Name: Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Leer hoe muizenhypofyse-eiwitten worden geïsoleerd en gehomogeniseerd voor onderzoek naar auto-immuun hypophysitis. Dit protocol omvat centrifugatie, BCA-bepaling en emulsiebereiding met adjuvans.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door NIH subsidie ​​DK080351 naar de PC.

Experimentele Protocol De eerste stap in deze experimentele protocol is het verzamelen van een groot aantal van de muis hypofyse. De tweede stap is om de klieren homogeniseren om een ​​proteïne-extract te bereiden. De derde stap is om deze eiwitten emulgeren met een vette mix. Stap 1: Verzameling en opslag van de muis hypofyse klieren De muis hypofyse zit aan de basis van de schedel in een depressie van het sphenoïd bot genaamd de sella turcica, zijdelings omgeven door de nervus zenuwen en naar voren door de optische chiasma. De klier bestaat uit een grotere voorkwab en kleinere posterior en intermediair lobben, en weegt gemiddeld 1,9 mg. Hypofyse worden verzameld van muizen van gemengde stammen, geslachten en leeftijden, bestemd om te worden gedood door het dier zorginstelling. Het isoleren van de hypofyse, wordt de muis gedood, de huid boven ontleed de schedel, en de schedel bot opengesneden met een schaar. De hersenen zijn opgeheven om de hypofyse, die vervolgens wordt geïsoleerd van de omringende dura mater bloot te leggen, schepte uit de sphenoïd bot en opgeslagen in een plastic buisje op droog ijs. In het algemeen gebruiken we 300 muis hypofyse voor een eiwit voorbereiding, een aantal dat kan worden verzameld door een persoon in 9 uur. Zodra de collectie is voltooid, wordt de buis met de hypofyse opgeslagen bij -80 ° C tot klaar voor de volgende stap. Stap 2. Extractie van de muis hypofyse eiwitten <ol><li> Voeg de homogenisering buffer om een ​​15 ml Falcon buis (catalogus geen 352.059), bewaard in een ijsbad, met behulp van 250 ul buffer voor elke 100 verzamelde hypofyse. Gebruik een buffer van ionische sterkte vergelijkbaar met degene die is fysiologisch aanwezig is in het cytoplasma van de cel (0,2 M) en van de fysiologische pH (7.4). We maken gebruik van fosfaat gebufferde zoutoplossing (0,161 M, pH 7,4), aangevuld met een proteaseremmer cocktail (Sigma-Aldrich, catalogus geen P8340-1 ml). </li><li> Voeg de hypofyse om de buffer vlak voor homogenisering en plaats van de generator (5-mm diameter) van de Polytron homogenisator op de bodem van de Falcon buis. Homogeniseren op maximum toerental gedurende 30 seconden voorzichtig het verplaatsen van de Falcon buis op en neer terwijl het in het ijsbad. Dan rest de homogenaat op ijs gedurende 1 minuut. Herhaal de homogenisering en koeling stappen nog twee keer. Deze zachte homogenisering zou breken van de cellen en laat cytosolische eiwitten zonder verstoring van de kernen. </li><li> Voor het verwijderen van kernen, ononderbroken weefsel en onoplosbare materialen (zoals bindweefsel en gedenatureerd eiwit-complexen), centrifuge de homogenaat bij lage snelheid (1000g) gedurende 10 min bij 4 ° C. </li><li> Breng het supernatans (nu genoemd Post-Nuclear supernatant, PNS) om een ​​nieuw Falcon buis, zorg om te vertrekken van de pellet ongestoord, en opslaan van de PNS op het ijs. </li><li> Resuspendeer de pellet in het oorspronkelijke volume van homogenisering buffer (250 ul buffer voor elke 100 verzamelde hypofyse), meng zoals hierboven, centrifuge zoals hierboven, en deze vervolgens samen de tweede PNS met de eerste. </li><li> Aliquot de twee samengevoegde PNS monsters in microcentrifugebuizen en bewaar bij -80 ° C tot aan de volgende stap. Dit eiwit preparaat kan worden opgeslagen bij -80 ° C, maar langzamerhand verliest zijn kracht, dus we raden om het te gebruiken binnen 6 maanden na de voorbereiding. Gebruik een kleine hoeveelheid aan het eiwit opbrengst en concentratie door de BCA assay (Pierce catalogus zonder. 23.225) en het eiwit kwaliteit door gelelektroforese te bepalen. In het algemeen krijgen we ongeveer 60 mg van het eiwit van 300 muis hypofyse in 1,5 ml van homogenisering buffer, bij een concentratie ongeveer 40 mg / ml. </li></ol> Stap 3. Voorbereiding van de emulsie voor immunisatie <ol><li> Ontdooi snel de bevroren eiwit fracties die nodig zijn voor het experiment en stel de eiwit concentratie tot 20 mg / ml. Dit eiwit extract wordt geëmulgeerd 1:1 met Compleet Freund&#39;s adjuvans (CFA, Sigma F-5881) met 5 mg / ml van de warmte gedode Mycobacterium tuberculosis (Becton Dickinson, 231141). Elke muis krijgt 1 mg van de hypofyse-extract in 100 ul van de emulsie. </li><li> Het voorbeeld dat hier gegeven wordt voor het immuniseren 10 muizen, waarbij elke muis zal worden geïnjecteerd met 100 pi van de emulsie met 1 mg van de hypofyse eiwitten. Laat twee extra muizen voor materiële schade tijdens de voorbereiding, dus gebruik 12 mg van de hypofyse eiwitten. Aspire 600 pi van de 20 mg / ml hypofyse eiwitextract beschrijven boven met behulp van een 2,5 mL Hamilton gasdicht spuit. Resuspendeer de CFA door schudden, en streven 600 pi van de CFA in de andere 2,5 ml Hamilton spuit. Hechten en zorgen voor een 22-gauge micro-emulgerende naald aan de spuit gevuld met CFA. Duw de zuiger langzaam van de CFA spuit zodanig dat de naald is gevuld met CFA, bevestig vervolgens en zet de andere uiteinde vande naald aan de spuit vol met hypofyse-extract. </li><li> Duw de zuiger van de CFA spuit om de olie component duwen in de waterige hypofyse-extract, zodanig dat slechts een kleine hoeveelheid wordt gemengd. Duw de zuiger van de hypofyse extract spuit in de CFA spuit. Herhaal deze handeling geleidelijk verhogen van de hoeveelheid materiaal gemengd. Ga verder tot de gehele inhoud van de twee spuiten worden gemengd. U krijgt een witachtige en gelijkmatig verdeeld oplossing die de water-in-olie emulsie vertegenwoordigt. </li><li> Nadat de emulsie is gevormd, herhaalt u de heen-en-weer gaande beweging van ten minste 500 keer om ervoor te zorgen de emulsie wordt grondig gemengd. Na de laatste mengen cyclus, de 1:1 water-in-olie emulsie is klaar voor gebruik en bevat een hypofyse eiwit concentratie van 10 mg / ml. De emulsie zal worden geïnjecteerd op dezelfde dag subcutaan in verdoofde SJL muizen, zoals beschreven in de metgezel Jupiter artikel. </li></ol>

