Name: Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Leer de inductie van auto-immuun hypophysitis bij SJL muizen via injectie van pituitair immunogeen en herhaalde boosters. Deze methode maakt histopathologische evaluatie van leukocyteninfiltratie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door NIH subsidie ​​DK080351 naar de PC, en door een gulle gift van de Terry en Kristine Gore familie.

Experimentele Protocol Zodra de hypofyse immunogeen is voorbereid (zie begeleidend artikel), is het subcutaan geïnjecteerd in SJL muizen (The Jackson Laboratories, voorraad 000.686). Een tweede identieke injectie is 7 dagen later herhaald. Muizen worden vervolgens gebruikt voor het verzamelen in vivo-en post-mortem resultaten. Stap 1. Subcutane injectie van hypofyse immunogeen in SJL muizen Muizen worden eerst verdoofd door het injecteren van 0,5 ml van 20 mg / ml 2,2,2-tribroomethanol (Avertin, TCI-Amerika, T-1420) intraperitoneaal. Muizen worden dan subcutaan geïnjecteerd met 100 ul van de hypofyse emulsie dat, zoals aangegeven in de metgezel Jupiter 2181 artikel, bevat 1 mg hypofyse-extract en 0,25 mg volledig Freund&#39;s adjuvans. De emulsie wordt geïnjecteerd in het linker achterbeen dorsale regio ((50 pi) en de rechter liesstreek (50 pi). De hypofyse emulsie is weer geïnjecteerd op dag 7 in de tegenovergestelde sites (50 pl in de rechter dorsale achterbeen regio en 50 pl in de linker liesstreek). Muizen worden dagelijks gecontroleerd op de eerste 3 dagen en dan wekelijks tot de dag van het offer, die typisch is 28 dagen na de eerste immunisatie. Stap 2. Verzameling van in vivo resultaten: Blood assays Het weefsel meest gebruikte om experimentele resultaten te beoordelen, terwijl de muizen nog in leven zijn is bloed. Bloed wordt regelmatig getrokken 14 dagen na de eerste immunisatie om de serumspiegels van hypofyse antistoffen of andere markers, zoals cytokines en chemokines te meten. Bloed wordt verzameld van levende muizen als volgt. Muizen worden veilig gehouden door de nekvel en de achterkant van het kaakbot is gevestigd. Zodra de achterkant van het kaakbot is gevestigd, zijn 4 mm lancetten gebruikt om doorboren de submandibulaire vasculaire bundel. Nadat het bloed wordt verzameld, plaatst u de druk op de op het gebied met behulp van een alcoholdoekje om een ​​bloeduitstorting te voorkomen. Verzamelde bloed is gecentrifugeerd bij 2.000 g gedurende 20 minuten, en opgeslagen bij -80 ° C tot gebruik. Stap 3. Het verzamelen van post-mortem resultaten: Hypofyse histopathologie Muizen zijn meestal opgeofferd 28 dagen na de eerste immunisatie. De kardinaal-functie nodig zijn om de diagnose van EAH te richten is de infiltratie van de hypofyse door hematopoietische mononucleaire cellen. Muizen worden gedood door ze in een afgesloten plastic kamer die is geperfuseerd met CO 2. Muizen worden bewaard in de kamer voor een totaal van 8 minuten. Na de euthanasie, is de hypofyse verzameld zoals beschreven in het begeleidend artikel. Een zieke hypofyse verschijnt gezwollen en meer stevig aanhanger naar de omliggende dura mater. Scherpe pincet worden gebruikt om de hersenvliezen rond de hypofyse los te maken. Zodra de hypofyse beweegt zich vrij over het sphenoïd bot, het ene uiteinde van de hypofyse is gegrepen met een pincet en de hypofyse wordt zorgvuldig opgeheven. De klier wordt dan geplaatst in een microcentrifugebuis met fixatief 5 Beckstead&#39;s. De hypofyse is &#39;s nachts vast, verpakt in papier lens, en geplaatst in een cassette. De klieren worden vervolgens verwerkt met behulp van het volgende protocol: <table border="1"><tbody><tr><td> Station nummer </td><td> Reagens </td><td> Tijd in minuten </td><td> Temperatuur (Celsius) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70% alcohol </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70% alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95% alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95% alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100% alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100% alcohol </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100% alcohol </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> xyleen </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> xyleen </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> xyleen </td><td&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> paraffine </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> paraffine </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> paraffine </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> Na verwerking zijn hypofyse ingebed in paraffine en ten minste vijf niet-opeenvolgende secties (5-um dik) worden gesneden van elke klier. Na het snijden worden de klieren gekleurd met hematoxyline en eosine, en geanalyseerd om de mononucleaire infiltratie kwantificeren. De sectie met de meest ernstige infiltratie is geselecteerd voor het scoren. De ernst wordt gescoord op basis van een subjectieve inschatting van de omvang van de hypofysevoorkwab vervanging of vernietiging door immuuncellen: graad 0, geen ziekte, graad 1, 2% -20% betrokkenheid; graad 2, 20% -30%, graad 3, 30% -50%, graad 4, 50% -90%, klasse 5, meer dan 90%. Alle onderdelen worden gescoord door twee personen verblind om de bron van de secties.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

