Name: Toepassing van een NMDA-receptor Conductance in Rat middenhersenen dopaminerge neuronen Met behulp van de Dynamic clamp techniek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-21T15:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Leer de dynamische clamp-techniek toe te passen op dopaminerge neuronen in rattenhersenschijfjes om NMDA-receptor geleiding te bestuderen. Deze methode biedt precieze controle over neurale activiteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door MH084494 (CJL), en MH079276 en NS060658 (CAP).

1. Slice Voorbereiding <ol><li> Gesneden plakjes hersenen met behulp van een trillende microtoom. Wij bereid 240 micrometer horizontale middenhersenen segmenten van een isofluraan-anethetized Sprague-Dawley rat (Charles River Laboratories) met behulp van een trillende microtoom (Microm HM 650V) in overeenstemming met de Universiteit van Texas in San Antonio Institutional Animal Care en gebruik Comite. </li><li> Houd de plakken in een incubatiekamer totdat u klaar bent om op te nemen. We maken gebruik van een incubatie container verwarmd tot 32 ° C en gevuld met kunstmatige cerebrospinale vloeistof (aCSF, in mm): 126 NaCl, KCl 2,5, 1,25 NaH 2 PO 4, 4 MgCl 2, 2 CaCl2, 10 dextrose, 25 NaHCO 3, 1,3 ascorbinezuur, 2,4 natrium pyruvaat en 0,05 glutathion. </li></ol> 2. Elektrofysiologische opname <ol><li> Breng de slice om de intracellulaire opname tuig, waarin een kunstmatige cerebrospinale vloeistof (aCSF) bij 35 ° C wordt doorbloed. We gebruiken dezelfde aCSF als in 1.2, behalve dat 2 mM MgCl 2 werd gebruikt en glutathion was weggelaten. Voor horizontaal bereid plakjes, we meestal halveren de plak over de middellijn. </li><li> Visualiseer het doel neuron. We individuele substantia nigra dopaminerge neuronen gevisualiseerd met een gradiënt contrast imaging systeem. </li><li> Trek een elektrode met behulp van een elektronische elektrode trekker. We trekken elektroden met een fooi van 4-10 MΩ weerstand met behulp van een P97 Micropipet trekker (Sutter Instrument Company). </li><li> Vul een elektrode met de gewenste interne oplossing. We maken gebruik van een oplossing die (in mm): 138 K-gluconaat, 10 HEPES, 2 MgCl 2, 0,2 EGTA, 0,0001 CaCl 2, 4 Na-ATP, 0.4 Na-GTP. De interne oplossing werd ingesteld op een pH van 7,3 met behulp van 1M KOH en een osmolariteit van 270-275 mOsms. </li><li> Maak een gigaohm afdichting op de gewenste neuron. Breuk van de afdichting met afzuiging. Dit is een hele cel opname. Een Multiclamp 700B versterker werd gebruikt in onze configuratie. De versterker moet dan worden geplaatst in de huidige klem mode van de 'I = 0'. </li></ol> 3. Geleiding Toepassing met Dynamic klem <ol><li> RTXI (www.rtxi.org) werd uitgevoerd op de dynamische klem computer. Een op maat geschreven model met een NMDA-receptor werd in het geheugen geladen. De huidige te injecteren in de cel in real-time wordt berekend door de volgende vergelijking: I = NMDA-g NMDA * [1 / (1 ​​+ ([Mg] / 3,57) * e (-V m * 0,062))] * (V m - E NMDA), waar g NMDA is de gewenste geleiding (in ns; standaard ingesteld op 0 nS), [Mg] is de magnesium concentratie (ingesteld op 1,5 mM in ons voorbeeld hieronder), E NMDA is de omkering potentieel voor de NMDA-receptor (ingesteld op 0 mV), en V m is de membraanpotentiaal van de cel gemeten vanaf de versterker (in millivolt). </li><li> De output van de dynamische klem computer was aangesloten op de Command ingang van de versterker via een analoge-naar-digitaal converter. </li><li> De versterker werd geplaatst in de huidige stand van de klem 'IC'. </li><li> Vul uw gewenste NMDA receptor geleiding in RTXI (bijv. 40nS). Ziet u een driefase uitbarsting van actiepotentialen. Als alternatief kan een geleiding worden gegeven aan RTXI via een analoge uitgang (Figuur 1A, 'g (t)'). Een geschikte scaling factor moet worden gebruikt binnen RTXI om het signaal van volt naar Siemens om te zetten. </li></ol> 4. Representatieve resultaten Een succesvolle setup voor de toepassing van een geleiding met behulp van de dynamische klem is weergegeven in figuur 1A. Met behulp van deze opstelling hebben we een hele cel somatische opname van een dopaminerge neuron in de substantia nigra pars compacta. Dopaminerge cellen meestal spontaan brand bij lage tarieven met een pacemaker-achtig patroon. Een uitbarsting van actiepotentialen kunnen worden opgeroepen door fasisch toepassing van een NMDA-receptor geleiding met dynamische klem (Figuur 1B). <img src="/files/ftp_upload/2275/2275fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1: Toepassing van een NMDA-receptor geleiding met behulp van de dynamische clamp techniek. A. Hardware setup ter illustratie van de verbindingen tussen de intracellulaire opname rig en dynamische klem computer. B. Een uitbarsting van actiepotentialen wordt opgeroepen door de toepassing van een 40nS NMDA-receptor geleiding in een whole cell opname van een substantia nigra pars compacta dopaminerge neuronen.

