmann voor haar histologische werk. Financiering Sonja Schrepfer heeft een onderzoekssubsidie ​​van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 en SCHR992/4-1).]

Ratten met een gewicht van ongeveer 250-300g worden gekocht van Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Transplantaties worden uitgevoerd met behulp van PVG ratten als donoren, en ACI ratten als ontvangers. Ratten zijn gehuisvest onder gangbare condities, gevoed standaard rat chow en water ad libidum. Alle chirurgische instrumenten zijn gesteriliseerd. Donor voorbereiding: Verdoven rat met isofluraan (2,5-3%) met behulp van een inductie kamer. <ol><li> Scheren van de buik-en borstkas haar en plaats de rat op zijn rug en zet een masker over zijn neus en mond te houden van de anesthesie. </li><li> Ontsmet de buik-en borstkas gebied op grote schaal gebruik van Provo-Jodium, naast het gebruik 80% ethanol, herhaalt u deze stap drie keer. </li><li> Controleer reflexen knijpen de achterpoten voeten om er zeker van dat de rat voldoende anesthesized. </li><li> Exsanguinate de rat door het openen van de buik en het snijden van een gat in de abdominale aorta. </li><li> Voorzichtig openen van de thorax aan de thoracale aorta te vinden. </li><li> Ontleden de thoracale aorta uit de omliggende weefsels zoals vet, de zenuwen en de slokdarm. </li><li> Trekken een 1,5 cm stuk van de aorta met behulp van een Couter, zonder beschadiging van het weefsel van de aorta. </li><li> Grondig perfuseren de aorta transplantaat met koude steriele zoutoplossing en bewaar het transplantaat bij 4 ° C. </li></ol> Ontvanger: Verdoven rat met isofluraan (2,5-3%) met behulp van een inductie kamer. Lichaamstemperatuur wordt gehandhaafd tijdens de chirurgische ingreep. <ol><li> Scheren buikstreek en gelden oogzalf om de ogen te voorkomen dat het drogen tijdens anesthesie. </li><li> Leg de rat op zijn rug en zet een masker over zijn neus en mond te houden van de anesthesie. </li><li> Ontsmet de buikstreek met behulp van Provo-Jodium, naast het gebruik 80% ethanol, herhaalt u deze stap drie keer. </li><li> Controleer reflexen knijpen de achterpoten voeten om er zeker van dat de rat voldoende anesthesized. </li><li> Voer een middellijn incisie in de buik het scheiden van de huid en de spieren in twee stappen om de buik te openen. </li><li> Plaats de darmen in een verwarmde zoutoplossing gehydrateerd poeder handschoen. Vouw de handschoen rond de darmen om verlies van vocht te voorkomen. </li><li> Verwijder het vetweefsel met betrekking tot de abdominale aorta. </li><li> Ontleden van de aorta van de regio infrarenale formulier naar de vertakking, Pas op dat u schade aan de takken van de schepen te veroorzaken. </li><li> Indien nodig afbinden takken van de aorta. </li><li> Gebruik eerst een microchirurgische klem op de infrarenale deel van de aorta ontleed om de bloedstroom te stoppen. </li><li> Plaats vervolgens een tweede klem dicht bij de bifurcatie van de aorta. </li><li> Nu de bloedstroom is gestopt, moet u een klein segment van de aorta. </li><li> Neem de donor aorta transplantaat, dat is in 0,9% steriele zoutoplossing bewaard op ijs, verkorten tot het voldoende lengte en in de kloof positie. </li><li> Sluit de donor aorta naar de ontvanger aorta, het uitvoeren van lopende hechtingen met 8-0 prolene hechtdraad (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). Begin met de schedel end-to-end anastomose. </li><li> Wanneer het distale end-to-end anastomose is voltooid, voorzichtig open de distale klem. </li><li> Wanneer er geen bloeden na het openen van de distale klem, voorzichtig openen van de schedel klem. In het geval van bloeden bij de hechtingen, weer te sluiten van de klem, zoek het bloeden te stoppen en het bloeden met behulp van een enkele steek. </li><li> Er moet een zichtbare impuls aan het distale uiteinde van de aorta te zijn. </li><li> Volgende terug naar de darmen in de buik. </li><li> Spoel de buik met een voorverwarmde steriele zoutoplossing. </li><li> Sluit de spierlaag van de buikwand met 6-0 prolene lopen hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). </li><li> Gebruik 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) loopt hechtingen op de huid te sluiten. </li><li> Terwijl de rat is nog steeds in anesthesie, injecteren 4-5mg/kg Carprofen subcutaan. </li><li> Om voldoende analgesie voor dit soort procedure, wordt metamizol toegevoegd aan het drinkwater (50 mg per 100 ml Metamizol) voor pijnstillers voor 3 dagen na de transplantatie. </li></ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

