Name: Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Leer cell counting met de Scepter Cell Counter voor nauwkeurige celbiologie-experimenten. Dit handzame apparaat verbetert reproduceerbaarheid en vermindert gebruikersfouten in celkweek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Het belang van Cell Tellen <ol><li> Het tellen van cellen is een noodzakelijke, maar vervelende stap voor in vitro celkweek. </li><li> Consistente cel concentraties in experimentele reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid. </li><li> Bloedcellen zijn belangrijk voor het toezicht op gezondheid van de cellen en proliferatie rate, het beoordelen van immortalisatie of transformatie, zaaien cellen voor de volgende experimenten, transfectie of infectie, en de voorbereiding van cel-gebaseerde testen. </li><li> Ondanks de behoefte aan snelheid en nauwkeurigheid in cel tellen,, 71% van de 400 ondervraagde onderzoekers tellen cellen met behulp van een hemocytometer. Terwijl hemocytometry is goedkoop, het is bewerkelijk en onderworpen aan de gebruiker vooringenomenheid en misbruik, wat resulteert in onjuiste tellingen. </li><li> Bronnen van fouten in hemocytometry zijn: ongelijke verdeling cel in de steekproef, te veel of te weinig cellen in het monster, subjectieve beslissingen over de vraag of een bepaalde cel binnen de gedefinieerde gebied tellen, verontreiniging van de hemocytometer, user-to-user variatie , en de variatie van hemocytometer vullen tarief. </li><li> Om de verveling te verlichten verband met handmatige tellen, 29% van de onderzoekers tellen cellen met behulp van geautomatiseerde cel telinrichtingen. Echter, voor de meeste onderzoekers, de prijs verbonden aan deze grote bench-top instrumenten is een belemmering voor het gebruik ervan. </li><li> De Scepter celgetalmeter is een geautomatiseerd mobiel apparaat dat de automatisering en nauwkeurigheid van de Coulter tellen bij een relatief lage kosten biedt. </li><li> Het systeem maakt gebruik van de Coulter principe van impedantie-gebaseerde deeltjes detectie in een geminiaturiseerde vorm met behulp van een combinatie van analoge en digitale hardware voor detectie, signaalverwerking, data-opslag, en grafische weergave. </li><li> De disposable sensor is ontworpen met een microfabricated, cel-sensing zone die discriminatie door celgrootte en het volume op sub-micron en sub-picoliter resolutie mogelijk maakt. </li><li> Verbeterde met precisie vloeistof-handling kanalen en elektronica, de Scepter cel teller geeft grafisch celpopulatie statistieken als een histogram. </li></ol> 2. Voorbereiding van een Single-cell Suspensie voor tellen <ol><li> Voor het gebruik van de Scepter cel tegen te gaan, beginnen met het verdunnen van een enkele celsuspensie van cellen, in fosfaat gebufferde zoutoplossing. Een concentratie van 10,000-500,000 cellen per ml is optimaal. </li><li> Breng 100 pi van de verwaterde cellen aan een 1,5 mL microfugebuis. </li></ol> 3. Het uitvoeren van celtellingen het gebruik van de Scepter <ol><li> Zet de scepter cel tegen te gaan door te drukken en houden van de te schakelen op de achterkant van het instrument en wachten op de instructies op het scherm te verschijnen. </li><li> Wanneer u wordt gevraagd, sluit een sensor aan het einde van de Scepter eenheid met de elektrode sensing-paneel naar de voorkant van het instrument. </li><li> Scepter sensoren bestaan ​​uit een precisie gegoten monsterkamer, met een elektronische detectie zone en geïntegreerde cel-sensing elektroden. De sensoren maken het mogelijk om celgrootte discrimineren op sub-micron resolutie en celvolume bij sub-picoliter resolutie. </li><li> Consistente sensor techniek, zorgt ervoor dat gelijk monster volumes worden geteld en nauwkeurige grootte metingen worden gemaakt. </li><li> Zodra de sensor is aangesloten, voert u elke stap van het tellen werkwijze volgens de instructies op het scherm als volgt: </li><li> Wanneer het scherm leest &quot;Houd de zuiger om te beginnen,&quot; op de zuiger. Het scherm zal dan lezen &quot;onderdompelen van de sensor.&quot; Dompel de sensor in de celsuspensie oplossing en laat de zuiger naar de celsuspensie zuigen in de sensor. </li><li> De zuiger fungeert als een elektrisch signaal en zal gebruik maken van het monster plus dood volume in de sensor. De snelheid of nauwkeurigheid van dompelen maakt niet uit als met pipetteren. Dit proces duurt enkele seconden. Als u klaar bent, het apparaat piept, en &quot;geladen Sample&quot; wordt weergegeven op het scherm. </li><li> Nadat het monster is geladen in de sensor wordt opgesteld door de sensing zone celgrootte en het volume vervolgens beoordelen, door de microkanalen. Zodra 50 pi van het monster wordt geteld van de Sensor vertelt het instrument om te stoppen met tellen. </li><li> Na de telling is voltooid, wordt het instrument scherm te lezen &quot;Count Compleet. Verwijder sensor en gooi deze weg.