<ol><li>Robinson, H. P., Kawai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+digitally+synthesized+synaptic+conductance+transients+to+measure+the+integrative+properties+of+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Injection of digitally synthesized synaptic conductance transients to measure the integrative properties of neurons.</a> J Neurosci Methods. 49, 157-165 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp%3A+artificial+conductances+in+biological+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp: artificial conductances in biological neurons.</a> Trends Neurosci. 16, 389-394 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+clamp%3A+computer-generated+conductances+in+real+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Dynamic clamp: computer-generated conductances in real neurons.</a> J Neurophysiol. 69, 992-995 (1993).</li>
<li>Prinz, A. A., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp comes of age.</a> Trends Neurosci. 27, 218-224 (2004).</li>
<li>Deister, C. A., Teagarden, M. A., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intrinsic+neuronal+oscillator+underlies+dopaminergic+neuron+bursting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">An intrinsic neuronal oscillator underlies dopaminergic neuron bursting.</a> J Neurosci. 29, 15888-15897 (2009).</li>
<li>Lobb, C. J., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+role+for+GABA+receptors+on+the+firing+pattern+of+midbrain+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A dynamic role for GABA receptors on the firing pattern of midbrain dopaminergic neurons.</a> J Neurophysiol. 104, 403-413 (2010).</li>
</ol>

De dynamische clamp techniek hier gedemonstreerd verbetering ten opzichte van de traditionele techniek van directe inspuiting huidige doordat de experimentator om de elektrische effecten van de activering van een receptor na te bootsen. In deze video, hebben we laten zien dat men de effecten toe te voegen van de activering van een NMDA-receptor op de spontane activiteit van de dopaminerge neuron, dat wil zeggen een uitbarsting van actiepotentialen worden opgewekt. Door de flexibiliteit van de hardware / software implementatie, kan een scala aan uitbreidingen worden gebruikt. Het teken van de geïnjecteerde stroom kan worden omgeschakeld van negatief naar positief, wat neerkomt op een scenario waarin de effecten van de geactiveerde receptor wordt verwijderd uit een neuron. Model neuronen, vertegenwoordigd in de vorm van een reeks van differentiaalvergelijkingen, kan ook numeriek worden opgelost en laat de onderzoeker om kleine netwerken te onderzoeken.

