India Inktinflatie: een kleuringsmethode om tumorknobbeltjes te visualiseren
JoVE Encyclopedia of Experiments
Kankeronderzoek
0 weergaven • 3:07 min • April 30th, 2023
Begin by placing a euthanized mouse ventral side up on a surgical bed and securing the limbs of the animal. Using scissors, cut along the midline through the rib cage up to the salivary glands. Place a pipette tip underneath the trachea to elevate and isolate it. Rotate the surgical bed 180 degrees. Insert a syringe needle containing an India ink stain into the trachea and inject the ink into the lungs until you feel resistance.
Cancer cells secrete a large amount of lactic acid that generates a strong negative charge on the cell surface. When these cells are stained with India ink, an acidic stain, the cell surface repel the stain and remain unstained.
Use scissors to cut the trachea and slide a pair of tweezers under the lungs. Gently pull the lungs out of the animal's body. Rinse the lungs in water and transfer them into a vial containing Fekete's solution to remove excess stain and fix the tissue in a fume hood. The tumor nodules appear white against the dark background.
In the following protocol, we will perform the India ink inflation technique to validate lung metastasis.
To validate the metastasis of the primary tumor to the lung, first place the mouse in the supine position on a polystyrene board and secure the legs to ensure an unobstructed access to the trachea. Spray the mouse with 70% ethanol. Then, use a pair of scissors to make an incision along the midline of the mid abdomen of the mouse through the rib cage and up toward the salivary glands. Identify the trachea. Then, use forceps to remove the surrounding tissues.
Next, holding a pipette tip in one hand, thread the tip under the trachea and gently lift the tissue up and away from the body. Keeping the trachea elevated, rotate the dissecting platform 180 degrees. Then, insert a half cc 27-gauge tuberculin syringe into the trachea and completely inflate the lungs with India ink until a strong resistance is felt.
Then, using a pair of scissors, cut the trachea. Holding the mouse in place with one forceps, insert another forceps under the lungs and pull the lung lobes out of the mouse. Rinse the lungs briefly in a beaker of water and transfer the tissue into a fume hood. Then, place the lungs in a glass scintillation vial containing 3 milliliters of Fekete's solution, capping the vial to prevent the solution from evaporating. After a few minutes, transfer the lungs into a Petri dish and count the number of single, white, metastatic tumor nodules.
Overzicht
Dit artikel beschrijft een protocol voor het valideren van longmetastasen in een muismodel met behulp van de India-inkt-inflatietechniek. De methode omvat chirurgische procedures om de trachea te isoleren en de longen te vullen met India-inkt, waardoor metastatische tumornoduli gevisualiseerd kunnen worden.
Belangrijkste onderdelen van de studie
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Oncologie
- Experimentele biologie
Achtergrond
- Longmetastase is een veelvoorkomende complicatie bij de progressie van kanker.
- Indische inkt wordt gebruikt als kleurmiddel om tumornduli te visualiseren.
- De techniek maakt het mogelijk om de metastatische verspreiding vanuit primaire tumoren te beoordelen.
- Het begrijpen van metastasering is cruciaal voor de ontwikkeling van effectieve kankertherapieën.
Doel van de studie
- Om de aanwezigheid van longmetastasen in een muismodel te valideren.
- Om het gebruik van India-inkt aan te tonen voor het visualiseren van tumornoduli.
- Om een gedetailleerd chirurgisch protocol voor onderzoekers te bieden.
Gebruikte methoden
- Plaatsing van een geëuthanaseerde muis op een operatietafel.
- Incisie door de ribbenkast om toegang te krijgen tot de trachea.
- Opblazen van de longen met India-inkt via de trachea.
- Overdracht van de longen naar Fekete's oplossing voor fixatie en kleuring.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle opblaasing van de longen met India-inkt bracht metastatische noduli aan het licht.
- Witte tumorknobbels waren duidelijk zichtbaar tegen een donkere achtergrond.
- De methode bood een betrouwbare manier om longmetastasen te beoordelen.
- Duidelijke visualisatie helpt bij het begrijpen van de progressie van kanker.
Conclusies
- De techniek van inflatie met Indische inkt is effectief voor het valideren van longmetastasen.
- Dit protocol kan worden gebruikt door onderzoekers die kankermetastasen bestuderen.