&quot; Volg de prompt, en verwijder en gooi de sensor. </li><li> Het instrument geeft vervolgens een histogram van de celgrootte of diameter op het scherm als de cel concentratie per ml. </li></ol> 4. Data Analysis <ol><li> Na de telling is voltooid en het histogram wordt weergegeven op het instrument van toepassing poorten door op de toggle knop. Selecteer de &quot;auto gating&quot; of het &quot;gebruik laatste&quot; ofwel automatisch de gate op basis van het histogram profiel, of om de poorten te gebruiken uit de vorige telling. </li><li> Onafhankelijk van de selectie, kan de poorten handmatig worden verplaatst naar fine-tunen van de gegevens. Druk nogmaals op de toggle button aan de linkerkant poort te selecteren en blader naar deggle naar de poort te verplaatsen naar wens. </li><li> En druk nogmaals op de tuimelschakelaar om de juiste gate te activeren en het schakelen gaat u naar de juiste gate plaats. Klik opnieuw, een nieuwe cel de concentratie, gemiddelde celvolume en de diameter wordt weergegeven. </li><li> De schakelaar kan ook worden verplaatst naar beide kanten om de weergave tussen de datum wisselen, tijd, gemiddelde celgrootte, en het gemiddelde celvolume. </li><li> Tot 72 histogrammen kan worden opgeslagen op het instrument zelf. Om de gegevens uploaden naar een computer, sluit het instrument via de USB-kabel-poort op het scherm. </li><li> Op de PC, dubbelklikt u op de Scepter Software Application om de software vervolgens lancering op &quot;connect&quot; te klikken. Alle tellingen worden automatisch haven naar de software. </li><li> De Scepter Application Software geeft het histogram waarin de bevolking verdeling van de cultuur in volume of diameter. Gedownloade bestanden kunnen vervolgens worden geëxporteerd naar Microsoft Excel, waar de ruwe data worden weergegeven in bakken van bepaalde cel diameters of cel volumes. </li></ol> 5. Representatieve resultaten <ol><li> Negentien verschillende cellijnen werden voorbereid voor het tellen en de theoretische uitgangspunten concentraties werden bepaald met behulp van een Coulter Counter. Deze cel suspensies werden vervolgens verder verdund tot celsuspensies verkrijgen op theoretische cel concentraties. </li><li> De Scepter celgetalmeter werd vervolgens gebruikt om celconcentraties te bepalen. Figuur 1 toont vijf verdunningen die werden gemeten voor vijf representatieve cellijnen, samen met de theoretische cel concentratie. </li><li> De hoge mate van lineariteit, zoals aangegeven door de R2-waarden, toont aan dat Scepter tellen is een betrouwbare methode voor de cellijnen getest, over een breed lineair bereik. </li><li> De totale relatieve nauwkeurigheid van Scepter tellen is aangetoond in figuur 2, waarin de gegevens van Scepter tellen zijn vergeleken met tellingen verkregen uit Coulter tellen. </li><li> Het logboek van Scepter-cel-tellingen is uitgezet tegen de log van Coulter telt, en toont aan dat, over alle geteste cellijnen, Scepter telt overeenkomen Coulter telt. </li><li> Tellingen van 19 cellijnen werden uitgevoerd met behulp van een Z2 Coulter Counter, de Scepter cel toonbank, een geautomatiseerde vision-based tegen te gaan, zoals Vi-Cell of Talloze systeem en een hemocytemeter. </li><li> Tellingen werden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant, het gebruik van de dezelfde cel te beginnen vering en identieke verdunningen. De resultaten weergegeven in Figuur 3 tonen aan dat celconcentraties gemeten door het tellen van Scepter die nauw aansluit bij de theoretische celconcentraties met een hoge lineariteit. </li><li> Het percentage variatiecoëfficiënt, of CV, werd berekend voor elke verdunning van elke cellijn voor elk telsysteem. Figuur 4 toont het gemiddelde% cv&#39;s meer dan 19 cellijnen met betrekking tot cel-concentratie en het tellen methode. </li><li> Binnen het bereik, de Scepter celgetalmeter is nauwkeuriger dan visie die gebaseerd is hemocytometer tellen, het weergeven van kleinere standaarddeviaties en kleinere gemiddelde coëfficiënten van variatie. </li><li> Scepter tellen is tien keer sneller dan hemocytometry en sneller dan andere geautomatiseerde tellers ook. In figuur 5, SF9, MCF7, en HEK293 cellen werden geteld met behulp van de methoden beschreven in deze video. </li><li> De gemiddelde tijd die nodig is om cellen te meten concentratie werd opgenomen. Merk op dat hemocytometry was slechts een keer uitgevoerd per monster. </li><li> Scepter maakt metingen op basis van celgrootte. Dus eventuele veranderingen in cellulaire morfologie kunnen worden vastgelegd in het histogram. Gezonde culturen weer een mooie klokvormige Gaussische verdeling, terwijl ongezonde cellen, lyseren, en veroorzaken een verschuiving in het histogram naar links (Figuur 6, linker paneel). </li><li> Ook wanneer een bevolking van 50% dode cellen werden gemengd met 50% levende cellen, werden histogram verschuivingen ook waargenomen (Figuur 6, rechter paneel). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Figuur 1" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Figuur 2" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Figuur 3" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Figuur 4" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Figuur 5" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Figuur 6" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Figuur 7" />

