De Methode van Knaagdieren Hele Embryo Cultuur met behulp van de Rotator-type Bottle Cultuur System
August 28th, 2010
Hele embryo cultuur techniek stelt ons in staat om de cultuur muis en rat embryo's Ex vivo Conditie tijdens een beperkte periode die overeenkomt met midgestation fasen. In deze video protocol, tonen wij onze standaard procedures van de rat gehele embryo cultuur na E12.5 het gebruik van de rotator-type fles cultuur-systeem.
In de ontwikkelingsbiologie worden verschillende dieren gebruikt voor experimenten. De hor-landbouwtechniek voor het roteren van embryo's werd gevestigd in de jaren 1950 en ontwikkeld vóór de instelling van moderne genetische manipulatie in de landbouw in Hawaii. Verzwakte directeuren richten zich rechtstreeks op gebieden van liefde met sterven of het transfecteren van genen, aangezien embryo's kunnen worden gemanipuleerd en als een microscoop, daarom is de gehele embryocultuur een zeer nuttig hulpmiddel.
Wanneer we het dynamische ontwikkelingsproces van maori-embryo's na post-implantatieontwikkeling willen bestuderen. De groei van maori-embryo's is kritisch afhankelijk van de functionele presentator, wat de kweekperiode beperkt. Over het algemeen kunnen we embryo's kweken gedurende de periode van embryonale dag 8,5 tot 14,5 bij de rat en E 6,5 en 12,5 bij de muis.
In het laboratorium kweken we rat- en muis-embryo's met behulp van een roterend kweeksysteem. Dit kweeksysteem is het populairst en het meest geschikt voor het kweken van rat- en muis-embryo's tijdens de draagtijd. Dat is na E 11,5 en 9,5 bij ratten en muizen.
In deze video willen we ons standaardprotocol voor hongerige kweek introduceren met behulp van E 12,5 RU-embryo's. Onder deze omstandigheden kan het embryo twee dagen worden gekweekt, wat voldoende is om de verschillende effectieve manipulaties in hor-landbouw te onderzoeken. Er zijn twee cruciale stappen voor het succes.
Ten eerste moet de dissectieprocedure nauwkeurig zijn om het embryo niet te beschadigen, vooral de staafvaten. Ten tweede moet de procedure zo snel mogelijk zijn. Dit geldt vooral voor oudere embryo's.
Bijvoorbeeld, in het geval van de E 10,5 muis-embryo's, moeten deze binnen 30 minuten worden overgebracht. We pasten de gehele embryo-kweektechniek toe voor zes mutante embryo's. We analyseren bijvoorbeeld het migratiepatroon van neurore-cellen in de mutant door een klein aantal cellen met kleurstof te kleuren of door niveaucellen in de embryo's van het witte type en de gemuteerde achtergrond te transplanteren.
Bovendien hebben we een methode ontwikkeld voor het overbrengen van genen naar gekweekte muis- en rode embryo's door middel van elektro-operatie die elektrische schokken gebruikt. We kunnen eenvoudig constructies van exogene genen, dominante negatieve vormen en siRNA's introduceren in het gebied van de zich ontwikkelende hersenen. Daarom kunnen we eenvoudig genfuncties analyseren door middel van functieverlies- en functieverwervingsexperimenten.
We onderzoeken ook het gedrag van cellen die zijn gelabeld met GFP of RFP met behulp van orgaancultuur of plaaskweek, of landbouw. U kunt dus verschillende experimenten uitvoeren met behulp van Lio-kweek in combinatie met andere technieken.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Dit videoprotocol toont de gehele embryocultuurtechniek voor rattenembryo's na E12.5 met behulp van een rotatietype flescultuursysteem. Deze methode maakt ex vivo-cultuur mogelijk tijdens cruciale middenfase-stadia.
Belangrijke studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Ontwikkelingsbiologie
- Embryologie
- Ex vivo-cultuurtechnieken
Achtergrond
- De gehele embryocultuurtechniek is gevestigd sinds de jaren 1950.