- Verdere studies kunnen voortbouwen op deze methode om therapeutische interventies te onderzoeken.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de industrie
Kwantitatieve visualisatie van metastatische tumornoduli in preklinische modellen is essentieel voor het valideren van ziekteprogressie en het evalueren van therapeutische hypothesen. De methode van opblazen met Indische inkt maakt een duidelijke detectie en enumeratie van longmetastasen mogelijk, wat bijdraagt aan een robuuste targetvalidatie en mechanistische risicoreductie in oncologische pipelines. Deze aanpak versterkt het voorspellende vertrouwen bij cruciale discovery- en preklinische inflection points, wat bijdraagt aan beslissingen over de verdere ontwikkeling van de portfolio.
Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Maakt directe kwantificering van de metastatische last in ziekterelevante muismodellen mogelijk.
- Ondersteunt functionele validatie van metastatische pathways en kandidaat-targets.
- Faciliteert mechanische risicoreductie door tumorweefsel te onderscheiden van normaal weefsel.
- Biedt objectieve gegevens voor het prioriteren van oncologische targets op basis van het metastatische potentieel.
Screening & Assay-ontwikkeling
- Stelt een reproduceerbaar eindpunt vast voor de evaluatie van anti-metastatische verbindingen in vivo.
- Standaardiseert de beoordeling van het aantal metastatische noduli voor vergelijkbaarheid tussen studies.
- Levert kwantitatieve resultaten die geschikt zijn voor verdere statistische analyse.
- Maakt betrouwbare benchmarking van de effectiviteit van verbindingen in preklinische screens mogelijk.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt preklinische bevindingen uit met klinische eindpunten door spontane metastase te modelleren.
- Ondersteunt de continuïteit van discovery tot preklinische validatie van anti-metastatische strategieën.
- Biedt een platform voor de evaluatie van translationele biomarkers van metastatische progressie.
- Informeert de risicogecorrigeerde verdere ontwikkeling van oncologische assets op basis van metastatische readouts.
Integratie van Pipeline en Workflow
De techniek van inflatie met India-inkt is geïntegreerd in het continuüm van oncologische ontdekkingen, van vroege targetvalidatie tot preklinische effectiviteitsstudies.
- Ontdekkingsbiologie: Maakt hypothesetoetsing van metastatische mechanismen en betrokkenheid van signaalpaden mogelijk.
- Screening: Biedt een gestandaardiseerde, kwantitatieve assay voor het tellen van metastatische knobbeltjes.
- Analytica: Ondersteunt statistische vergelijking van de metastatische last tussen experimentele groepen.
- Translationeel onderzoek: Slaat een brug tussen preklinische en klinische relevantie door spontane metastase te modelleren.
- Bedrijfsbrede herbruikbaarheid: Biedt een herbruikbaar protocol voor diverse oncologische onderzoeksprogramma's die zich richten op metastase.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellend vertrouwen in metastatische modellen en targetvalidatie.
- Operationele waarde: Levert een gestandaardiseerde, reproduceerbare en schaalbare beoordeling van longmetastasen.
- Strategische waarde: Maakt geïnformeerde go/no-go-beslissingen mogelijk en vermindert het biologische risico in een laat stadium binnen oncologieportfolio's.
- Impact op portfolio: Ondersteunt de risico-gecorrigeerde prioritering van activa op basis van metastatisch potentieel en therapeutische respons.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist technische expertise in chirurgische dissectie en het hanteren van in vivo modellen.
- Vereist toegang tot geschikte kleuringsreagentia en fixatieoplossingen (India-inkt, Fekete's oplossing).
- Vereist standaardisatie tussen teams voor het tellen van noduli en de rapportage van gegevens.
- Kan aanpassing vereisen voor verschillende tumormodellen of metastatische locaties.
- Praktische beperkingen omvatten beoordeling uitsluitend bij het eindpunt en afhankelijkheid van de detectie van zichtbare noduli.
Veelgestelde vragen over Biopharma
Primaire tumor en MEF Cell Isolation om te studeren longmetastase
Gerelateerde video's
0 Bekeken
De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Een preklinische muismodel van osteosarcoom definiëren de extracellulaire vesikel-gemedieerde communicatie tussen Tumor en mesenchymale stamcellen
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Experimentele metastase en CTL adoptieve overdracht Immunotherapie Muis Model
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Multi-foton Imaging van de tumorcel invasie in een orthotope Muis Model van Oral plaveiselcelcarcinoom
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Virale nanopartikels voor
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Intravasculaire Perfusie van Carbon Black Ink Hiermee Betrouwbare Visualisatie van hersenvaten
Gerelateerde video's
0 Bekeken
A Technique to Assess the In Vivo Localization of Tumor-Specific Antibodies
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Intra-iliaca Injectie voor Efficiënte en Selectieve Modellering van Microscopisch botmetastase
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker
Gerelateerde video's
0 Bekeken
Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026