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

Kathleen Ongena, Chandreyee Das, Janet L. Smith, Sonia Gil, en Grace Johnston in dienst zijn bij Millipore, waarin de instrumenten gebruikt in dit artikel oplevert.

Het vergelijken van de prestaties van de Scepter cel tegen de resultaten van andere telmethoden, kunnen we concluderen dat deze nieuwe handheld, geautomatiseerde celgetalmeter precieze, snelle en betrouwbare bloedcellen levert over een breed bereik. De functionaliteit van Scepter tellen is een gevolg van de precisie ontworpen technologie ingebed in de sensor tip en de verfijnde tellen van instrumenten op basis van het Coulter principe. De prestaties kwaliteit suggereert Scepter tellen als methode om de snelheid te verhogen en verbeteren van de reproduceerbaarheid van cel-gebaseerde testen. De handheld-formaat maakt snelle verveling gratis tellen rechtsaf bij de celkweek kap.

<table border="1"><tbody><tr><td> Materiaal Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus Nummer </td><td> Commentaar </td></tr><tr><td> Scepter 2,0 Handheld Geautomatiseerde Cell Counter met 40 micrometer Scepter Sensoren </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> Scepter 2,0 Handheld Geautomatiseerde Cell Counter met 60 micrometer Scepter Sensoren </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Scepter Sensoren, 60 micrometer </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> Pak van 50 stuks van de sensoren </td></tr><tr><td> Scepter Sensoren, 40 um </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> Pak van 50 stuks van de sensoren </td></tr><tr><td> Universal Power Adapter </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Scepter O-Ring Kit </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 O-ringen en een filter te dekken </td></tr></tbody></table>

het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling cultuur met de scepter cell counter

