Nematode Slide Preparation: een methode om dieren op een Agar Pad te monteren
JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 weergaven • 2:09 min • April 30th, 2023
- First, place a microscope slide between two other slides with tape. These provide support and spacers for the agarose pad preparation. Next, place a drop of melted agarose onto the slide. Immediately press down on it with another slide.
After the agarose solidifies, carefully separate the slides so that the agarose remains on one slide. Always use freshly made pads as dried out pads can dehydrate the animals. Ensure there are no cracks or bubbles, which can disrupt pad integrity.
Next, add a drop of anesthetic to the pad center and transfer 10 to 15 animals to it, bringing as little bacteria with them as possible. Excess bacteria could interfere with imaging. If the anesthetic solution dries out, add a second drop onto the animals.
Gently place a coverslip over the pad. Avoid forming bubbles or placing too much pressure on it to prevent damaging the animals. Finally, label the slide, which is ready for imaging.
- Start by preparing slides for imaging. Place a drop of melted agarose onto a microscope slide and immediately press down the droplet with another microscope slide gently flattening the agarose Need the agarose to dry for one minute.
Then, carefully separate the two slides and leave the solidified pad on one of the slides. Place the slide on the microscope stage and add a 5- to 10-microliter drop of anesthetic to the center of the agras pad.
Use a heat sterilized pick to quickly transfer 10 to 15 animals from the stock plate to the anesthetic droplet before the solution dries out. Then, apply a coverslip by positioning it just above the agarose pad and gently dropping it down.
Overzicht
Dit artikel beschrijft de bereiding van agarosepads voor beeldvorming van kleine dieren. Het proces omvat het creëren van een gestolde agaroselaag op een objectglas, het aanbrengen van anesthetica en het zorgvuldig plaatsen van de dieren voor observatie.
Belangrijke studieonderdelen
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Biologie
- Beeldvormingstechnieken
Achtergrond
- Agarosepads zijn essentieel voor het behoud van de integriteit van kleine dieren tijdens beeldvorming.
- Een juiste voorbereiding voorkomt uitdroging en waarborgt een succesvolle beeldvorming.
- Het minimaliseren van bacteriële contaminatie is cruciaal voor nauwkeurige resultaten.
- Het gebruik van anesthetica helpt bij het immobiliseren van de dieren voor een betere observatie.
Doel van de studie
- Om een gedetailleerd protocol te bieden voor het voorbereiden van agarosepads voor beeldvorming.
- Om het belang van het gebruik van verse materialen in het voorbereidingsproces te benadrukken.
- Om het welzijn van de dieren tijdens beeldvormingsprocedures te waarborgen.
Gebruikte methoden
- Bereiding van agarosepads met behulp van gesmolten agarose op objectglazen.
- Toepassing van een anestheticum om de dieren te immobiliseren.
- Overbrengen van de dieren naar de agarosepad met minimale bacteriële contaminatie.
- Gebruik van dekglasplaatjes om de dieren tijdens de beeldvorming te beschermen.
Belangrijkste resultaten
- Agarosepads succesvol geprepareerd die de integriteit van het dier behouden.
- De effectiviteit van anesthetica bij het immobiliseren van proefpersonen aangetoond.
- Best practices uiteengezet voor het minimaliseren van bacteriële aanwezigheid.
- Een betrouwbare methode geboden voor het beelden van kleine dieren.
Conclusies
- Het protocol waarborgt hoogwaardige beelden.
- Verse agarosepads zijn essentieel voor het dierenwelzijn en de nauwkeurigheid van de gegevens.
- Aandacht voor detail bij de voorbereiding kan de experimentele resultaten aanzienlijk beïnvloeden.
Veelgestelde vragen
Industriële relevantie voor directie
Bij vroege targetvalidatie en fenotypische screening is het behoud van de integriteit van het organisme tijdens live-imaging essentieel voor nauwkeurige fenotypische read-outs. Deze methode ondersteunt reproduceerbare monsterpreparatie voor assays op basis van C. elegans, waardoor de variabiliteit in metingen van de cellulaire en organelmorfoloigie wordt verminderd. Door gestandaardiseerde montage mogelijk te maken, verbetert het de betrouwbaarheid van gegevens in preklinische discovery-workflows.
