Name: Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: Leer het opfokken van Anopheles gambiae voor malariavectoronderzoek in een gecontroleerd insectarium. Deze methode toont levenscycli en omgevingsbeheersing voor laboratoriumstudies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mosquito voedsel: <ol><li> Eten A: geaarde visvoer (Aquaricare). Een klein snufje moet worden toegevoegd. </li><li> Eten B: geaarde CAT voedsel (Purina). Een klein snufje moet worden toegevoegd. </li><li> Eten C: kattenvoer (Purina). Twee tabletten moet worden toegevoegd. </li></ol> Het bloed: Dier of menselijk bloed kan worden gebruikt om achter muggen. Vers bloed is verzameld met een spuit en in een steriele 15 ml Falcon buis met daarin 1 ml van de CPD (antistollingsmiddel) voor elke 10 ml bloed, dan voorzichtig gemengd en gecentrifugeerd bij kamertemperatuur bij 2000 rpm gedurende 5 minuten. Het supernatant wordt verwijderd en zorg ervoor dat de buffy coat, die andere bloedcellen (bijv. WBC) omvat te verwijderen. De RBC-pellet wordt vervolgens gesuspendeerd in een gelijk volume van RPMI medium door pipetteren, en verder gewassen in dit medium drie keer. Na de laatste wasbeurt, het ingehulde RBC zijn geresuspendeerd in een gelijk volume van RPMI medium en opgeslagen bij 4 ° C (kan worden gehouden voor 8-10 dagen). Net voor het voeden, is de RBC (in RPMI) gecentrifugeerd (2000 rpm gedurende 5 minuten) om pellet beneden de cellen, en de verpakte RBC is geresuspendeerd in serum (O + menselijk serum) om een ​​40% hematocriet te verkrijgen. Het bloed moet worden bewaard bij 37 ° C altijd voor de voeding. DAG 1: <ol><li> De 3-5 dagen oude volwassen vrouwelijke muggen worden gevoed met bloed om eitjes te leggen. </li><li> Voor bloed voeden, is een kunstmatig membraan (parafilm) voeding gebruikte methode als volgt: <ol><li> Rode bloedcellen (zie hierboven voor het bloed voorbereiding) worden gemengd met warmte geïnactiveerd serum om een ​​~ 40% hematocriet (verpakt RBC 40% en serum 60%) te verkrijgen. Dit wordt toegevoegd aan het glas feeder. </li><li> De feeder is verbonden met een warm water-jack (37 ° C), en op de kooi om de muggen de toegang tot het membraanoppervlak mogelijk te maken. </li><li> De muggen mogen voer voor ~ 30 minuten. </li></ol></li></ol> DAG 3: <ol><li> De vrouwtjes eieren leggen zal twee dagen nadat ze zich voeden met bloed. Een kleine filtreerpapier verpakt in een conische vorm wordt in een klein bekerglas met gedestilleerd water, om ervoor te zorgen dat de filter vochtig papier krijgt. De beker wordt bewaard in de kooi &#39;s nachts voor de muggen om eitjes te leggen. </li></ol> DAG 4: <ol><li> Het filter met de mug eitjes is geplaatst in een plastic bakje met ~ 300 ml gedestilleerd water. Een snuifje van voedsel A wordt toegevoegd aan de bak en de eieren mogen naar larven uitkomen de komende dagen. </li></ol> Dag 5 - 8: <ol><li> Groeiende larven worden gevoed elke dag met twee tabletten van voedsel C en gecontroleerd op dichtheid en de bevolking. Op de achtste dag (5 dagen oud larven), is de larven bevolking verdund van een tray tot ~ 10 trays, met een snufje van voedsel A en twee tabletten van voedsel C in elke lade. (~ 30 min.) </li></ol> Dag 9 - 12: <ol><li> De larven worden gevoed elke dag met voedsel C. Op de 12e dag (9 dagen oud larven), wordt het water vervangen met vers water en voedsel wordt toegevoegd (een snufje van voedsel B en twee tabletten van voedsel C). De poppen begint te ontwikkelen in dit stadium. De trays zijn bedekt met netten om te ontsnappen van de volwassenen te voorkomen. (~ 8-10 minuten) </li></ol> Dag 13 - 15: De poppen mogen voor volwassenen ontstaan ​​voor de komende 2 - 3 dagen. Voedsel wordt gegeven elke dag aan de larven / poppen door het zorgvuldig verwijderen van de netto om te voorkomen dat ontsnappen van de volwassenen. Dag 16: <ol><li> De volwassenen worden verzameld in een kooi door middel van een afzuiger aangesloten op vacuüm. De kooi bestaat uit een kleine 100 ml fles met een katoenen lont die doordrenkt is met 10% sucrose (autoclaaf) en een papieren handdoek bekleding op de bodem om alle mogelijke suiker gemorst die kunnen optreden tijdens de kooi behandeling genieten. (~ 30-40 min.) </li></ol> Dag 17 - 21: <ol><li> De volwassenen (zowel mannen als vrouwen) worden vervolgens bewaard in de insectary ruimte voor 4-5 dagen, gevoed met 10% sucrose voordat ze weer bloed gevoed aan de volgende cyclus te beginnen. Hetzelfde muggen kan gebruikt worden om eieren te leggen meer dan eens. </li><li> De muggen die niet nodig zijn voor experimenten of opvoeding kunnen worden gedood door het plaatsen van de kooi in een vriezer. De gebruikte schalen en kooien moeten worden gereinigd en gedroogd voordat ze kunnen opnieuw gebruikt worden. </li></ol> LET OP: Er kunnen een aantal variaties in de mug houderijsysteem en de verschillende labo&#39;s kunnen verschillende technieken.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
<li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49(2005).</li>
<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Voeding A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>Gemalen visvoer. Een klein snufje moet worden toegevoegd.</td></tr><tr><td>Voeding B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Gemalen kattenvoer. Een klein snufje moet worden toegevoegd.</td></tr><tr><td>Voeding C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Kattenvoer. Twee tabletten moeten worden toegevoegd</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>geprepareerde rode bloedcellen: 40% hematocriet in menselijk serum</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>anticoagulans</td></tr><tr><td>serum</td><td></td><td></td><td></td><td>O+ menselijk serum</td></tr><tr><td>Muskietenvoeder</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>muskieten</td></tr><tr><td>10% sucrose</td><td></td><td></td><td></td><td>muskiettenvoeding</td></tr><tr><td>insectarium</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protocol voor mosquito opfok (a. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Dit protocol beschrijft mug opvoeding in de insectary. De insectary kamers zijn gehandhaafd op 28 ° C en ~ 80% luchtvochtigheid, met een 12 uur. dag / nacht cyclus. Voor deze procedure moet u mug kooien, 10% steriele sucrose-oplossing, papieren handdoeken, beker, Whatman filter papier, glas feeders, menselijk bloed en serum, waterbad, parafilm, gedestilleerd water, schone plastic trays, mug voedsel (zoals beschreven hieronder), muskietennet aan de trays, vacuüm, en een verzameling afdekklepje voor volwassenen te verzamelen.