Vier technieken zijn gemeld hypophysitis te induceren in proefdieren. De techniek wordt beschreven in dit artikel, dat is de injectie van hypofyse eiwitten gemengd met adjuvans Freund s, is de oudste, dateert uit 1967 6, en is meer recent een verbeterd. Andere technieken zijn de injectie van oplosbare rubellavirus glycoproteïnen in 1992 7, de stereotactische injectie van een adenovirus rechtstreeks naar de hypofyse in 2002 acht, en de transplantatie van hypofyse van een rat st...

<table><tbody><tr><td>SJL-muizen (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>stock 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribroom&amp;#8211;ethanol (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Beckstead&amp;rsquo;s fixatief</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

inductie van experimentele auto-immune hypophysitis in sjl muizen

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Auto-immune hypophysitis kan experimenteel worden gereproduceerd door de injectie van hypofyse eiwitten gemengd met een adjuvant in een gevoelig muizen. Muismodellen ons in staat stellen om te bestuderen hoe ziekten zich ontvouwen, vaak het verstrekken van een goede replica van dezelfde processen die zich voordoen bij mensen. Voor sommige auto-immuunziekten, zoals het type 1A diabetes, zijn er modellen (de NOD muis), die spontaan ontwikkelen van een ziekte lijkt op de menselijke tegenhanger. Voor veel andere auto-immuunziekten, maar het model moet experimenteel worden opgewekt. Een gemeenschappelijke aanpak in dit verband is de muis te injecteren met een dominante antigeen afgeleid van het orgel wordt bestudeerd. Bijvoorbeeld, onderzoekers geïnteresseerd in auto-immuun thyreoïditis injecteren muizen met thyroglobuline 2, en die geïnteresseerd zijn in myasthenia gravis hen te injecteren met de acetylcholine receptor 3. Als de autoantigen voor een bepaalde auto-immuunziekte is niet bekend, onderzoekers injecteren een ruw eiwit uittreksel uit het orgel het doelwit van de auto-immuunreactie. Voor auto-hypophysitis, de pathogene autoantigen (s) nog moeten worden geïdentificeerd 4, en dus een ruwe hypofyse eiwit preparaat wordt gebruikt. In deze video artikel zullen we laten zien hoe experimentele auto-immune hypophysitis in SJL muizen induceren.

Deze video laat zien hoe u auto-immune hypophysitis induceren in SJL muizen en hoe u de ernst ervan te beoordelen door de histopathologie.

Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen

Auto-immuun hypofysitis kan experimenteel worden gereproduceerd door de injectie van hypofyse-eiwitten gemengd met een adjuvans in vatbare muizen1. Muis ...

