Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter
26 november 2010
De Scepter Cell Counter is een handheld geautomatiseerd apparaat dat kan worden gebruikt om cellen te tellen, controleren cel diameter en volume, en worden gebruikt om de gezondheid en de kwaliteit van de cellulaire bevolking controleren van de ene cultuur naar de volgende.
De scepter celteller is een handzaam geautomatiseerd apparaat voor het tellen van cellen, het bewaken van celdiameter en -volume en het controleren van de gezondheid en kwaliteit van cellulaire populaties. Het biedt aanzienlijke voordelen ten opzichte van andere tellingmethoden, waaronder verbeterde nauwkeurigheid, gebruiksgemak en lage kosten om cellen te tellen. Gebruik de scepter en volg de instructies op het grafische display om cellen aan te zuigen in de wegwerpsensor.
De cellen worden vervolgens geteld en het apparaat rapporteert celconcentraties en statistieken, die naar een computer kunnen worden geüpload en geanalyseerd. Hallo, ik ben Sonya. Ik ben een onderzoekswetenschapper hier in Millport, en vandaag ga ik je laten zien hoe je de scepter moet gebruiken.
Cellen tellen Telling van cellen is een noodzakelijke maar vervelende stap voor in vitro celcultuur. Consistente celconcentraties zorgen voor experimentele reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid. Celtellingen zijn belangrijk voor het bewaken van celgezondheid en proliferatiesnelheid, het beoordelen van onsterfelijk of transformatie zaaiende cellen voor volgende experimenten, transfectie of infectie, en het voorbereiden van cel-gebaseerde assays ondanks de noodzaak voor snelheid en nauwkeurigheid.
Bij celtelling tellen 71%van de 400 onderzochte onderzoekers cellen met behulp van een hemo cytometer. Hoewel hemo cytometrie goedkoop is, is het arbeidsintensief en onderhevig aan gebruikersvooroordeel en misbruik, wat resulteert in onnauwkeurige tellingen. Bronnen van fouten in hemo cytometrie omvatten ongelijkmatige celverdeling in het monster, te veel of te weinig cellen in het monster.
Subjectieve beslissingen over of een bepaalde cel binnen het gedefinieerde telgebied valt. Besmetting van de hemo cytometer, gebruikersvariatie en variatie van het vulniveau van de hemo cytometer om de verveling geassocieerd met handmatig tellen te verlichten. 29%van de onderzoekers tellen cellen met behulp van geautomatiseerde celtellingsapparaten.
Voor de meeste onderzoekers is de prijs die gepaard gaat met deze grote benchtop-instrumenten echter een belemmering voor hun gebruik. De scepter celteller is een geautomatiseerd handapparaat dat de automatisering en nauwkeurigheid van coter-telling biedt tegen relatief lage kosten in een eenvoudig te gebruiken handformaat. Het systeem gebruikt het Coter-principe van impedantie-gebaseerde deeltjesdetectie in een geminiaturiseerde vorm met behulp van een combinatie van analoog en digitaal hardware voor signaalverwerking, gegevensopslag en grafische weergave.
De wegwerpsensor is ontworpen met een microfabricated celdetectiezone die discriminatie mogelijk maakt op basis van celgrootte en celvolume met submicron en sub picoliteroplossing, verbeterd met precisievloeistofbehandelingskanalen en elektronica. De scepter celteller toont grafisch celpopulatiestatistieken als een histogram om te gebruiken. De scepter celteller begint met het verdunnen van een enkele celsuspensie in fosfaatgebufferde zoutoplossing.
Een concentratie van 10.000 tot 500.000 cellen per milliliter is optimaal. Breng 100 microliter verdunde cellen over in een 1,5 milliliter microview-buis. Schakel de scepter celteller in door de schakelaar aan de achterkant van het apparaat ingedrukt te houden en wacht tot de instructies op het scherm verschijnen.
Wanneer daarom wordt gevraagd, bevestigt u een sensor aan het uiteinde van de sceptereenheid met het elektrodesensorpaneel naar de voorkant van het apparaat gericht. Sceptersensoren bestaan uit een nauwkeurig gevormde bemonsteringskamer met een elektronische detectiezone en geïntegreerde celdetectie-elektroden. De sensoren maken het mogelijk om celgrootte met submicronresolutie en celvolume met subpicoliteresolutie te onderscheiden.
Consistente sensorengineering zorgt ervoor dat gelijke monstersamen volumes worden geteld en nauwkeurige maatmetingen worden gemaakt. Zodra de sensor is bevestigd, voert u elke stap van het telproces uit volgens de instructies op het scherm zoals hieronder beschreven. Wanneer het scherm leest, houdt u de zuiger ingedrukt om te beginnen met drukken op de zuiger, leest het scherm vervolgens onderdompelen van de sensor, onderdompelen van de sensor in de celsuspensieoplossing en laat de zuiger los om de celsuspensie in de sensor te aspireren.
