Name: Protocol voor Dengue Infecties in Muggen (A. aegypti) en Infectie Fenotype Bepaling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T21:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 25 s
Description: Leer hoe u Aedes aegypti muggen infecteert met het denguevirus om genetische resistentiemechanismen te bestuderen. Dit protocol omvat viruspropagatie, bloedmaaltijden en virustiterbepaling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

A. Het uitdragen van het virus in de C6/36 cellijn. <ol><li> Cellen groeien naar 80% confluentie in 75 cm 2 fles; </li><li> Verwijder de media met 3-4 ml in de kolf resterende; </li><li> Neem 0,5 ml bouillon virus en toe te voegen in de bovenstaande cel met de multipliciteit van infectie van 1,5 virusdeeltjes per cel. Schudden de kolf gedurende 15 minuten langzaam op de kamer temperatuur. </li><li> Incubeer gedurende 45 minuten bij 5% CO 2 en 37 ° C </li><li> Voeg 30 ml media, en incubeer gedurende 5 dagen. </li></ol> B. Maak het mengsel van het virus en bloed <ol><li> Maak de cel met de schraper en overdracht van de cel en media om de 50 ml conische buizen; </li><li> Centrifugaat bij 800g gedurende 10 minuten, verzamel de bovenstaande vloeistof, maar laat 1 ml supernatant met de celpellet; </li><li> Bevriezing van de bovenstaande cel pellet in droge CO 2 en daarna dooi in de 37 ° C waterbad, herhaalt u twee tot drie keer; </li><li> Centrifugaat bij 800g gedurende 10 minuten, neem de supernatant, en combineren met het supernatant verzameld uit stap 3; </li><li> Verzamel volledig menselijk bloed met dezelfde procedure (stap 3) voor de voorbereiding van gametocyt cultuur Anopheles mug met Plasmodium falciparum infecteren; </li><li> Combineer de gelijke hoeveelheid van de hierboven menselijk bloed met virus supernatant uit stap 4, en voeg menselijk serum (10% van de totale volume). </li><li> Incubeer het bovengenoemde mengsel van bloed en dengue virus gedurende 30 minuten bij 37 ° C waterbad </li></ol> C. Feeding muggen Deze procedure is vrijwel identiek aan wat zijn beschreven in de sectie voor Plasmodium falciparum-infecties in muggen. We assay de middendarm infectie op dag 7, en het speeksel infectie op dag 14 na het bloed geven. Al het materiaal dat in contact kwam met het virus worden eerst behandeld met 75% ethanol en vervolgens met 10% bleekwater. D. Assay het virus titer in mug weefsel <ol><li> Twee of drie dagen voor de dissectie van muggen weefsel, groeien C6/36 cel in een 24 wells plaat zodanig dat de cel 80% confluentie op de dag waarop de test wordt uitgevoerd bereiken; </li><li> Muggen zijn verdoofd bij 4 ° C, geofferd en dook steriel door het weken ze in 75% ethanol gedurende 1 minuut. Dan muggen werden gewassen met steriel water twee keer eerder dissectie van middendarm of speekselklier onder het ontleden microscoop. Vanaf deze stap, al de onderstaande procedure dient te worden uitgevoerd in een steriele omgeving, zoals een biologische veiligheid kast. Deze weefsels worden overgebracht naar een buis die 150 ul media en gehomogeniseerd met een Kontes pellet stamper motor gedurende 90 seconden; </li><li> Maak een 1:100 verdunning door toevoeging van 10 ul van het homogenaat in 990 ul media; </li><li> Maak nog eens 1: 10, 1:100 en 1:1000 verdunning met het medium in de 96 wells-plaat; </li><li> Verwijder de media in de 24 wells plaat, en voeg 100 ul van elk van de vier bovengenoemde verdunningen aan elk overeenkomstige goed; </li><li> Langzaam Schud de plaat gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur, vervolgens incubeer gedurende 45 minuten bij 5% CO 2 en 37 ° C; </li><li> Voeg 1 ml methycellulose overlay (1%) aan elk putje; </li><li> Incubeer de platen bij 37 ° C met 5% CO 2 gedurende 5 dagen; </li><li> De stappen van de hier niet nodig een steriele omgeving, maar zoals bij elke andere pathogenen zorg moeten worden genomen ten alle tijden. Gooi methycellulose overlay van elk bord en dep om overtollige media te verwijderen </li><li> Voeg 1 ml methanol / aceton fixatief (1:1) aan elk putje. Bewaren bij 4 ° C gedurende 1 uur; </li><li> Giet het fixeermiddel, en was een keer met 1X PBS; </li><li> Maak 1:1000 verdunning aan het primaire antilichaam tegen het virus met 5% dronken; </li><li> Voeg 200 ul van verdund hyperimmuun vocht aan elke well, incuberen bij 37 ° C gedurende 1 uur; </li><li> Verwijder hyperimmuun vocht en wassen plaat met een X PBS </li><li> Bereid een 1:1000 verdunning van geit anti-muis conjugaat (KPL Cat # 074 tot 1806) in 5% dronken (5g poedervorm afgeroomde melk in 100 ml van een X PBS), en vervolgens 200 ul toe te voegen aan elk putje en incubeer bij 37 ° C gedurende 1 uur; </li><li> Bereid ondergrond als volgt: voeg 1 tablet van 3&#39;-diaminobenzidine terrahydrochloride (Sigma Cat # D5905) in 20 ml van een X PBS, na opgelost, en voeg vervolgens 8 ul van 30% waterstof peroxidase </li><li> Voeg 200 ul van de bovenstaande substraat in elk putje. Laten staan ​​bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten </li><li> Verwijder de ondergrond en stop reactie door het toevoegen van 1 ml gedestilleerd water toe aan elk putje </li><li> Giet het water en dep platen te drogen </li><li> Tel de virusdeeltje </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Incubator</td><td></td><td></td><td></td><td>met 5% CO2, 37oC</td></tr><tr><td>50 ml conische buizen</td><td></td><td></td><td></td><td>plastic</td></tr><tr><td>pipetpunt</td><td></td><td></td><td></td><td>voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Pipetman</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur-pipetten</td><td></td><td></td><td></td><td>glas, steriel</td></tr><tr><td>waterbad</td><td></td><td></td><td></td><td>37C</td></tr><tr><td>centrifuge</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>circulerend waterbad</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>glazen membraanvoeders</td><td></td><td></td><td></td><td>met rubberen slang passend voor de voeders</td></tr><tr><td>muggenbekers</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>75% ethanol</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% bleekmiddel</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekplaten</td><td></td><td></td><td></td><td>6-well, 24-well en 96-well platen</td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td></td><td></td><td></td><td>glas</td></tr><tr><td>Objectglazen</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fijne pincet</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td><td>1X, steriel</td></tr><tr><td>dissectiemicroscoop</td><td>Microscoop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C6/36 cellen</td><td>cellen</td><td></td><td></td><td>Voor viruspropagatie</td></tr><tr><td>C6/36 medium</td><td></td><td></td><td></td><td>MEM met 10% hitte-geïnactiveerd FBS, 1% L-glutamine en niet-essentiële aminozuren en 1% (v/v) Penicilline-Streptomycine.</td></tr><tr><td>3&amp;rsquo;-Diaminobenzidine tetrahydrochloride</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5905</td><td>1 tablet in 20 ml van 1 X PBS, oplossen en vervolgens 8 &amp;#x03BC;l van 30% waterstofperoxide toevoegen</td></tr><tr><td>30% waterstofperoxide</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A. aegypti</td><td>Dier</td><td></td><td></td><td>mug</td></tr></tbody></table>