Deze video illustreert de algemene technieken die worden gebruikt aan de achterzijde Anopheles gambiae in het laboratorium. De methoden voor het onderhoud van het laboratorium muggen worden gedemonstreerd in alle stadia van het leven van het organisme cyclus van larven tot poppen om bloed te geven volwassenen.

Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae)

Dit protocol beschrijft de kweek van muggen in het insectarium. De ruimtes van het insectarium worden gehouden op 28 °C en ~80% luchtvochtigheid, met een dag/nachtcyclus van 12 uur...

Mijn naam is Shish en ik ben postdoc in het laboratorium van Dr. George OU aan de John Hopkins School of Public Health. In de afdeling Moleculaire Microbiologie en Immunologie zal ik laten zien hoe men muskieten van de soort Anopheles gambiae kweekt. In het laboratorium houden we ze in de insectarierkamer, die gewoonlijk op 27 °C en een luchtvochtigheid van 80% wordt gehouden.De insectarierkamer wordt tevens beheerd in een dag-nachtcyclus van 12 uur, zodat we de natuurlijke omstandigheden kunnen nabootsen. Dit is de insectarierkamer die we hebben, wat hier een kernfaciliteit is voor het houden van deze insecten. Zoals u kunt zien, zijn hier alle verschillende trays aanwezig met muggen in alle diverse stadia: het ei, de verschillende stadia van de larven en de pop.Deze trays bevatten larven van ongeveer 11 of 12 dagen oud, en dit is een kooi waarin we de volwassen muggen verzamelen en in stand houden met een 10%sucrose-oplossing. Om te beginnen met het fokken van de muggen moeten we de muggen bloed voeren, omdat de muggen het eiwit uit het bloed nodig hebben om eieren te leggen. Dag één is dus nadat de volwassenen in een kooi zijn verzameld en in stand worden gehouden op 10%sucrose.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel vuurvaste voor malaria, dient te worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van Plasmodium besmettingen binnen de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van plasmodium infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor de voorbereiding van de gametocyt cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Plasmodium falciparum Infecties in Muggen en Infection Fenotype Bepaling

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de Dimopoulos lab dsRNA injecteren in Anopheles gambiae muggen die de malariaparasiet haven. De techniek het manipuleren van de injectie installatie en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Protocol voor RNAi Testen in volwassen muggen (A. gambiae)

Genetische kruisen van knaagdieren malariaparasieten worden uitgevoerd door het voeren van twee genetisch verschillende parasieten aan muggen. Recombinant nakomelingen zijn gekloond van muizen bloed na waardoor muggen om geïnfecteerde muizen bijten. Deze video laat zien hoe de productie van genetisch kruisen...