De zuiger fungeert als een elektrisch signaal en trekt het monster plus dood volume in de sensor. De snelheid of nauwkeurigheid van het duiken is niet van belang zoals bij pipetteren. Dit proces duurt enkele seconden wanneer het klaar is.
Het instrument zal piepen en het geladen monster zal op het scherm worden weergegeven. Zodra het monster in de sensor is geladen, wordt het door de detectiezone getrokken om de celgrootte en het celvolume te beoordelen. Vervolgens door de microkanalen, zodra 50 microliter monster is geteld, vertelt de sensor het instrument om te stoppen met tellen.
Nadat de telling is voltooid, zal het scherm van het instrument aanwijzen dat de telling voltooid is. Verwijder de sensor en gooi hem weg. Volg de prompt en verwijder en gooi de sensor weg.
Het instrument zal vervolgens een histogram van celgrootte of -diameter op zijn scherm weergeven, evenals de celconcentratie per milliliter. Nadat de telling is voltooid en het histogram op het apparaat is weergegeven, plaatst u gates door op de schakelknop te drukken, selecteert u automatische gating of gebruikt u de laatste om de gate automatisch in te stellen op basis van het histogramprofiel of om de gates van de vorige telling te gebruiken. Ongeacht de selectie, kunnen de gates handmatig worden verplaatst om te verfijnen.
Stel de gegevens af, druk opnieuw op de schakelknop om de linker gate te selecteren en scrol met de schakel om de gate te verplaatsen zoals gewenst. Druk vervolgens opnieuw op de schakel om de rechter gate te activeren en scrol met de schakel om de rechter gate te plaatsen. Klik opnieuw.
Een nieuwe celconcentratie, gemiddelde celvolume en diameter worden weergegeven. De schakel kan ook naar beide kanten worden geplaatst om de weergave te schakelen tussen datum tijd, gemiddelde celgrootte en gemiddeld celvolume. Tot 72 histogrammen kunnen op het instrument zelf worden opgeslagen. Om de gegevens naar een persoonlijke computer te uploaden, sluit u het apparaat aan via de USB
Overzicht
De Scepter Cell Counter is een handzaam geautomatiseerd apparaat dat is ontworpen voor het tellen van cellen, het monitoren van de celdiameter en het celvolume, en het beoordelen van de gezondheid van celpopulaties. Het biedt een gebruiksvriendelijk en kosteneffectief alternatief voor traditionele telmethoden.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Celbiologie
- Celkweektechnieken
- Geautomatiseerde celtelling
Achtergrond
- Het tellen van cellen is essentieel voor het waarborgen van de reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid van experimenten.
- Traditionele methoden, zoals hemocytometrie, zijn arbeidsintensief en gevoelig voor gebruikersbias.
- Geautomatiseerde apparaten kunnen de nauwkeurigheid verbeteren, maar zijn vaak kostbaar.
- De Scepter Cell Counter biedt een betaalbare, handzame oplossing voor geautomatiseerd tellen.
Doel van de studie
- Om het gebruik van de Scepter Cell Counter aan te tonen voor nauwkeurig tellen van cellen.
- Om de voordelen van het gebruik van een geautomatiseerd apparaat ten opzichte van handmatige methoden te belichten.
- Om een stapsgewijze handleiding te bieden voor het bedienen van de Scepter Cell Counter.
Gebruikte methoden
- Cellen worden verdund in fosfaatgebufferde zoutoplossing vóór het tellen.
- Een wegwerpsensor wordt gebruikt om de celsuspensie op te zuigen.
- Het apparaat telt de cellen en toont statistieken op een grafische interface.
- Gegevens kunnen worden geüpload naar een computer voor verdere analyse.
Belangrijkste resultaten
- De Scepter Cell Counter biedt nauwkeurige cel tellingen en populatiestatistieken.
- De resultaten worden weergegeven als histogrammen voor een eenvoudige interpretatie.
- Gebruikers kunnen gates toepassen om gegevens te verfijnen op basis van grootte en volume.
- Er kunnen tot 72 histogrammen worden opgeslagen voor latere analyse.
Conclusies
- De Scepter Cell Counter is een effectief instrument voor het tellen van cellen in onderzoek.
- Het vermindert de benodigde tijd en inspanning in vergelijking met handmatige telmethoden.