protocol voor dengue infecties in muggen (a. aegypti) en infectie fenotype bepaling

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Het doel van deze procedure is om de Aedes mug te besmetten met dengue virus in een laboratorium conditie en de infectie niveau en de dynamiek van het virus in de mug weefsel te onderzoeken. Dit protocol wordt routinematig gebruikt voor het bestuderen van muggen-virus interacties, in het bijzonder voor de identificatie van nieuwe gastheer factoren die in staat zijn om vector competentie te bepalen. Het hele experiment moet worden uitgevoerd in een BSL2 laboratorium. Vergelijkbaar met Plasmodium falciparum infectie, moet de juiste kleding inclusief handschoenen en een labjas gedragen worden te allen tijde. Na het experiment, al het materiaal dat in contact kwam met het virus moeten worden behandeld met 75% ethanol en gebleekt voordat u verder gaat met normaal wassen. Alle andere materialen moeten worden geautoclaveerd voordat weggooien hen.

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel refractaire voor het dengue virus moet worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van virale infecties in de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van dengue infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor het groeien van het virus in de cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Dengue Infecties in Muggen (A. aegypti) en Infectie Fenotype Bepaling

Het doel van deze procedure is om de Aedes-mug onder laboratoriumomstandigheden te infecteren met het denguevirus en het infectieniveau en de dynamiek van ... te onderzoeken.