Om verschillende redenen vonden we de orthotope aorta transplantatie model een meer nauwkeurige manier om de ontwikkeling van TVP ten opzichte van de heterotope harttransplantatie model te onderzoeken: Ten aanzien van de chirurgische techniek, de aorta transplantatie model belichaamt een gemakkelijk uitvoerbaar methode, waarbij uitsluitend de verwezenlijking van end-to-end-anastomose, terwijl de heterotope harttransplantatie model kan worden beschouwd als een meer complexe en foutgevoelige uitdaging om de vaardig...

<table><tbody><tr><td>Chirurgische microscoop (vergroting 25x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>shaver</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provo-Iodine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ijskoude 0.9% zoutoplossing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>voorverwarmde 0.9% steriele zoutoplossing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>oogzalf</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>handschoen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>microschirurgische scharen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pincetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>klemmen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 hechtdraad (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 hechtdraad (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 hechtdraad (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metamizol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>wattenstaafjes</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope aorta transplantatie: een rat model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie study

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Onderzoek modellen van chronische afstoting zijn essentieel voor pathobiological en pathofysiologische processen te onderzoeken tijdens de ontwikkeling van de transplantatie vasculopathie (TVP). De meest gebruikte diermodel voor hart-en chronische afstoting studies is het heterotope harttransplantatie model uitgevoerd in het laboratorium knaagdieren. Dit model wordt veel gebruikt in experimenten, omdat Ono en Lindsey (3) publiceerden hun techniek. Voor het analyseren van de bevindingen in de bloedvaten, het hart moet worden coupes en alle schepen moeten worden gemeten. Een andere methode om chronische afstoting te onderzoeken in cardiovasculaire ondervragingen is de aorta transplantatie model (1, 2). In de orthotope aorta transplantatie model, kan de aorta gemakkelijk histologisch geëvalueerd worden (2). De PVG-to-ACI model is vooral nuttig voor CAV studies, omdat acute vasculaire afstoting is geen belangrijke storende factor en ciclosporine A (CsA) behandeling belet niet dat de ontwikkeling van CAV, vergelijkbaar met wat we vinden in de klinische setting (4 ). A7-dagen periode van CsA is vereist in dit model van acute afstoting te voorkomen en om overleving op lange termijn te bereiken met de ontwikkeling van TVP. Dit model kan ook gebruikt worden om acute cellulaire afstoting en media necrose in xenogene modellen (5) te onderzoeken.

Deze video toont de orthotope aorta transplantatie model als een eenvoudig model om de ontwikkeling van transplantatie vasculopathie (TVP) studie bij ratten.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Onderzoeksmodellen voor chronische afstoting zijn essentieel om de pathobiologische en pathofysiologische processen tijdens de ontwikkeling van transplantaat...