<ol><li>Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).</li>
<li>Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+T-lymphocyte-associated+antigen-4+blockage+can+induce+autoimmune+hypophysitis+in+patients+with+metastatic+melanoma+and+renal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer.</a> J Immunother. 28, 593-598 (2005).</li>
<li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).</li>
<li>Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+hypophysitis+and+Hashimoto%27s+disease+in+a+woman%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Anterior hypophysitis and Hashimoto's disease in a woman.</a> J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
</ol>

Ondanks het feit dat de eerste patiënt met een auto-hypophysitis werd gemeld in 1962 vier, de pathogene hypofyse autoantigenen nog moeten worden geïdentificeerd 5. Diermodellen kan heel nuttig zijn om deze autoantigenen identificeren, medeplichtigheid aan de ontdekking van biomarkers die vertaalbaar zijn naar de patiëntenzorg. Dit artikel heeft aangetoond een eenvoudige procedure voor het bereiden van hypofyse eiwitten in een vorm die geschikt is voor het induceren van auto-immune hypophysitis bij ...

<table><tbody><tr><td>15-ml Falcon-buisjes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homogenisatiebuffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fosfaatgebufferde zoutoplossing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>proteaseremmercocktail</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polytron homogenisator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCA-assay</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Complete Freund&amp;rsquo;s Adjuvans (CFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-5881</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>BD Biosciences</td><td>231141</td><td></td></tr><tr><td>2,5 mL Hamilton gastichte spuit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-gauge micro-emulgerende naald</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

voorbereiding van de muis hypofyse immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune hypophysitis

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Auto-immuun hypophysitis is een chronische ontsteking van de hypofyse veroorzaakt of vergezeld door auto-immuniteit 1. Het is van oudsher beschouwd als een zeldzame ziekte, maar de verslaglegging is sterk toegenomen in de afgelopen jaren. Hypophysitis, in feite, ontwikkelt zich niet zelden als een &quot;side-effect&quot; bij patiënten met kanker die behandeld worden met antilichamen die remmende receptoren tot expressie gebracht op T-lymfocyten, zoals CTLA-4 2 en PD-1-receptoren te blokkeren. Auto-immune hypophysitis kan experimenteel worden veroorzaakt door het injecteren van muizen met hypofyse eiwitten gemengd met een adjuvans 3. In deze video artikel zullen we laten zien hoe eiwitten uit de muis hypofyse en hoe u hen voor te bereiden in een vorm die geschikt is voor het induceren van auto-immune hypophysitis in SJL muizen extract.

Auto-immune hypophysitis kan worden gereproduceerd bij muizen door het injecteren van een uittreksel van de muis hypofyse eiwitten.

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

Auto-immuun hypofysitis is een chronische ontsteking van de hypofyse die wordt veroorzaakt door of gepaard gaat met auto-immuniteit1. Traditioneel werd het beschouwd als een ...