Ik ben George Dimopoulos, en we gaan u nu een procedure laten zien over hoe u de Aedes GTI-mug infecteert met het denguevirus. Het eerste wat we moeten doen is het virus vermeerderen in een Aedes albopictus-cellijn. Mijn naam is Jose Luis Ramirez en ik ben promotieonderzoeker in het Dimopoulos-lab.Voor deze procedure hebben we een BSL-2 faciliteit nodig met een weefselkweekkap en een CO2-incubator ingesteld op 37 °C. We hebben plastic conische buizen van 50 ml nodig. Daarnaast hebben we menselijk serum, een waterbad van 37 °C en een centrifuge nodig.We hebben 96-wellplaten en andere standaard moleculair-biologische en biochemische reagentia en verbruiksartikelen nodig. Dit is een reguliere weefselkweekkap in een BSL-2 faciliteit, en de eerste stap is het wegnemen van de cellen die zijn gegroeid tot een confluentie van 80% in een fles van 75 cm². Dit is een MEM-medium met 10% hitte-geactiveerd foetaal runderserum, aangevuld met 1% L-glutamine en niet-essentiële aminozuren.Nu voegen we het denguevirus toe aan de cellen. We hebben de virusvoorraad uit de vriezer van -80 °C gehaald en deze ontdooid in een incubator van 37 °C. We voegen ongeveer 0,5 milliliters virusvoorraad toe aan de cellen om een concentratie van ongeveer 1,5 virusdeeltjes per cel te bereiken.De cellen worden vervolgens gedurende ongeveer 15 minuten op een schudmachine geplaatst bij een lage schudsnelheid. Daarna worden de cellen gedurende ongeveer 45 minuten in een CO2-incubator geplaatst. Bij 37 °C is de CO2-concentratie 5%. Na de incubatie van 45 minuten halen we de cellen eruit en voegen we 30 ml medium toe, waarna we de cellen opnieuw in de incubator plaatsen en nog eens vijf dagen incuberen.Nu bereiden we de viruspartikels voor de infectie voor. Eerst moeten we de cellen met een scraper van de kolf lossen en deze vervolgens samen met het medium overbrengen naar een conische buis van 50 ml. Vervolgens centrifugeren we de cellen 10 minuten lang bij 12,000 RPM om ze te pelletteren.Onderaan dit flesje is het pellet zichtbaar. Vervolgens verwijderen we het supernatant en laten we slechts 1 ml met de cellen achter om het virus uit de cellen te laten vrijkomen. We zullen deze vervolgens invriezen.Hierdoor zullen de cellen scheuren, waarna we ze ontdooien en vervolgens opnieuw invriezen; deze procedure herhalen we drie tot vier keer, waarbij het invriezen op droogijs gebeurt. Na het invriezen wordt het celpellet in een waterbad van 37 °C geplaatst om het te ontdooien, waarna het opnieuw op droogijs wordt ingevroren. Tussen elke vriesstap door suspenderen we de cellen door middel van vortexen. Nu verzamelen we het virusbevattende supernatant en voegen dit toe aan het supernatant van de vorige centrifugatie, dat eveneens viruspartikels bevat.Deze viruspreparaat is nu klaar om te worden gecombineerd met een gelijke hoeveelheid volbloed en serum van mensen. Hier hebben we het viruspreparaat gecombineerd met menselijk volbloed aangevuld met 15% menselijk serum. Deze bloed-virusoplossing zal nu worden gebruikt om de muggen te voeden en te infecteren.We voegen dit bloed toe aan een membraanvoeder, dat vervolgens op een beker met de muggen wordt geplaatst, waarna we de muggen ongeveer 25 minuten lang van dit bloed laten voeden. We hebben een klem op het membraanvoeder geplaatst om het te stabiliseren. Dit dient in feite als gewicht op het net, en we zullen nu het bloed aan het voeder toevoegen.In sommige gevallen kan dit experiment beter werken wanneer het in het donker wordt uitgevoerd, aangezien muggen van nature vaak in het donker voeden. Dit hangt uiteraard af van hoe de muggenkolonie is geconditioneerd. De muggen hebben nu ongeveer 25 tot 30 minuten gevoed; we kunnen de membraanvoeder nu verwijderen en in een veilige container plaatsen voor descontaminatie.Na het bloedvoeren moeten de niet-gevoede muggen worden gescheiden van de gevoede muggen. Om dit te doen, hebben we de muggen verdoofd door de kleine bekertjes met de bloedgevoede muggen gedurende vijf tot 10 minuten in een koelruimte te plaatsen. Zoals te zien is, zijn de muggen door de kou al knock-out.We openen het deksel en brengen de muggen over naar een kleine petrischaal, die in een ijsbak wordt geplaatst zodat de muggen gedurende het hele proces koud blijven en niet kunnen ontsnappen. Onthoud dat dit geïnfecteerde muggen zijn, dus er moet uiterste zorg worden betracht om te voorkomen dat ze ontsnappen. Zodra de muggen in de koude kamer zijn, brengen we ze over naar het normale insectarium, dat op kamertemperatuur wordt gehouden, maar we plaatsen de muggen altijd in de petrischaal die in de ijsbak staat, zodat ze constant in een verdoofde toestand blijven.U kunt zien hoe de gevoede muggen van de niet-gevoede muggen kunnen worden gescheiden. De gevoede muggen bevatten bloed. Ze zijn volledig verzadigd.Sommigen hebben gedeeltelijk bloed gevoed en zijn daarom niet volledig verzadigd. Zij hebben een kleine hoeveelheid bloed