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Het tellen van cellen is vaak een noodzakelijke, maar vervelende stap voor in vitro celkweek. Consistente cel concentraties in experimentele reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid. Bloedcellen zijn belangrijk voor het toezicht op gezondheid van de cellen en proliferatie rate, het beoordelen van immortalisatie of transformatie, zaaien cellen voor de volgende experimenten, transfectie of infectie, en de voorbereiding van cel-gebaseerde testen. Het is belangrijk dat celtellingen accuraat, consistent en snel, met name voor kwantitatieve metingen van cellulaire reacties. Ondanks deze behoefte aan snelheid en nauwkeurigheid in cel tellen, 71% van de ondervraagde 400 onderzoekers een die tellen cellen met behulp van een hemocytometer. Terwijl hemocytometry is goedkoop, het is bewerkelijk en onderworpen aan de gebruiker vooringenomenheid en misbruik, wat resulteert in onjuiste tellingen. Hemocytometers zijn gemaakt van speciaal optisch glas waarop celsuspensies worden geladen in de opgegeven volumes en geteld onder een microscoop. Bronnen van fouten in hemocytometry zijn: ongelijke verdeling cel in de steekproef, te veel of te weinig cellen in het monster, subjectieve beslissingen over de vraag of een bepaalde cel binnen de gedefinieerde gebied tellen, verontreiniging van de hemocytometer, user-to-user variatie , en de variatie van hemocytometer vullen tarief 2. Om de verveling te verlichten verband met handmatige tellen, 29% van de onderzoekers tellen cellen met behulp van geautomatiseerde cel telinrichtingen, deze omvatten vision-based tellers, systemen die cellen met behulp van de Coulter principle te detecteren, of flowcytometrie 1. Voor de meeste onderzoekers de belangrijkste barrière voor het gebruik van een geautomatiseerd systeem is de prijs verbonden aan deze grote benchtop instrumenten 1. De Scepter celgetalmeter is een geautomatiseerd mobiel apparaat dat de automatisering en nauwkeurigheid van de Coulter tellen bij een relatief lage kosten biedt. Het systeem maakt gebruik van de Coulter principe van impedantie-gebaseerde detectie deeltje drie in een miniatuur-formaat met een combinatie van analoge en digitale hardware voor detectie, signaalverwerking, data-opslag, en grafische weergave. De disposable tip is ontworpen met een microfabricated, cel-sensing zone die discriminatie door celgrootte en het volume op sub-micron en sub-picoliter resolutie mogelijk maakt. Verbeterde met precisie vloeistof-handling kanalen en elektronica, de Scepter celgetalmeter rapporten cel bevolkingsstatistieken grafisch weergegeven als een histogram.

De Scepter Cell Counter is een handheld geautomatiseerd apparaat dat kan worden gebruikt om cellen te tellen, controleren cel diameter en volume, en worden gebruikt om de gezondheid en de kwaliteit van de cellulaire bevolking controleren van de ene cultuur naar de volgende.

Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter

Het tellen van cellen is vaak een noodzakelijke maar tijdrovende stap bij in vitro celkweek. Consistente celconcentraties waarborgen de reproduceerbaarheid van experimenten en ...