Auto-immuun hypofyisitis wordt gekenmerkt door een vergroting van de hypofyse en een tekort aan één of meer hypofysehormonen. De veroorzakende autoantigenen blijven onbekend. Hier wordt een protocol gedemonstreerd voor het prepareren van eiwitten uit de hypofyse van muizen voor gebruik bij het bestuderen van deze ziekte.Eerst worden de hypofysen geïsoleerd uit geëuthanaseerde muizen. De hypofysen worden vervolgens gehomogeniseerd om de cellen mechanisch af te breken en cytosolische eiwitten vrij te maken. Het homogenaat wordt geklaard door middel van centrifugatie bij lage snelheid en beoordeeld op kwantiteit via een colorimetrische BCA-assay en op kwaliteit via polyacrylamidegelelektroforese.Ten slotte wordt het waterige eiwithomogenaat gemengd met een oliehoudend adjuvans. Dit mengsel wordt vervolgens in muizen geïnjecteerd om een muismodel te creëren dat lijkt op auto-immuun hypofysitis. Zoals getoond in de begeleidende video, zijn er vier technieken beschreven om hypofysitis bij proefdieren op te wekken.De in dit artikel gepresenteerde techniek, namelijk de injectie van een mengsel van hypofyse-eiwitten als influenzajuvans, is de oudste methode en stamt uit de jaren 1960. Andere benaderingen waren de injectie van oplosbare glycoproteïnen van het rubellavirus in 1992, de stereotactische injectie van een adenovirus direct in de hypofyse in 2002, en de transplantatie van de hypofyse van de ene rattenstam onder het nierkapsel van een andere rattenstam in 2010. Het belangrijkste voordeel van de adjuvantbenadering van Florence is dat deze tegenwoordig minder invasief is, consistenter is en bovenal nauwkeuriger is in het induceren van een ziekte die sterk lijkt op het menselijke equivalent.Hoewel de techniek met vreemd adjuvans al sinds de jaren 60 wordt gerapporteerd, bleek deze weinig effectief voor de inductie van hypofysitis. Toen ik begon met mijn promotieonderzoek, kon ik met het gepubliceerde protocol voor vreemd adjuvans slechts bescheiden gevallen en ernst van hypofysitis bewerkstelligen. De resultaten verbeterden aanzienlijk toen ik het idee kreeg om de hoeveelheid pitu-eiwitten in de EM-emulsie met een factor tien te verhogen.Hoewel deze methoden inzicht kunnen bieden in de pathogenese van auto-immuun hypofyisitis, kunnen ze ook worden gebruikt om andere auto-immuunziekten te bestuderen waarvan de auto-antigenen nog moeten worden geïdentificeerd. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methoden vooral moeite hebben met de laatste stap, het bereiden van de marge, omdat dit handvaardigheid, tijd en toewijding vereist. Een visuele demonstratie is daarom cruciaal om te begrijpen hoe een juiste emulsie moet worden bereid.De implicaties van deze techniek reiken verder dan het veld van auto-immuniteit. De kennis over hoe het antigeen voor immunisatie moet worden geprepareerd, kan ook worden toegepast bij de productie van monoclonale antilichamen of voor het testen van nieuwe vaccins. Deze techniek zal worden gedemonstreerd door S Zoo heroic Ura en Mayland al gato uit mijn laboratorium.De hypofyse van de muis is een cilindervormige klier die zich aan de basis van de schedel bevindt in een verdieping van het spiekenbeen, genaamd de sella turcica. De klier wordt lateraal begrensd door de nervus trigeminus en anterieur door het chiasma opticum. Ze bestaat uit een grotere voorlob en kleinere tussen- en achterlobben.Om de hypofyse te isoleren, gebruikt u een schaar om de geëuthanaseerde muis te onthoofden, waarna u parallelle sneden maakt van de achterkant naar de voorkant van de schedel. Til de hersenen op en klap deze naar achteren om de hypofyse bloot te leggen, die verschijnt als een cilinder binnen een gelijkbenige driehoek, waarbij de hypofyse de basis vormt, de nervi trigemini de zijden zijn en het chiasma opticum de top vormt.Omcirkel de klier met de punten van gesloten pincetten om de omringende meninges door te breken. Pak vervolgens met fijne pincetten de hypofyse uit de sella turcica en plaats deze in een plastic buisje op droogijs. Verzamel voor één preparatie 300 muizenhypofysen.Deze collectie vereist ongeveer negen personuren. Zodra de collectie is voltooid, worden de hypofysen bewaard bij -80 °C tot ze nodig zijn. Plaats een Falcon-buis van 15 ml in een ijsbad.Voeg 250 µL homogenisatiebuffer toe aan de buis. Voeg voor elke 100 hypofysen die vlak voor de homogenisatie zijn verzameld, de muishypofysen toe aan de buffer. Plaats vervolgens de tip van de Polytron-homogenisator, een generator met een diameter van 5 mm, op de bodem van de Falcon-buis met de muishypofysen en buffer, en homogeniseer op maximale snelheid gedurende 30 seconden.Beweeg de buis voorzichtig op en neer terwijl deze op ijs blijft. Laat het homogenaat vervolgens één minuut op ijs rusten. Herhaal de homogenisatie- en koelingsstappen