- Het maakt manipulatie van embryo's mogelijk voor genetische studies.
- Embryo's kunnen worden gekweekt tijdens specifieke ontwikkelingsperioden.
- Groei is afhankelijk van de functionele aanwezigheid van het embryo.
Doel van de studie
- Om dynamische ontwikkelingsprocessen van embryo's na implantatie te bestuderen.
- Om een gestandaardiseerde procedure voor gehele embryocultuur te bieden.
- Om onderzoek in de ontwikkelingsbiologie te faciliteren.
Gebruikte methoden
- Gehele embryocultuurtechniek
- Rotatietype flescultuursysteem
- Ex vivo-omstandigheden voor rattenembryo's
- Cultuurperioden van embryonale dag 8.5 tot 14.5
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle cultuur van rattenembryo's na E12.5.
- Demonstratie van standaardprocedures voor embryomanipulatie.
- Inzichten in de cruciale groeiperioden van embryo's.
- Stapeling van een betrouwbare methode voor toekomstige studies.
Conclusies
- De gehele embryocultuurtechniek is een waardevol hulpmiddel in de ontwikkelingsbiologie.
- Het maakt de studie van embryonale ontwikkeling in gecontroleerde omstandigheden mogelijk.
- Gestandaardiseerde methoden verbeteren de reproduceerbaarheid in onderzoek.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
The rotator-type whole embryo culture (WEC) system enables direct manipulation and observation of rodent embryos during critical midgestation stages, supporting mechanistic de-risking in early discovery. This ex vivo platform allows for precise genetic and cellular interventions, facilitating functional target validation and pathway interrogation before in vivo studies. Its reproducibility and adaptability make it a valuable asset for translational research and portfolio triage in developmental and disease modeling.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct genetic or cellular manipulation for functional target validation in mammalian embryos.
- Supports mechanistic de-risking by allowing loss- and gain-of-function studies in a controlled ex vivo system.
- Facilitates pathway clarification and hypothesis testing at key developmental inflection points.
- Provides a platform for evaluating the impact of candidate interventions on embryonic development.
Screening & Assay Development
- Prepares validated, manipulable embryonic systems for downstream phenotypic screening or mechanistic assays.
- Enables reproducible, quantitative assessment of developmental outcomes following genetic or chemical perturbation.
- Supports assay standardization and scalability for comparative studies across genotypes or interventions.
- Allows for reliable evaluation of compound or gene function in a physiologically relevant context.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant developmental stages for modeling congenital disorders or gene function.
- Provides continuity from discovery through preclinical validation by enabling mechanistic studies in intact embryos.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by clarifying developmental liabilities early in the pipeline.
- Facilitates biomarker discovery and validation in a controlled, manipulable system.
Pipeline & Workflow Integration
The rotator-type WEC system bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven manipulation and quantitative analysis of embryonic development. Positioned between in vitro assays and in vivo models, it offers a unique platform for mechanistic studies and target de-risking.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification through direct genetic or cellular intervention.
- Screening: Provides assay-ready, reproducible embryonic systems for quantitative phenotypic readouts.
- Analytics: Enables measurement of developmental, migratory, or molecular outcomes for comparative analysis.
- Translational Research: Connects early mechanistic findings to preclinical disease modeling and biomarker validation.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, adaptable platform for repeated use across multiple discovery programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target validation.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable ex vivo workflows for developmental studies.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by clarifying biological risk early.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of discovery-stage assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in embryology, microdissection, and ex vivo manipulation techniques.
- Needs specialized rotator-type bottle culture instrumentation and microscopy infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization for reproducibility and data comparability.
- Adaptation may be necessary for different rodent strains or developmental stages.
- Culture period is limited by embryonic dependence on placental function, restricting window of analysis.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:00
The Method of Rodent Whole Embryo Culture Using the Rotator-type Culture System
2:06
Setting up Whole Embryo Culture System
3:53
Removal of Embryos from the Uterus
2:52
Preparation of Culture Medium
4:52
Dissection of Rat Embryos
7:27
Results and Discussion
0:07
Introduction