Strategische toepassingen in biofarmaceutische R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt consistente immobilisatie van nematoden mogelijk voor getrouwe beeldvorming van cellulaire structuren en organelmorfologie.
- Operationele waarde: Biedt een gestandaardiseerde, herbruikbare montagebenadering die door de preparatie veroorzaakte variabiliteit tussen experimenten minimaliseert.
Screening & Assayontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Ondersteunt kwantitatieve imaging-assays door dehydratatie en bewegingsartefacten tijdens time-lapse of high-content screening te voorkomen.
- Operationele waarde: Faciliteert de standaardisatie van assays door reproduceerbare bereiding van agarosepads, wat de vergelijkbaarheid tussen experimenten verbetert.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Wetenschappelijke waarde: Behoudt de fysiologische relevantie van C. elegans-modellen door de weefselintegriteit tijdens beeldvorming te bewaren, wat bijdraagt aan ziekterelevente fenotypische analyse.
- Operationele waarde: Maakt longitudinale beeldvormingsstudies mogelijk door monsters te stabiliseren over uitgebreide observatieperioden.
Integratie van Pipeline & Workflow
Deze methode past binnen het vroege stadium van het ontdekkingsproces en ondersteunt targetvalidatie door middel van betrouwbare fenotypische screening in C. elegans-modellen.
- Discovery Biology: Maakt hypothesetoetsing mogelijk via duidelijke visualisatie van subcellulaire structuren en dynamische processen in levende dieren.
- Screening: Levert assay-klare monsters met consistente immobilisatie, waardoor fout-negatieven door beweging of uitdroging worden verminderd.
- Analytics: Produceert kwantificeerbare imaging-outputs door bewegingsonscherpte en omgevingsartefacten te minimaliseren.
- Translationeel onderzoek: Ondersteunt continuïteit van genetische screening naar fenotypische validatie door de getrouwheid van het model te behouden.
- Enterprise Reuse: Vertegenwoordigt een schaalbare, kosteneffectieve techniek voor monsterpreparatie die aanpasbaar is over meerdere imaging-platforms.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verbetert het voorspellend vertrouwen in fenotypische assays door artefacten gerelateerd aan de preparatie te verminderen.
- Operationele waarde: Verhoogt de reproduceerbaarheid en doorvoersnelheid in screeningcampagnes op basis van imaging.
- Strategische waarde: Ondersteunt go/no-go-beslissingen via betrouwbare, high-content fenotypische gegevens.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering van targets mogelijk door de datakwaliteit in preklinische modellen te verbeteren.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist een basisopleiding in microscopie en aseptische technieken voor het hanteren van preparaten en reagentia.
- Afhankelijk van toegang tot een magnetron of warmtebron voor het smelten van agarose en een vlak oppervlak voor de vorming van de pads.
- Maakt standaardisatie van de agaroseconcentratie en het volume anestheticum tussen gebruikers en laboratoria noodzakelijk.
- Houd bij aanpassing aan andere modelorganismen rekening met soortspecifieke gevoeligheid voor anestheticum.
- Beperkt door de noodzaak tot verse bereiding van de pads; vooraf gemaakte pads zijn niet geschikt vanwege het risico op uitdroging.
Veelgestelde vragen over Biofarmacie
Antilichaamkleuring in
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Ruimtelijke en temporele analyse van Active ERK in de
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Cell Cycle analyse in de C. elegans Germline met de Thymidine analoge EdU
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Diagnose van Ecto-en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Basis-
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Freeze-Cracking van nematoden: een methode om inwendige wormweefsels bloot te leggen voor vlekken
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Studying the Effect of Pesticides on Caenorhabditis elegans Neurons
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Helminth-verzameling en -identificatie uit wilde dieren
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Immobilisatie van Caenorhabditis elegans te analyseren intracellulair Transport in neuronen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Kwantitatieve benaderingen voor de studie van cellulaire structuren en organelle morfologie in Caenorhabditis elegans
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 29 augustus 2026