in hun abdomen, terwijl anderen veel bloed in hun abdomen hebben. De niet-gevoede exemplaren hebben geen bloed in hun abdomen, waardoor u heel gemakkelijk onderscheid kunt maken tussen de gevoede en de niet-gevoede exemplaren.Vervolgens brengen we deze muggen over van de petri-schaal naar de kartonnen bekertjes met waslijn. De volgende stap is het analyseren van de denguevirusinfectie in de mug. Als we de virusinfectie in de middendarm van de mug willen analyseren, moeten we de muggen dissekeren rond dag zeven nadat ze de bloedmaaltijd hebben gehad.En als u de virusinfectie in de speekselklieren wilt analyseren, moeten we de muggen ongeveer 14 dagen na de bloedmaaltijd dissekeren; Jose zal u nu laten zien hoe u het darmkanaal uit de mug dissekeert. De muggen zijn inmiddels op ijs verdoofd en we zullen ze doden door ze ongeveer één minuut te incuberen in 70% ethanol. Vervolgens brengen we de muggen over naar twee opeenvolgende waterbaden.Telkens één minuut. Dit is om de ethanol van de muggen weg te wassen. Nu zullen we de muggen in PBS op microscoopglaasjes dissecteren.De beste manier om de middendarm uit een mug te dissekeren, is door de mug op zijn vleugels ondersteboven te plaatsen, het abdomen met één pincet en het thoraxgedeelte met een ander pincet vast te pakken en de mug vervolgens uit elkaar te trekken. Nu trekt Jose de mug uit elkaar, waardoor de darm zichtbaar wordt tussen het abdomen en het thoraxgedeelte van de mug. De darm is het semi-transparante weefsel dat is verschenen aan de bovenzijde van de mug.Nu zullen we het gedisseceerde darmkanaal overbrengen naar een cellijnmedium en naar de weefselkweekkap brengen om de virusdeeltjes uit de darm te isoleren. We brengen de gedisseceerde middendarmen naar de weefselkweekruimte en homogeniseren deze met een stamper om de virusdeeltjes vrij te maken. Na de homogenisatie van de middendarm voegen we medium toe aan het homogenaat om een verdunning van 1 op 100 van de virusdeeltjes te bereiken.Vervolgens verdunnen we dit verder naar 1:10, 1:100 en 1:1000. In de 96-wells plaat hebben we de Alba picto-cellijn voorbereid tot 80% confluentie in een 24-wells plaat. Daarna verwijderen we het supernatant van de hiatus alba picto-cellen en voegen we aan deze cellen de verdunde virusdeeltjes toe om de concentratie virusdeeltjes in elke verdunning te bepalen.Hiermee kunnen we het infectieniveau van het virus bepalen. In de middendarm van de mug worden de cellen vervolgens 15 minuten lang langzaam geschud bij kamertemperatuur. Daarna plaatsen we de cellen gedurende 45 minuten in de CO2-incubator bij 37 °C.Vervolgens voegen we 1 ml van een 1% methylcellulose-overlay toe aan elke well, waarna de plaat opnieuw vijf dagen wordt geïncubeerd in een CO2-incubator bij 37 °C. Na de incubatie van vijf dagen voegen we 1 ml van een aceton-methanol-fixeerder toe aan elke well. Daarna incuberen we de plaat gedurende één uur in een koelkast bij 4 °C.Vervolgens verwijderen we het fixatief en wassen we elke put één keer met PBS. Daarna maken we een verdunning van 1:1000 van het primaire anti-dengue antilichaam in een 5% bloedoplossing. Vervolgens voegen we 200 µL van deze antilichaamoplossing toe.Voeg aan elke well het monster toe. Bedankt. Vervolgens incuberen we de plaat gedurende één uur bij 37 °C. Daarna verwijderen we het hyperimmuunvloeistof en wassen we elke well met één keer XPBS.Vervolgens herhalen we de procedure op exact dezelfde wijze met een secundair antilichaam. We hebben 20 ml van het substraat bereid volgens het protocol en dit in een container gedaan. Daarna voegen we 200 µL van het substraat toe aan elke well.Vervolgens stoppen we de reactie door het substraat te verwijderen en voegen we 1 ml gedestilleerd water toe aan elke put. Daarna gieten we het water uit de plaat en laten we de plaat drogen. Elke gekleurde stip vertegenwoordigt een plaque van virussen, en door deze plaques te tellen, kunnen we het aantal virusdeeltjes schatten dat aanwezig was in de oorspronkelijke middendarm van de mug die we hebben gehomogeniseerd.We hebben zojuist de procedure gedemonstreerd voor het infecteren van de aegypti-mug met het denguevirus. Dit protocol omvat de productie van het virus in de muggen-cellijn. De virusdeeltjes worden vervolgens gezuiverd uit de cellijn en geïsoleerd, waarna ze worden gemengd met menselijk volbloed en aan de muggen worden gevoed.Het virus zal de muggen infecteren en zodra de infectie is vastgesteld, hebben we u laten zien hoe u het weefsel van de middendarm van de mug isoleert en hoe u het infectieniveau van deze middendarm bepaalt. In essentie homogeniseren we de middendarm en gebruiken we de procedure om de virusdeeltjes uit deze middendarm vrij te maken. Vervolgens gebruiken we deze virusdeeltjes om de muggen-cellijn opnieuw te infecteren om zo het infectieniveau van de middendarm te bepalen, oftewel het aantal virusdeeltjes dat de middendarm van de mug heeft geïnfecteerd.