<table><tbody><tr><td>K-gluconaat watervrij</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; X 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethyleenglycol-bis(B-amin&amp;#8211;ethylether)-N,N,N&amp;rsquo;,N&amp;rsquo;-tetraazijnzuur</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgATP</td><td>Reagens</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaGTP</td><td>Reagens</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, watervrij</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Reagens</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CholCl</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ascorbinezuur</td><td>Reagens</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutathion</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX51WI microscoop (met 40x objectief)</td><td>Microscoop</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 A/D-omzetters</td><td>Apparatuur</td><td>Willekeurige leverancier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multiclamp 700B met CV-7B headstage</td><td>Apparatuur</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown micropipetpuller</td><td>Apparatuur</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfil spuitnaalden</td><td>Apparatuur</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Apparatuur</td><td>Siskiyou, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monitor</td><td>Apparatuur</td><td>Triview</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

toepassing van een nmda-receptor conductance in rat middenhersenen dopaminerge neuronen met behulp van de dynamic clamp techniek

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Neurowetenschappers onderzoek naar de functie van de hersenen door te onderzoeken hoe neuronen in de hersenen communiceren. Veel onderzoekers kijken naar veranderingen in de elektrische activiteit van een of meer neuronen in reactie op een experimenteel-gecontroleerde input. De elektrische activiteit van neuronen kan worden opgenomen in geïsoleerde hersenen plakjes met behulp van patch clamp technieken met glas micropipetten. Traditioneel, experimentatoren kunnen neuronale ingang na te bootsen door middel van directe injectie van stroom door de pipet, elektrische stimulatie van de andere cellen of de resterende axonale verbindingen in de slice, of farmacologische manipulatie door receptoren die zich op de neuronale membraan van de cel opgenomen. Gelijkstroom injectie heeft de voordelen van het passeren van een vooraf bepaalde stroomvorm met een hoge temporele precisie op de plaats van de opname (meestal de soma). Dit betekent echter niet verandert de weerstand van de neuronale membraan zoals ion kanalen geen fysiek worden geopend. Huidige injectie heeft meestal rechthoekige pulsen en dus niet het model van de kinetiek van ionkanalen. Tot slot kan de huidige injectie niet na te bootsen de chemische veranderingen in de cel die zich voordoet bij de opening van ionkanalen. Receptoren kunnen fysiek worden geactiveerd door elektrische of farmacologische stimulatie. De experimentator heeft een goede temporele precisie van de receptor activering met elektrische stimulatie van de slice. Echter, er is beperkte ruimtelijke nauwkeurigheid van de receptor activering en de precieze aard van wat wordt geactiveerd bij stimulatie is onbekend. Dit laatste probleem kan gedeeltelijk worden beperkt door specifieke farmacologische middelen. Helaas, het tijdsverloop van de activering van farmacologische middelen is meestal langzaam en de ruimtelijke precisie van inputs op de opgenomen cellen is onbekend. De dynamische clamp techniek kan een onderzoeker om de huidige instelling doorgegeven direct in de cel op basis van real-time feedback van de membraanpotentiaal van de cel (Robinson en Kawai 1993, Sharp et al., 1993a, b;. Voor het overzicht, zie Prinz et Al. 2004). Hierdoor kan een onderzoeker van de elektrische veranderingen die zich voordoen op de plaats van de opname na te bootsen in reactie op de activering van een receptor. Real-time veranderingen in de toegepaste stroom wordt bepaald door een wiskundige vergelijking geïmplementeerd in hardware. We hebben kort geleden heeft gebruikt de dynamische clamp techniek om de generatie van de uitbarstingen van actiepotentialen onderzoeken door fasisch activatie van NMDA-receptoren in de dopaminerge neuronen van de substantia nigra pars compacta (Deister et al., 2009;. Lobb et al., 2010.). In deze video, tonen we de procedures die nodig zijn om een ​​NMDA receptor geleiding toe te passen in een dopaminerge neuron.

In deze video laten we zien hoe een geleiding toe te passen in een dopaminerge neuron opgenomen in de whole cell configuratie in hersenen van de rat plakjes. Deze techniek heet de dynamische klem.

Toepassing van een NMDA-receptor Conductance in Rat middenhersenen dopaminerge neuronen Met behulp van de Dynamic clamp techniek

Neurowetenschappers bestuderen de functie van de hersenen door te onderzoeken hoe neuronen in de hersenen communiceren. Veel onderzoekers kijken naar veranderingen in de ...