Protocol voor de productie van een genetische Kruis van het knaagdieren malariaparasieten

RNA-Seq-analyses worden steeds belangrijker voor het identificeren van de moleculaire grondslagen van adaptieve eigenschappen bij niet-modelorganismen. Hier wordt een protocol beschreven om differentieel tot expressie gebrachte genen te identificeren tussen diapauze en niet-diapauze Aedes albopictus muggen, van het kweken van muggen tot RNA-sequencing en bioinformatica-analyses van RNA-Seq-gegevens.

Een experimentele en Bioinformatica Protocol voor RNA-seq Analyses van Fotoperiodische diapause in de Aziatische tijgermug, Aedes albopictus

Door inoculatie met kralen maakt de beschreven techniek het mogelijk om de melaniseringsrespons van de mug in het circulerende hemolymphesysteem te stimuleren. De hoeveelheid melanine die de kralen bedekt, kan na dissectie worden gemeten als een maatstaf voor de immuunrespons.

het enten<em&gt; Anopheles gambiae</em&gt; Muggen met kralen te induceren en Meet de melanisatie immuunrespons

Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia worden vrijgegeven in natuurlijke populaties te onderdrukken van de overdracht van arboviruses. We worden methoden beschreven aan achterzijde Ae. aegypti met Wolbachia infecties in het laboratorium voor experimenten en veld release, voorzorgsmaatregelen nemen om laboratorium aanpassing en selectie te minimaliseren.

Behoud van Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia

Een protocol wordt gepresenteerd voor de formulering van een bloedvrij kunstmatig dieet om Anopheles muggen in gevangenschap te voeden. Dit dieet heeft een vergelijkbare prestatie als gewerveld bloed en triggers oogenese en ei rijping en produceert levensvatbare volwassen nakomelingen.

Een bloedvrij dieet om anopheline muggen rear

Het bipartiete GAL4-UAS systeem is een veelzijdig instrument voor modificatie van genexpressie op een gecontroleerde spatiotemporale manier die functionele genetische analyse in Anopheles gambiae mogelijk maakt. De beschreven procedures voor het gebruik van dit systeem zijn een semi-gestandaardiseerde kloonstrategie, seksing en screening van poppen op fluorescerende eiwitmarkers en embryofixatie.

Gebruik van het GAL4-UAS-systeem voor functionele genetica in Anopheles gambiae

Het protocol beschrijft hoe locatiegerichte modificaties in het genoom van Anopheles malariamuggen kunnen worden bereikt met behulp van het φC31-systeem . De beschreven modificaties omvatten zowel de integratie als de uitwisseling van transgene cassettes in het genoom van attP-dragende koppelingslijnen.

Site-Directed φC31-gemedieerde integratie en cassette-uitwisseling in Anopheles Vectors of Malaria

Micro-injectietechnieken zijn essentieel om exogene genen in het genoom van muggen te introduceren. Dit protocol verklaart een methode die door het James-laboratorium wordt gebruikt om DNA-constructies in Anopheles gambiae-embryo's te micro-injecteren om getransformeerde muggen te genereren.

Micro-injectie methode voor Anopheles gambiae embryo's

Dit protocol beschrijft het gebruik van optogenetica om het gedrag van de mug Aedes aegypti te begrijpen. Er worden methoden voor kweek, preparatie, assays en analyse gepresenteerd om de neuronale functie tijdens de aantrekking tot gastdieren en het bloedvoeden te beoordelen. Deze fundamentele technieken zullen neurale circuit- en gedragsstudies mogelijk maken van deze belangrijke vector voor menselijke ziekten.

Optogenetische analyse van het gedrag bij de mug Aedes aegypti

Leer het opfokken van Anopheles gambiae voor malariavectoronderzoek in een gecontroleerd insectarium. Deze methode toont levenscycli en omgevingsbeheersing voor laboratoriumstudies.

Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae)

Meer video's verkennen