Autoimmuun hypofyisitis wordt gekenmerkt door een vergroting van de hypofyse en een deficiëntie van één of meer hypofysehormonen. De veroorzakende autoantigenen blijven onbekend. Een bijbehorende video demonstreert een protocol voor het bereiden van een immunogeen uit de muizenhypofyse, dat hier gebruikt zal worden om een muismodel te creëren dat lijkt op menselijke autoimmuun lymfocytaire hypofyisitis.Het hypofyse-immunogeen wordt geïnjecteerd in een vatbare muizenstam. Vervolgens wordt de injectie zeven dagen later herhaald, waarna na 14 dagen bloed wordt afgenomen voor biomarkerstudies. Op dag 28 worden de hypofysen geoogst van de geofferde muizen, gesneden en gekleurd om de mate van leukocyteninfiltratie te bepalen.Auto-immuun hypofyisitis is een steeds vaker herkende ziekte die moeilijk te onderscheiden kan zijn van andere niet-hormoonsecreterende massa's die in de sella turcica ontstaan. Hoewel de ziekte ongeveer 50 jaar geleden voor het eerst werd beschreven, zijn de auto-antigenen die door het immuunsysteem van de patiënt bij auto-immuun hypofyisitis worden herkend, onduidelijk gebleven. In 2008 publiceerden wij de ontwikkeling van een muismodel dat de menselijke ziekte die

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector-geheugen T (TEM) lymfocyten. Hier laten we zien hoe de antigeen-specifieke TEM-cellen te activeren, te induceren adoptie-DTH bij Lewis ratten en toezicht op de ontstekingsreactie.

Inductie en Monitoring van Adoptieve vertraagd-type overgevoeligheid bij ratten

Auto-immune hypophysitis kan worden gereproduceerd bij muizen door het injecteren van een uittreksel van de muis hypofyse eiwitten.

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

De overdracht van bm12-lymfocyten naar een C57BL/6-ontvanger is een gevestigd model van systemische lupus erythematosus. Hier beschrijven we hoe de ziekte kan worden geïnitieerd met behulp van dit model en hoe T-folliculaire helpercellen, germinale centrum B-cellen en plasmacellen kunnen worden gekenmerkt door middel van flowcytometrie.

De bm12 Induceerbare model van systemische lupus erythematosus (SLE) in C57BL / 6 muizen

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Dit verslag schetst een eenvoudige benadering om succesvol experimentele autoimmune neuritis (EAN) met behulp van de myeline proteïne nul peptide180-199 (P0) in combinatie met de Freund compleet adjuvans en kinkhoest toxine. We presenteren een verfijnde paradigma staat nauwkeurig de beoordeling van de omvang van functionele tekorten en Neuropathologie die zich voordoen in deze EAN.

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

We beschrijven een in vivo immunisatie, translationeel hepatitismodel in BALB / c-muizen dat kan worden gebruikt om de pathogenese van door geneesmiddelen geïnduceerde auto-immune hepatitis te bestuderen, inclusief geslachtsverschillen die bij deze ziekte worden waargenomen. We zullen beschrijven hoe dit model reproduceerbare analyses demonstreert met behulp van in vivo en in vitro experimentele technieken.

Inductie van geneesmiddel-geïnduceerde, auto-immune hepatitis bij BALB / c-muizen voor de studie van de pathogene mechanismen

Verschillende soorten diermodellen van Hashimoto's thyroiditis zijn vastgesteld, net als spontane auto-immune thyroiditis bij de NOD-muis. H-2h4-muizen zijn een eenvoudig en betrouwbaar model voor HT-inductie. Dit artikel beschrijft deze aanpak en evalueert het pathologische proces voor een beter begrip van het SAT-muizenmodel.

Generatie van een muis Spontane auto-immuun thyroiditis model

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Hier rapporteren we een protocol dat een muismodel voor reumatoïde artritis (RA) tot stand brengt door adoptieve overdracht van CD4+ T-cellen van SKG-muizen, wat een snel en betrouwbaar experimenteel hulpmiddel biedt voor het onderzoeken van de immunologische mechanismen, pathologische progressie en ontwikkeling van nieuwe behandelingen voor RA.

Een adoptief overdrachtsmodel van reumatoïde artritis bij muizen

Leer de inductie van auto-immuun hypophysitis bij SJL muizen via injectie van pituitair immunogeen en herhaalde boosters. Deze methode maakt histopathologische evaluatie van leukocyteninfiltratie mogelijk.

Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen

Meer video's verkennen