De scepter cel teller is een handmatig geautomatiseerd apparaat voor het tellen van cellen, het monitoren van de cel diameter en het celvolume, en het controleren van de gezondheid en kwaliteit van cellulaire populaties. Het biedt aanzienlijke voordelen ten opzichte van andere telmethoden, waaronder een verbeterde nauwkeurigheid, gebruiksgemak en lage kosten voor het tellen van cellen. Volg bij het gebruik van de scepter de instructies op het grafische display om cellen in de wegwerpsensor op te zuigen.De cellen worden vervolgens geteld en het apparaat rapporteert celconcentraties en statistieken, die naar een computer kunnen worden geüpload en geanalyseerd. Hallo, ik ben Sonya. Ik ben onderzoekswetenschapper hier bij Millport, en vandaag ga ik u laten zien hoe u de Scepter gebruikt.Celsteller Het tellen van cellen is een noodzakelijke maar tijdrovende stap voor in vitro celkweek. Consistente celconcentraties waarborgen de reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid van experimenten. Celmetingen zijn belangrijk voor het monitoren van de celgezondheid en de proliferatiesnelheid, het beoordelen van immortaliserde of getransformeerde cellen voor daaropvolgende experimenten, transfectie of infectie, en de voorbereiding van celgebaseerde assays, waarbij snelheid en nauwkeurigheid essentieel zijn.Bij het tellen van cellen telde 71% van de 400 ondervraagde onderzoekers de cellen met behulp van een hemocytometer. Hoewel hemocytometrie goedkoop is, is het arbeidsintensief en onderhevig aan gebruikersbias en onjuist gebruik, wat resulteert in onnauwkeurige tellingen. Bronnen van fouten bij hemocytometrie omvatten een ongelijkmatige celverdeling in het monster en te veel of te weinig cellen in het monster.Subjectieve beslissingen over de vraag of een bepaalde cel binnen het gedefinieerde teltelgebied valt. Contaminatie van de hemocytometer, variatie tussen gebruikers en variatie in de vulsnelheid van de hemocytometer om de eentonigheid die gepaard gaat met handmatig tellen te verminderen. 29% van de onderzoekers telt cellen met behulp van geautomatiseerde celteeltoestellen.Voor de meeste onderzoekers vormt de prijs van deze grote tafelapparatuur echter een barrière voor het gebruik ervan. De scepter celsteller is een geautomatiseerd handapparaat dat de automatisering en nauwkeurigheid van Coulter-tellingen biedt tegen relatief lage kosten in een gebruiksvriendelijk handformaat. Het systeem maakt gebruik van het Coulter-principe van impedantiegebaseerde partikeldetectie in een geminiaturiseerd formaat, waarbij een combinatie van analoge en digitale hardware wordt gebruikt voor signaalverwerking van de sensor, gegevensopslag en grafische weergave.De wegwerpsensor is ontwikkeld met een micro-gefabriceerde celdetectiezone die discriminatie op basis van celgrootte en celvolume mogelijk maakt met een submicron- en subpicoliterresolutie, ondersteund door precisiekanalen voor vloeistofbehandeling en elektronica. De Scepter-celteller geeft celpopulatiestatistieken grafisch weer als een histogram voor gebruik. De Scepter-celteller begint met het verdunnen van een suspensie van enkelvoudige cellen in fosfaatgebufferde zoutoplossing.Een concentratie van 10.000 tot 500.000 cellen per milliliter is optimaal. Breng 100 microliter van de verdunde cellen over naar een microview-buisje van 1,5 milliliter. Zet de scepter celsteller aan door de schakelaar aan de achterzijde van het instrument ingedrukt te houden en wacht tot de instructies op het scherm verschijnen.Bevestig, wanneer u hiertoe wordt aangemoedigd, een sensor aan het uiteinde van de scepter-unit, waarbij het elektrodesensingpaneel naar de voorkant van het instrument is gericht. Scepter-sensoren bestaan uit een precisie-gevormde bemonsteringskamer met een elektronische sensingzone en geïntegreerde celsensing-elektroden. De sensoren maken het mogelijk om celgrootte met submicronresolutie en celvolume met sub-picoliterresolutie te onderscheiden.Consistente sensor engineering garandeert dat gelijke volumina monsters worden geteld en dat nauwkeurige groottemetingen worden uitgevoerd. Zodra de sensor is bevestigd, voert u elke stap van het telproces uit volgens de instructies op het scherm als volgt. Wanneer op het scherm staat 'houd de zuiger ingedrukt om te beginnen', drukt u op de zuiger; het scherm zal vervolgens aangeven 'dompel de sensor onder', waarna u de sensor in de celsuspensieoplossing dompelt, en laat u de zuiger los om de celsuspensie in de sensor te aspireren.De zuiger fungeert als een elektrisch signaal en zal het monster plus het dode volume in de sensor trekken. De snelheid of nauwkeurigheid van het indrukken is niet van belang, in tegenstelling tot bij het pipetteren. Dit proces zal enkele seconden duren wanneer het gereed is.Het instrument geeft een pieptoon en op het scherm verschijnt de melding datHet monster is geladen. Zodra het monster in de sensor is geladen, wordt het door de detectiezone getrokken om de celgrootte en het celvolume te bepalen. Vervolgens stroomt het door de microkanalen; zodra 50 µL van