Het algemene doel van deze procedure is om een nauwkeurig model en een eenvoudig uitvoerbare methode vast te stellen om de ontwikkeling van transplantvasculopathie te onderzoeken. Dit wordt bereikt door gebruik te maken van een PVG- naar CI-stamcombinatie. De tweede stap van de procedure is het oogsten van de aorta van de donor.De derde stap van de procedure is het voorbereiden van de ontvanger. De laatste stap van de procedure is het anastomoseren van de aorta van de donor met de aorta van de ontvanger. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die neointimavorming aantonen middels pathohistologie.Hallo, ik ben Sonya Schwefel, professor in de transplantatie-immunologie in Thet Eye Lab aan het University Heart Center in Hamburg, Duitsland. En ik ben Manish Duboff, eveneens van het TS Eye Lab.Mijn laboratorium is geïnteresseerd in transplantatie-immunologie. In deze video introduceren we het orthotope aortatransplantatiemodel, een eenvoudig en valide model om de ontwikkeling van transplantatie-vasculopathie bij ratten te bestuderen. In ons laboratorium gebruiken we deze procedure om chronische afstoting bij cardiovasculaire transplantaties te onderzoeken.In het orthotope aortatransplantatiemodel kan de aorta eenvoudig histologisch worden geëvalueerd. Daarnaast is de PVG naar een CI-model bijzonder nuttig voor studies naar transplantatievasculopathie, aangezien acute vasculaire afstoting geen belangrijke storende factor is en de ontwikkeling van vasculopathie vergelijkbaar is met de bevindingen in de klinische praktijk.Laten we beginnen. De donor die wordt gebruikt bij deze ORTHOTOPE aortatransplantatie is een PVG-rat met een gewicht van ongeveer 250 tot 300 gram. Nadat het dier is geanestheseerd, scheert u de haren op de buik en de borstkas.Plaats de rat op haar rug en breng een gezichtsmasker aan over de neus en mond. Om de anesthesie te handhaven, wordt het abdominale en thoracale gebied ruim gedesinfecteerd met Provo-jodium, gevolgd door 80% ethanol. Controleer vervolgens de reflexen van het dier door in de achterpoten te knijpen.Om te bevestigen dat het dier voldoende is geanestheseerd. Bloed de rat leeg door het abdomen te openen en een gat in de aorta abdominalis te maken. Open voorzichtig de thorax om de aorta thoracica descendens te lokaliseren.Dissecteer de aortathoracica uit het omliggende weefsel, zoals vet, zenuwen en de slokdarm. Neem een stuk aorta van 1,5 centimeter weg met behulp van acuta-scharen zonder het aortawefsel te beschadigen. Spoel het aortagraft grondig door met koude zoutoplossing en bewaar het graft bij vier graden Celsius.De ontvanger voor deze orthotope aortatransplantatie is een A CI rat met een gewicht van ongeveer 250 tot 300 gram. Om met deze procedure te beginnen, scheert u het buikgebied van de geanestheseerde rat en brengt u oogzalf aan om uitdroging van de ogen tijdens de anesthesie te voorkomen. Plaats de rat op de rug en plaats een gezichtsmasker over de neus en mond om de anesthesie in stand te houden.Desinfecteer vervolgens het buikgebied met provo jodium, gevolgd door 80% ethanol. Nadat er in de achterpoten is geknepen om te bevestigen dat de rat voldoende is geanestheseerd, wordt de buik geopend door een mediane abdominale incisie te maken en de huid en spieren te scheiden. Twee stappen.Zodra de buikholte is geopend, plaatst u de darmen in de met zoutoplossing bevochtigde handschoen. Vouw de handschoen om de darmen heen om vochtverlies te voorkomen. Verwijder het vetweefsel dat de abdominale aorta bedekt.Dissecteer de aorta vanaf de infrarenale regio tot aan de bifurcatie, waarbij zorgvuldig moet worden voorkomen dat de zijtakken van de vaten beschadigd raken. Ligeer indien nodig de takken van de aorta na de dissectie van de aorta. Gebruik vervolgens een microsurgische klem op het infrarenale deel van de aorta om de bloedstroom te stoppen.Plaats vervolgens een tweede klem dicht bij de bifurcatie van de aorta. Nu de bloedstroom is gestopt, wordt een kort segment van de aorta verwijderd. Neem daarna het donor-aorta-transplantaat dat in 0.9% zoutoplossing op ijs is bewaard.Verkort het tot de juiste lengte en plaats het in de opening in de aorta. Verbind de aortadonor met de aorta van de ontvanger door middel van doorlopende 8-0 Prolene-hechtingen, beginnend met de craniale end-to-end anastomose. Wanneer de distale end-to-end anastomose is voltooid, wordt de distale klem voorzichtig geopend.Open vervolgens voorzichtig de schedelklem. Aan het distale uiteinde van de aorta moet een zichtbare puls waarneembaar zijn. Plaats nu de darmen terug in de buikholte en spoel de buikholte met voorverwarmde steriele zoutoplossing.Sluit de spierlaag van de buikwand met een doorlopende hechting van 6-0 Prolene. Gebruik vervolgens doorlopende 5-0 Prolene-hechtingen om de huid te sluiten terwijl de rat nog onder narcose is. Injecteer subcutaan vier tot vijf milligram per kilogram carprofen.Plaats het dier terug in de kooi. Voeg gedurende drie dagen methimazol toe aan het drinkwater als pijnbestrijding. Na transplantatie.De histopathologische resultaten na 120 dagen worden gedemonstreerd op onze histologiemicroscoop. De beelden zullen de ontwikkeling van transplant-vasculopathie duidelijk laten zien. De ontstane luminale vernauwing wordt toegelicht middels computeranimatie.We hebben zojuist laten zien hoe een autotopische aortatransplantatie bij ratten wordt uitgevoerd. Daarnaast hebben we via histopathologie de succesvolle ontwikkeling van transplantatie-vasculopathie na 120 dagen aangetoond. Deze methode maakt het mogelijk om de initiële effecten van geneesmiddelen op chronische allograft-vasculopathie te onderzoeken.