protocol-for-dengue-infections-mosquitoes-aegypti-infection-phenotype

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de James lab dsRNA injecteren in vrouwelijke A. aegypti muggen die de dengue virus haven. De techniek voor het kalibreren van injectienaalden, het manipuleren van de injectie setup, en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Injectie van dsRNA in Vrouw A. aegypti Mosquitos

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel vuurvaste voor malaria, dient te worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van Plasmodium besmettingen binnen de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van plasmodium infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor de voorbereiding van de gametocyt cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Plasmodium falciparum Infecties in Muggen en Infection Fenotype Bepaling

In dit interview, George Dimopoulos richt zich op de fysiologische mechanismen die door muggen om Plasmodium falciparum en dengue virus infecties te bestrijden. Uitleg wordt gegeven voor de manier waarop de belangrijkste vuurvaste genen, zijn deze genen die resistentie tegen pathogenen vector, die in de mug, en hoe deze kennis kan worden gebruikt om transgene muggen die niet in staat zijn om de malaria parasiet of dengue virus dragen genereren.

Bouwen aan een betere Mosquito: Het identificeren van de genen Enabling malaria en knokkelkoorts verzet in A. gambiae en A. aegypti muggen

Methoden voor het gebruik van Alphavirus transducing systemen om TL-verslaggevers uit te drukken in vitro en in volwassen muggen worden beschreven. Deze techniek kan worden aangepast aan een eiwit van belang uit te drukken in plaats van of naast een verslaggever.

Alphavirus Transducing System: Tools voor het visualiseren van besmetting in Mosquito Vector

Een vereenvoudigde toch nauwkeurige methode voor het verzamelen en vlekken mug hemocytes wordt beschreven. Onze methode combineert de eenvoud van perfusie met de nauwkeurigheid van hoge injectie technieken om schoon voorbereidingen van hemocytes in Aedes muggen te isoleren. Deze methode maakt studies vereist kennis van de soorten hemocytes en hun overvloed.

Een protocol voor het verzamelen en Kleuring Hemocytes uit de Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti</em

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

Huidige multiplexed diagnostiek te detecteren Zika, chikungunya, dengue virussen vereisen complexe monstervoorbereiding en dure instrumentatie en moeilijk te gebruiken in omgevingen met lage resource. Laten we een diagnose die gebruikmaakt van isotherme amplificatie met doelgroepen gerichte strand verschuifbare sondes op te sporen en deze virussen onderscheiden met hoge gevoeligheid en specificiteit.

Multiplexed isotherme amplificatie gebaseerd diagnostische Platform om te detecteren Zika, Chikungunya en Dengue 1

Het gepresenteerde protocol kan de vectorcompetentie van Aedes aegypti-muggenpopulaties voor een bepaald virus, zoals Zika, in een containmentomgeving bepalen.

Vectorcompetentieanalyses op Aedes aegypti-muggen met behulp van het Zika-virus

Een protocol om de microsporidische parasiet Edhazardia aediste cultuuren. De parasiet wordt doorgevoerd van de ene generatie Aedes aegypti muggen naar de volgende via horizontale overdracht in het larvestadium, gevolgd door verticale transmissie in het volwassen stadium. Levende sporoplasma's overleven op lange termijn in geïnfecteerde eieren.

Voortplanting van de Microsporidische Parasiet Edhazardia aedis in Aedes aegypti Muggen

De standaard membraanvoedingstest (SMFA) wordt beschouwd als de gouden standaard voor de beoordeling en identificatie van potentiële antimalariaverbindingen. Dit kunstmatige voedingssysteem wordt gebruikt om muggen te infecteren om de effecten van dergelijke verbindingen op de intensiteit en prevalentie van de Plasmodium falciparum-parasiet verder te evalueren.

Standaard membraanvoedingstest voor de detectie van Plasmodium falciparum-infectie in Anopheles Mosquito Vectors

Deze methodologie, die orale voeding en intrathoracale injectie-infectie omvatte, kon de invloed van midgut- en / of speekselklierbarrières op arbovirusinfectie effectief beoordelen.

Experimentele virale infectie bij volwassen muggen door orale voeding en micro-injectie

Leer hoe u Aedes aegypti muggen infecteert met het denguevirus om genetische resistentiemechanismen te bestuderen. Dit protocol omvat viruspropagatie, bloedmaaltijden en virustiterbepaling.

Protocol voor Dengue Infecties in Muggen (A. aegypti) en Infectie Fenotype Bepaling

Meer video's verkennen