nog twee keer.Deze milde homogenisatie moet de cellen openbreken en de eiwitten vrijmaken zonder de kernen te beschadigen. Centrifugeer het homogenisatieproduct op lage snelheid, ongeveer 1000 G gedurende 10 minuten bij vier graden Celsius, om de kernen, onbeschadigd weefsel en onoplosbare materialen zoals bindweefsel en gedenatureerde eiwitcomplexen te laten sedimenteren. Let erop dat het pellet niet wordt verstoord.Breng de SNA, nu postnucleaire supernatant of PNS genoemd, over naar een nieuwe Falcon-buis voor bewaring. Houd de PNS op ijs en resuspendeer het pellet met hetzelfde volume homogenisatiebuffer als eerder; homogeniseer en centrifugeer zoals voorheen. Nadat de twee PNS-monsters zijn samengevoegd, verdeelt u de oplossing over verschillende microtubussen.Bewaar de microcentrifugebuisjes bij -80 °C tot ze nodig zijn. Deze eiwitpreparatie is stabiel bij -80 °C, maar verliest geleidelijk haar potentie. Daarom wordt aanbevolen om deze binnen zes maanden na de bereiding te gebruiken.Bewaar één klein aliquot PNS om de eiwitopbrengst en -concentratie te bepalen met de biy-zuurassay. Bepaal vervolgens de eiwitkwaliteit via gelelektroforese van 300 muizenhypofysen, met een gemiddeld totaal gewicht van ongeveer 570 milligrams. Verwacht een opbrengst van 60 milligrams hypofyseeiwitten of één milligram eiwit per 10 milligrams weefsel.De proteïneconcentratie is doorgaans ongeveer 40 mg/mL. Het hier gegeven voorbeeld is bedoeld voor de immunisatie van 10 muizen. Er wordt gepland om elke muis 100 µL emulsie toe te dienen die één mg hypofyseproteïne bevat; rekening houdend met twee extra muizen voor materiaalverlies tijdens de bereiding, worden er hier 12 mg proteïne-emulsie klaargemaakt.Begin met het snel ontdooien van de bevroren eiwit-aliquots door ze in uw handen op te warmen. Pas de eiwitconcentratie aan naar 20 mg/mL met PBS. Trek vervolgens 600 µL van het hypofyse-eiwitextract, overeenkomend met 12 mg, op in een 2,5 mL Gas Tite Hamilton-spuit en resuspendeer dit in compleet FRONS-adjuvans of CFA dat 5 mg/mL hitte-gedode mycobacterium tuberculosis bevat door het handmatig te schudden.Trek vervolgens 600 µL van de CFA op in een andere Hamilton-spuit van 2,5 mL. Bevestig en zet een micro-emulgerende naald van 22 gauge vast op de met CFA gevulde spuit. Druk de zuiger langzaam in zodat de naald met CFA wordt gevuld.Bevestig vervolgens het andere uiteinde van de naald aan de andere spuit die is gevuld met pituitary proteinextract en zet deze goed vast. Voorkom dat er luchtbellen in de spuiten achterblijven. Duw de zuiger van de CFA-spuit langzaam in om het oliecomponent in het waterige pituitary extract te persen, zodat er slechts een kleine hoeveelheid wordt gemengd.Duw vervolgens de zuiger van de spuit met hypofyse-extract terug in de CFA-spuit. Herhaal deze handeling om de hoeveelheid gemengd materiaal geleidelijk te verhogen totdat de gehele inhoud is gemengd. Dit witachtige en gelijkmatig verdeelde materiaal vormt de water-in-olie-emulsie.Zodra de emulsie is gevormd, wordt de volledige heen-en-weergaande cyclus ten minste 500 keer herhaald; na de laatste cyclus bevatten de spuiten een één-op-één water- en olie-emulsie waarbij de concentratie hypofyse-eiwit nu 10 mg/mL is. De emulsie is nu klaar voor gebruik. Om de kwaliteit van de emulsie te testen, wordt één druppel ervan in een bekerglas met water gevoegd. Als de emulsie correct is bereid, blijft de druppel compact en strak aan het oppervlak.Als de emulsie van slechte kwaliteit is, zal deze uitspreiden en uiteenvallen in kleinere druppels. De emulsie wordt op de dag van bereiding geïnjecteerd in SJL-muizen om experimentele auto-immuunhypofyisitis op te wekken. Dit protocol wordt gedetailleerd beschreven in de bijbehorende jo of vertical.Zodra de hypofyse is verzameld en de technieken onder de knie zijn, kan de eiwitextractie in één uur worden uitgevoerd, mits er snel en op ijs wordt gewerkt. Tijdens deze stap, tijdens de bereiding van de immersie, is ongeveer één uur nodig. Denk eraan om in de initiële mengfase na de ontwikkeling langzaam en geduldig te werken.Deze techniek maakte de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van autoimmuniteit om de mechanismen te onderzoeken waarlangs autoreactieve lymfocyten het doelorgaan herkennen en infiltreren. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u een eiwitextract uit de hypofyse van een muis bereidt en hoe u dit mengt met Crohn's adjuvans om een emulsie te maken die klaar is voor gebruik als immunogeen. Vergeet niet dat het werken met spuiten en compleet adjuvans, dat geïnactiveerde en gedroogde microbacteriële tuberculosis bevat, gevaarlijk kan zijn als u zichzelf per ongeluk prikt.Gebruik daarom altijd handschoenen en voer de naalden op de juiste wijze af tijdens het uitvoeren van deze procedure.