het monster is geteld, geeft de sensor het instrument het signaal om te stoppen met tellen.Zodra de telling is voltooid, verschijnt op het scherm van het instrument de melding count complete. Verwijder de sensor en gooi deze weg. Volg de aanwijzingen op het scherm om de sensor te verwijderen en weg te gooien.Het instrument toont vervolgens op het scherm een histogram van de celgrootte of diameter, evenals de celconcentratie per milliliter. Nadat de telling is voltooid en het histogram op het instrument wordt weergegeven, kunnen gates worden toegepast door op de schakelknop te drukken; selecteer 'auto gating' om de gate automatisch in te stellen op basis van het histogramprofiel, of selecteer 'use last' om de gates van de vorige telling te gebruiken. Ongeacht de selectie kunnen de gates handmatig worden verplaatst voor een nauwkeurige afstelling.Stel de gegevens af, druk opnieuw op de schakelknop om de linkerpoort te selecteren en schuif met de schakelknop om de poort naar de gewenste positie te verplaatsen. Druk vervolgens opnieuw op de schakelknop om de rechterpoort te activeren en schuif met de schakelknop om de rechterpoort te plaatsen. Klik nogmaals.Een nieuwe celconcentratie, het gemiddelde celvolume en de diameter worden weergegeven. De schakelaar kan naar beide zijden worden bewogen om het display te wisselen tussen datum/tijd, gemiddelde celgrootte en gemiddeld celvolume; tot 72 histogrammen kunnen op het instrument zelf worden opgeslagen. Om de gegevens naar een persoonlijke computer te uploaden, sluit u het instrument aan via de USB-kabelpoort, op het beeldscherm van de pc.Dubbelklik op de Scepter-softwareapplicatie om de software te starten. Klik vervolgens op verbinden. Alle tellingen worden automatisch naar de software overgedragen.De scepter-applicatiesoftware toont het histogram met de populatieverdeling van de cultuur, uitgedrukt in volume of diameter. De gedownloade bestanden kunnen vervolgens worden geëxporteerd naar Microsoft Excel, waar de ruwe gegevens worden weergegeven in intervallen van gespecificeerde celdiameters of celvolumes. Er werden 19 verschillende cellijnen klaargemaakt voor telling en de theoretische startconcentraties werden bepaald met een celteller.Deze cel-suspensies werden vervolgens verder verdund om cel-suspensies met theoretische celconcentraties te verkrijgen. De scepter celcounter werd vervolgens gebruikt om de celconcentraties te bepalen. Deze figuur toont vijf verdunningen die zijn gemeten voor vijf representatieve cellijnen, samen met de theoretische celconcentratie.De hoge mate van lineariteit, zoals aangegeven door de r-kwadraatwaarden, laat zien dat scepter-telling een betrouwbare methode is voor de geteste cellijnen over een breed lineair werkbereik. De algemene relatieve nauwkeurigheid van scepter-telling wordt hier aangetoond door gegevens verkregen via scepter-telling te vergelijken met tellingen verkregen via coter-telling. De logaritme van de scepter-celtellingen is uitgezet tegen de logaritme van de coter-tellingen, waaruit blijkt dat scepter-tellingen voor alle geteste cellijnen overeenkomen met coter-tellingen.Tellingen van 19 cellijnen werden uitgevoerd met een Z two coulter counter. De scepter cell counter, een geautomatiseerde visiegebaseerde teller, zoals het V cell- of count test-systeem, en hemo TER tellingen werden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant, waarbij dezelfde initiële celsuspensie en identieke verdunningen werden gebruikt. De in deze figuur getoonde resultaten laten zien dat de met de scepter-telmethode gemeten celconcentraties nauw overeenkomen met de theoretische celconcentraties met een hoge lineariteit.Het procentuele variatiecoëfficiënt of CV werd berekend voor elke verdunning van elke cellijn. Voor elk telfysteem worden hier de gemiddelde procentuele CV's weergegeven over 19 cellijnen met betrekking tot de celconcentratie en de telmethode binnen het werkbereik. De Scepter cellenteller is preciezer dan tellen met een hemocytometer, met kleinere standaarddeviaties en kleinere gemiddelde variatiecoëfficiënten.Scepter-telling is 10 keer sneller dan hemocytometrie en ook sneller dan andere automatische tellers. Hier werden SF nine, MCF seven en HC 2 93 cellen geteld met de in deze video beschreven methoden. De gemiddelde tijd die nodig was om de celconcentratie te meten, is vastgelegd.Let op dat de hemocytometrie slechts één keer per monster is uitgevoerd. Scepter voert metingen uit op basis van de celgrootte. Hierdoor kunnen eventuele veranderingen in de cellulaire morfologie in het histogram worden vastgelegd.Gezonde culturen vertonen een mooie klokvormige Gaussische distributie, terwijl ongezonde cellen afsterven en een verschuiving in het histogram naar links veroorzaken. Op dezelfde manier werden verschuivingen in het histogram waargenomen wanneer een populatie van 50% dode cellen werd gemengd met 50% levende cellen. Ik heb u zojuist laten zien hoe u de nieuwe Scepter cell counter van Millipore gebruikt, die de manier waarop onderzoekers hun cellen tellen revolutioneert.