Neurowetenschappers bestuderen de functie van de hersenen door te onderzoeken hoe neuronen in de hersenen communiceren. Hier worden veranderingen in de elektrische activiteit van een enkel neuron opgewekt door het toepassen van een experimenteel gecontroleerde conductantie met behulp van de dynamische clamp-techniek. Eerst worden dunne brain slices gesneden en bewaard in een incubatiekamer gevuld met kunstmatig cerebrospinaal vocht.Een plakje wordt vervolgens overgebracht naar een patchclamp-registratie-opstelling. Een neuron wordt geselecteerd en vervolgens gepatcht met een registratie-elektrode met behulp van een dynamische clamp-computer die is verbonden met de registratieversterker. Er wordt een NMDA-receptorconductantie in de cel aangebracht.De resulterende opnamen tonen een burst van actiepotentialen, wat suggereert dat activatie van NMDA-receptoren één cellulair mechanisme is waardoor dopaminerge neuronen bursts kunnen genereren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van huidige methoden, zoals directe stroominjectie of farmacologische behandeling, is dat we in staat zijn om nauwkeurig de effecten van de activatie van een experimenteel gedefinieerde receptor op de elektrische activiteit van een levend neuron te bepalen. Na het snel extraheren van de hersenen uit een geanestheseerde Bragg dolly rat werden horizontale hersensecties van 240 micrometer gesneden met behulp van een vibratiotom.Terwijl de coupes worden gesneden, gebruikt u een transferpipet om deze in een incubatiekamer van 32 °C te plaatsen, gevuld met kunstmatig cerebrospinaal vocht, totdat het tijd is om de registratie-experimenten uit te voeren. De opstelling voor intracellulaire registratie bestaat uit een microscoop met objectieven die zijn ingesteld voor gradiëntcontrastbeeldvorming, een monitor, een perfusiesysteem, een multi clamp 700 B-versterker, een analoog-digitaal-omzetter, een micromanipulator en een headstage. Een Mac Pro-computer draait de software voor gegevensacquisitie, Axo Graph X en multi clamp commander. Naast de opstelling voor intracellulaire registratie en de Mac Pro-computer bevindt zich een Sun Microsystems-computer die real-time Linux draait, samen met de bijbehorende analoog-digitaal-omzetter, die zal worden gebruikt voor de dynamische clamp-techniek.De opstelling voor intracellulaire registratie moet kunstmatig cerebrospinaal vocht perfunderen bij ongeveer 35 °C. Indien het te registreren coupes horizontaal is geprepareerd, gebruik dan een transferpipet om deze in een petrischaal met kunstmatig cerebrospinaal vocht te plaatsen en halveer de coupe langs de middellijn met een snijinstrument. Gebruik vervolgens een pipet om de coupe naar de opstelling voor intracellulaire registratie over te brengen om elektrofysiologische registraties uit te voeren.Visualiseer met het 40 x objectief het doelneuron; hier is een individueel dopaminerg neuron van de substantia nigra te zien. Let op het elliptisch gevormde soma met twee uitlopende dendrieten. Trek met een elektronische P 97 micropipet-puller elektroden met een tipweerstand van 4 tot 10 mega ohm.Vul vervolgens een elektrode met interne oplossing met behulp van een naald van een microfill-spuit. Plaats de gevulde elektrode in de halfcel, die is verbonden met de headstage van de versterker, middels een spuit die via een kort stukje slang aan de halfcel is gekoppeld. Oefen een kleine hoeveelheid positieve druk uit op de registratie-elektrode.Breng onder visuele begeleiding de elektrode naar het doelnervencel neer. Er zal een kuiltje zichtbaar worden op het oppervlak van de cel. Pas een kleine hoeveelheid negatieve druk toe om een giga-seal te creëren op de gewenste nervencel.Pas mondzuiging toe om de zegeling te verbreken. Dit vormt een whole-cell registratie. Nadat de zegeling is verbroken, gebruikt u de software-interface van de multi clamp commander om de versterker in de current clamp-modus te plaatsen, waarin geen stroom kan worden geïnjecteerd.Om een NMDA-conductantie in deze cel toe te passen, begint u met het opstarten van de RTXI-software op de dynamic clamp-computer. Laad vervolgens een op maat geschreven model met een NMDA-receptor in het geheugen. Zodra het model in het RTX-geheugen is geladen, bereken ik in realtime de stroom die in de cell moet worden geïnjecteerd met behulp van de hier getoonde vergelijking, waarbij G-N-M-D-A de gewenste conductantie is in nanosiemens, ingesteld op nul nanosiemens.In Semens is MG standaard de magnesiumconcentratie. E-N-M-D-A is het rustpotentiaal voor de NMDA-receptor, ingesteld op nul millivolt, en VM is het membraanpotentiaal van de cel, gemeten door de versterker in millivolt. Verbind nu, met de standaard BNC-kabel, de uitgang van de dynamic clamp-computer via een analoog-digitaal converter met de command-ingang van de versterker.Plaats de versterker in de standaard current clamp-modus ic met behulp van de Multi Clamp Commander-softwareinterface. De RTXI is zo ingesteld dat de gewenste conductantie GFT wordt ontvangen via een voltagesignaal van de Axo Graph X data-acquisitiesoftware. Hier voeren we een eenvoudig Axo Graph X-protocol uit waarbij een conductantiestap van 40 nano Siemens gedurende één seconde op de cel wordt toegepast.Met gebruik van de in deze video beschreven opstelling wordt een burst van actiepotentialen opgewekt in reactie op de conductancestap; er werd een whole-cell somatische registratie uitgevoerd van een dopaminerg neuron in de substantia nigra pars compacta. Dopaminerge cellen vuren doorgaans spontaan met lage frequenties in een pacemaker-achtig patroon. Een burst van actiepotentialen kan worden opgewekt door fasische toepassing van een NMDA-receptorconductantie met dynamic clamp.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een NMDA-geleiding kunt toepassen op een levend dopaminerg neuron in een geïsoleerde hersenplak. Deze techniek kan echter worden gebruikt voor elk celtype dat kan worden geregistreerd met standaard elektrofysiologische technieken. Op dezelfde manier kan de dynamic clamp worden uitgebreid om de elektrische effecten van een breed scala aan receptortypen na te bootsen.We hopen dat deze video nuttig is geweest om aan te tonen wat de dynamische clamp-techniek inhoudt en hoe wij deze in ons laboratorium gebruiken. Bedankt voor het kijken.