preparation-mouse-pituitary-immunogen-for-induction-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Deze video laat zien hoe u auto-immune hypophysitis induceren in SJL muizen en hoe u de ernst ervan te beoordelen door de histopathologie.

Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen

This video demonstrates an efficient homogenization technique to generate an antigen-adjuvant emulsion to induce experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in a murine model. The emulsion contains an autoantigen — myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) — in the water phase, surrounded by a continuous oil phase comprising an inactivated pathogenic bacteria. The emulsion ensures a sustained release of antigens for a prolonged immune response.

Preparing an Antigen-Adjuvant Emulsion to Induce Autoimmune Encephalomyelitis

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

De transplantatie van neurale stamcellen / progenitorcellen (NPC) houdt grote beloften in de regeneratieve neurologie. De systemische toediening van NPCs is in efficiënte, lage invasief en therapeutisch zeer effectief protocol om stamcellen te leveren in de hersenen en ruggenmerg van knaagdieren en niet-menselijke primaten die door experimentele chronische inflammatoire schade aan het centrale zenuwstelsel.

Systemische Injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in Muizen met chronische EAE

In dit rapport presenteren we een protocol waarmee de onderzoeker een muismodel van intraoculaire uveïtis kan genereren. Meer algemeen aangeduid als experimentele auto-immune uveïtis (EAU), dit gevestigde model legt vele aspecten van de menselijke ziekte vast. Hierin zullen we beschrijven hoe de progressie van de ziekte kan worden geïnduceerd en gevolgd met behulp van verschillende uitlezingen.

Experimentele auto-immune uveïtis: een intraoculair inflammatoir muismodel

Het huidige protocol beschrijft de inductie van experimentele auto-immune encefalomyelitis in een muismodel met behulp van myeline oligodendrocytenglycoproteïne en het monitoren van het ziekteproces met behulp van een klinisch scoresysteem. Experimentele auto-immuun encefalomyelitis-gerelateerde symptomen worden geanalyseerd met behulp van muis femur micro-computertomografie analyse en open veld test om het ziekteproces uitgebreid te beoordelen.

Inductie- en diverse beoordelingsindicatoren van experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Verschillende soorten diermodellen van Hashimoto's thyroiditis zijn vastgesteld, net als spontane auto-immune thyroiditis bij de NOD-muis. H-2h4-muizen zijn een eenvoudig en betrouwbaar model voor HT-inductie. Dit artikel beschrijft deze aanpak en evalueert het pathologische proces voor een beter begrip van het SAT-muizenmodel.

Generatie van een muis Spontane auto-immuun thyroiditis model

Om experimentele auto-immune encefalomyelitis, een diermodel van multiple sclerose, te induceren, worden muizen geïmmuniseerd met een water-in-olie-emulsie die een autoantigeen bevat en het adjuvans van Freund compleet maakt. Hoewel er verschillende protocollen bestaan voor de bereiding van deze emulsies, wordt hier een snel, eenvoudig en gestandaardiseerd homogenisatieprotocol voor emulsievoorbereiding gepresenteerd.

Een snelle, eenvoudige en gestandaardiseerde homogenisatiemethode om antigeen / adjuvante emulsies voor te bereiden voor het induceren van experimentele auto-immune encefalomyelitis

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Leer hoe muizenhypofyse-eiwitten worden geïsoleerd en gehomogeniseerd voor onderzoek naar auto-immuun hypophysitis. Dit protocol omvat centrifugatie, BCA-bepaling en emulsiebereiding met adjuvans.

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

Meer video's verkennen