determining-cell-number-during-cell-culture-using-scepter-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Kennis van het exacte aantal levensvatbare cellen is nodig voor vele weefselkweek manipulaties. Dit protocol beschrijft hoe onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren cellen met behulp van een hemacytometer. Hoewel het beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), kan het worden gebruikt voor andere celtypen.

Het tellen van menselijke neurale stamcellen

Bepalen van het aantal cellen in cultuur is belangrijk in standaardisatie van kweekomstandigheden en in het uitvoeren van nauwkeurige kwantificatie experimenten. In deze video laten we zien hoe cellen worden geteld met behulp van een hemacytometer.

Tellen en bepalen van de levensvatbaarheid van de gekweekte cellen

De Moxi Z miniatuur automatische celgetalmeter is een nieuw instrument dat de Coulter principe combineert met gepatenteerde dunne-film-sensor-technologie en een eigen software algoritme om dimensionering uit te voeren en het tellen van een breed scala grootte van de deeltjes en aan de algehele gezondheid van monodisperse te bepalen zoogdiercellen culturen. Dit protocol beschrijft het gebruik van dit instrument voor het tellen en de beoordeling van de gezondheid van de celculturen.

Bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en Health Met behulp van de Moxi Z Mini geautomatiseerde cel Counter

Dit protocol beschrijft het gebruik van drie verschillende methoden voor het analyseren van celproliferatie in borstkankercellijnen. Dit omvat het gebruik van conventionele celtelling, op luminescentie gebaseerde celviabiliteit en celtelling door het gebruik van een celimager. Elk biedt voordelen voor de reproduceerbare meting van celproliferatie.

Vergelijking van de drie verschillende methoden voor het bepalen van de cel proliferatie in borstkanker cellijnen

Dit artikel beschrijft de kwantificering van hemocytometer- en migratie/invasie-micrografieën via twee nieuwe open-source ImageJ-plugins Cell Concentration Calculator en migration assay Counter. Verder beschrijft het protocollen voor beeldverwerving en kalibratie en bespreekt het in detail de inputvereisten van de plugins.

Geautomatiseerde kwantificering en analyse van Cell Counting Procedures Met behulp van ImageJ Plugins

Het huidige protocol beschrijft een geïntegreerde methode onderzoek naar kanker cel migratie en invasie op één platform in real-time, het verstrekken van een gemakkelijk reproduceerbaar zijn en tijd-efficiënte optie te bestuderen van de cel mobiliteit en morfologie.

Een eenvoudige migratie/invasie Workflow met behulp van een geautomatiseerde Live-cel Imager

Kruisverwijzing tussen borstepitheelcellen en endotheelcellen draagt belangrijk bij aan de progressie van borstkanker, tumorgroei en metastase. In deze studie zijn sferoïden gemaakt van borstkankercellen samen met vasculaire en / of lymfatische endotheelcellen en tonen hun toepasbaarheid aan als een in vitro systeem voor borstkankeronderzoek.

Mammary Epitheliale en Endotheelcel Sferoïden als een potentieel functioneel in vitro model voor borstkankeronderzoek

Dit protocol biedt een uitgebreide richtlijn voor het opzetten en kwantitatief monitoren van co-culturen, inclusief fotoautotrofe suikerafscheidende cyanobacteriën en heterotrofe gisten.

Assemblage en kwantificering van co-culturen die heterotrofe gist combineren met fototrofe suikerafscheidende cyanobacteriën

Dit artikel beschrijft een protocol voor mechanische karakterisering van levende sferoïden binnen een 3D-matrix met behulp van Brillouin-microspectroscopie. Deze volledig optische methode maakt sferoidvisualisatie mogelijk met microschaalresolutie en kwantitatieve mechanische eigenschappen. Deze benadering heeft implicaties voor mechanische fenotypering; bijvoorbeeld het bepalen van pathologische toestanden van tumorsferoïden binnen een 3D-microomgeving.

Mechanische mapping van sferoïden met behulp van Brillouin-spectroscopie

Er is een kritieke behoefte aan 3D-kankermodellen die heterocellulaire overspraak vastleggen om kankermetastasen te bestuderen. Onze studie presenteert de generatie van heteromulticellulair stromaal-epitheel in een steiger- en steigervrije omgeving die kan worden gebruikt om invasie en cellulaire ruimtelijke verdelingen te bestuderen.

Heteromulticellulaire stromale cellen in steigervrije 3D-culturen van epitheelkankercellen om invasie te stimuleren

Leer cell counting met de Scepter Cell Counter voor nauwkeurige celbiologie-experimenten. Dit handzame apparaat verbetert reproduceerbaarheid en vermindert gebruikersfouten in celkweek.

Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter

Meer video's verkennen