application-nmda-receptor-conductance-rat-midbrain-dopaminergic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De amperometrische techniek meet dopamine afgifte van een enkele cel door het detecteren van de stroom die door oxidatieve spontane dopamine oxidatie. Gelijktijdig spanning klem en amperometrie methodologie onthullen de mechanistische relatie tussen de totale "activiteit" van dopamine transporter en de regulerende rol van deze activiteit op de achterzijde transport van dopamine.

Single Cell Meting van dopamine-afgifte met gelijktijdige Voltage-klem en amperometrie

In situ patch clamp opnamen worden gebruikt voor elektrofysiologische karakterisatie van neuronen in intacte circuits. In de Drosophila genetische model patch clamping is moeilijk omdat de CNS is klein en omgeven door een robuuste mantel. Dit artikel beschrijft de procedure om de schede en schoon neuronen voor latere patch clamp opnamen te verwijderen.

Bereiding van<em&gt; Drosophila</em&gt; Centraal Neuronen voor<em&gt; In situ</em&gt; Patch clamping

This video demonstrates a technique for patch-clamp recording from the dendritic membrane surface. This helps to directly examine the electrical properties of dendrites and underlying voltage-gated ion channels in dopaminergic neurons.

Patch-Clamp Recordings from the Dendrite of a Dopaminergic Neuron in a Brain Slice

This video demonstrates the procedure for studying synaptic efficiency in the lateral entorhinal cortex (LEC) by optogenetically stimulating medial prefrontal cortex (mPFC) axons and recording the responses of pyramidal neurons in the LEC. This method combines patch-clamp recordings with synaptic activation by light stimulation to study synaptic plasticity.