- Het apparaat verhoogt de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid in celkulturexperimenten.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de industrie
Nauwkeurige en reproduceerbare celtelling is van cruciaal belang voor het waarborgen van de dataintegriteit in preklinische assays en workflows voor compound screening. Handmatige methoden introduceren variabiliteit die targetvalidatie en inspanningen voor lead-identificatie in de weg kan staan. De Scepter Cell Counter lost dit op door geautomatiseerde, impedantiegebaseerde telling te bieden met minder gebruikersbias en een verbeterde doorvoersnelheid.
Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt nauwkeurige kwantificering van de celgezondheid en proliferatiesnelheden mogelijk ter ondersteuning van het onderzoeken van therapeutische hypothesen.
- Operationele waarde: Vermindert variabiliteit in zaaidichtheden voor transfectie, infectie en assay-voorbereiding, waardoor de experimentele consistentie wordt verbeterd.
Screening & Assay-ontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Genereert histogram-gebaseerde grootte- en volumeverdelingen waarmee cellulaire subpopulaties kunnen worden onderscheiden voor de gereedheid van de assay.
- Operationele waarde: Levert snelle, geautomatiseerde tellingen (10x sneller dan hemocytometrie) ter ondersteuning van hoogfrequente monitoring in screeningscascades.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Wetenschappelijke waarde: Legt veranderingen in de celmorfologie vast via histogramverschuivingen, wat vroege detectie van cultuurstress of transformaties mogelijk maakt die relevant zijn voor ziektemodellen.
- Operationele waarde: Slaat tot 72 histogrammen op voor longitudinale monitoring van de stabiliteit van cellijnen gedurende preklinische studies.
Integratie van Pipeline & Workflow
De methode past binnen de vroege ontdekkingsfase ter ondersteuning van de assay-voorbereiding en compoundscreening, waarbij de data-outputs downstream-analyses en besluitvorming mogelijk maken.
- Discovery Biology: Ondersteunt hypothesetesten door nauwkeurige celconcentraties te bieden voor het monitoren van immortalisatie, transformatie en proliferatie.
- Screening: Waarborgt reproduceerbaar uitzaaien van cellen voor transfectie, infectie en celgebaseerde assays door middel van precieze concentratiecontrole.
- Analytics: Levert statistieken voor concentratie, gemiddeld celvolume en diameter, die kunnen worden gegated en geëxporteerd voor vergelijkende analyse tussen verschillende condities.
- Translationeel Onderzoek: Verschuivingen in het histogram weerspiegelen veranderingen in de cellulaire gezondheid, wat de afstemming van translationele biomarkers in preklinische modellen ondersteunt.
- Enterprise Hergebruik: Het handformaat en de USB-gegevens전overdracht maken hergebruik tussen teams en laboratoria mogelijk zonder dat er specifieke benchtop-infrastructuur nodig is.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verbetert het voorspellende vertrouwen door telvariabiliteit te verminderen en het detecteren van verschuivingen in subpopulaties via impedantie-gebaseerde sizing mogelijk te maken.
- Operationele waarde: Combineert lage kosten, draagbaarheid en gebruiksgemak om de toegang tot geautomatiseerd tellen in gedecentraliseerde laboratoria te vergroten.
- Strategische waarde: Verbetert de reproduceerbaarheid bij het zaaien en de assay-voorbereiding, waardoor het aantal mislukte experimenten afneemt en de betrouwbaarheid van go/no-go-beslissingen toeneemt.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risicogestuurde vooruitgang door consistente cel-inputs te waarborgen in preklinische effectiviteits- en toxiciteitsstudies.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist een basisopleiding in het bevestigen van sensoren, de bediening van de zuiger en de gating-procedures zoals beschreven in de workflow van het apparaat.
- Afhankelijk van wegwerpsensoren en USB-connectiviteit voor data-export; geen aanvullende instrumentatie nodig buiten een standaard pc voor softwareanalyse.
- Vereist verdunning van de cel-suspensie in PBS tot 10.000–500.000 cells/mL voor een optimale telnauwkeurigheid.
- Houd bij het instellen van de analyse-gates voor histograminterpretatie rekening met de variabiliteit in grootte en volume per celtype.
- Beperkt tot gesuspendeerde cellen; niet geschikt voor adherente of geaggregeerde monsters zonder voorafgaande dissociatie.
Biopharma Veelgestelde Vragen
Chapters in this video
0:00
Title
0:50
The Importance of Cell Counting
2:57
Preparation of Single-cell Suspension for Counting
3:23
Performing Cell Counts Using the Scepter
5:16
Data Analysis
6:41
Linearity and Precision of Scepter Cell Counting Across Multiple Cell Lines
9:16
Conclusion