orthotopic-aortic-transplantation-rat-model-to-study-development

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We beschrijven een techniek waarbij een deel van de abdominale aorta van een muis getransplanteerd orthotopically is om net onder de nierslagaders in een allogene of syngene ontvanger. Deze techniek kan nuttig zijn in studies waarin transplantatie van grote slagaders van gelijke grootte is als voordelig.

Orthotope Aorta Transplantatie in Muizen voor de Studie van vasculaire aandoeningen

We beschrijven een protocol voor aortische interpositie-grafting bij muizen. Het doel van het protocol is om een model te bieden waarmee pathologische processen en therapeutische strategieën kunnen worden bestudeerd die relevant zijn voor allo-immuunreacties in slagaders en de resulterende arteriële veranderingen die bijdragen aan falen van orgaantransplantatie.

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

Polyurethaan katheter inbrengen in de aorta lumen en hechtdraad Afbinding van de aorta induceren chronische hypoxie als gevolg van hypoperfusie van de adventitial Wasa vasorum. Dit artikel beschrijft een roman diermodel van abdominale aorta aneurysma (AAA) met eigenschappen die vergelijkbaar zijn met die van AAA bij de mens.

Oprichting van een knaagdier Model van abdominale aorta aneurysma door het blokkeren van Adventitial Vasa Vasorum perfusie

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Dit artikel presenteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatieprotocol bij ratten en de mogelijke uitkomsten ervan in de follow-up op middellange termijn.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en efficiënte methode voor de transplantatie van aortaklepblaadjes onder de niercapsule om de studie van alloreactiviteit van hartkleppen mogelijk te maken.

Een vereenvoudigd model voor heterotopische hartkleptransplantatie bij knaagdieren

We laten zien hoe een muizenmodel van pulmonale wortelimplantatie in de dalende aorta kan worden vastgesteld om de Ross-procedure te simuleren. Dit model maakt de evaluatie op middellange/lange termijn van pulmonale autograftremodellering in een systemische positie mogelijk en vormt de basis voor het ontwikkelen van therapeutische strategieën om de aanpassing ervan te bevorderen.

Een knaagdiermodel van de Ross-operatie: syngenetische longslagadertransplantatie in een systemische positie

Het orthotopische niertransplantatiemodel bij ratten draagt bij aan het onderzoek naar het mechanisme van renale allograftafstoting. Het huidige model verhoogt de overleving van de ontvangers zonder interferentie met de bloedtoevoer en veneuze reflux van het onderlichaam met behulp van een end-to-end anastomose van nierimplantatie en een end-to-side "tunnel" -methode van ureter-blaasanastomose.

Een rat orthotopisch niertransplantatiemodel voor niertransplantaatafstoting

Deze studie toont een reproduceerbare heterotope abdominale harttransplantatietechniek bij ratten die beginners kunnen leren en uitvoeren. Bovendien wordt een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten gegenereerd door heterotope abdominale harttransplantatie uit te voeren en de aortaklep van de donor te beschadigen met behulp van een geleidedraad na het oogsten.

Gemodificeerde heterotope abdominale harttransplantatie en een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten

Dit werk presenteert een diermodel van endotheliale-naar-mesenchymale overgangsgeïnduceerde fibrose, zoals te zien is bij aangeboren hartafwijkingen zoals kritieke aortastenose of hypoplastisch linkerhartsyndroom, wat gedetailleerde histologische weefselevaluatie, de identificatie van regulerende signaalroutes en het testen van behandelingsopties mogelijk maakt.

Een neonataal heterotopisch rattenharttransplantatiemodel voor de studie van endotheel-naar-mesenchymale overgang

Leer orthotope aortatransplantatie bij ratten om chronische vasculopathie te bestuderen. Deze methode maakt histologische analyse van neointima-vorming mogelijk voor onderzoek naar transplantatieafstoting.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Meer video's verkennen