Optogenetic Stimulation and Electrophysiological Recording of Synaptic Events in Rat Brain Slices

This video demonstrates the examination of sensory neuron excitability in the dorsal root ganglia using the patch clamp technique to measure the rheobase and membrane potential, analyzing the neurons' responses to incremental current injections.

Whole-Cell Patch Clamp Recordings on Intact Rat Dorsal Root Ganglia

Deze video artikel illustreert de set-up, de procedures te cellichamen patchen en hoe u dynamische clamp opnames implementeren van ganglioncellen in zijn geheel-mount muis retinae. Deze techniek maakt het onderzoek de exacte rol prikkelende en remmende synaptische inputs, en hun relatieve omvang en timing neuronale spiking.

Uitvoering Dynamic Klem met Synaptic en kunstmatige geleidingen Mouse in retinale ganglioncellen

Afferent sensorische neuronen geven sensorische informatie van de periferie naar het centrale zenuwstelsel door. Het identificeren van specifieke afferente neuronen zal helpen bij het begrijpen van hun fysiologie. We beschrijven een methode van retrograad labelen om afferente neuronen te identificeren, en bestuderen de spanningsafhankelijke ionenkanalen in deze neuronen met behulp van patch clamp elektrofysiologie en immunocytochemie.

Identificatie van specifieke Sensory Neuron Populaties voor Studie van Uitgedrukt Ion Channels

Hier beschreven is een procedure voor het verkrijgen van lange stukken huidige opname van een ionkanaal met de cel-bijgevoegde patch-clamp techniek. Deze methode maakt het mogelijk voor het observeren, in real time, het patroon van open-close kanaal conformaties dat de biologische signaal ten grondslag liggen. Deze gegevens informeren over kanaal woningen in ongestoord biologische membranen.

Eenkanaals-Cell bevestigd Patch-clamp-opname

Dit manuscript beschrijft hoe intacte dorsale wortelganglia voor patch clamp-opnames kunnen worden voorbereid. Deze voorbereiding behoudt de micro-omgeving voor neuronen en satellietgliacellen, waardoor de fenotypische en functionele veranderingen die worden gezien bij gebruik van gedissocieerde DRG-neuronen, worden vermeden.

Patch Clamp Recordings op intacte ganglia van volwassen ratten

Subcellulaire patch-clamp opnames bieden de mogelijkheid om de functionele eigenschappen van dendrieten te onderzoeken. Deze fijne structuren zijn echter niet gemakkelijk toegankelijk vanwege hun kleine diameter. Het hier beschreven protocol is bedoeld om het verzamelen van stabiele en betrouwbare opnames van de dendrieten van dopamine neuronen in slicen in vitro te vergemakkelijken.

Subcellulaire Patch-clamp opnamen in het somatodendritische Domein van nigrale Dopamine Neuronen

Dynamische klemelektrofysiologie kan causale verbanden leggen tussen neuronale vuurtekorten en disfunctie van ionkanalen. We beschrijven dynamische klemmethoden en protocollen in de cerebellaire Purkinje-neuronen van muizen, waarbij we nuttige bronnen en technische overwegingen opmerken. In een representatieve studie voegen we gemodelleerde natriumgeleiding toe aan Tsc1-/- Purkinje-neuronen om herhaald vuren te redden.

Dynamische klemmethoden om verminderde neuronale prikkelbaarheid geassocieerd met autisme te onderzoeken

Leer de dynamische clamp-techniek toe te passen op dopaminerge neuronen in rattenhersenschijfjes om NMDA-receptor geleiding te bestuderen. Deze methode biedt precieze controle over neurale activiteit.

Toepassing van een NMDA-receptor Conductance in Rat middenhersenen dopaminerge neuronen Met behulp van de Dynamic clamp techniek (Video) | JoVE Journal

Toepassing van een NMDA-receptor Conductance in Rat middenhersenen dopaminerge neuronen Met behulp van de Dynamic clamp techniek

Meer video's verkennen