Name: Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-18T18:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Leer de CASP-techniek voor het induceren van polymicrobiële abdominale sepsis bij muizen. Deze methode maakt titratie van mortaliteit via stentgrootte mogelijk en biedt een gestandaardiseerd model voor preklinisch sepsisonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs danken Nico Zantl, Klaus Pfeffer, en Bernhard Holzmann. Dit onderzoek werd ondersteund door de Deutsche Forschungsgemeinschaft, Bonn-Bad Godesberg, Duitsland (GRK-840; Vo 450/10-1).

1. Voorbereiding van de muis <ol><li> Verdoven van de muis door intraperitoneale injectie van de verdovende vloeistof (zie tabel van de reagentia) en plaats deze in rugligging. </li><li> De voeten van de muis moeten worden bevestigd met tape op de plaat naar een stabiele positie van het dier tijdens de operatie te verzekeren. </li></ol> 2. Werking <ol><li> Neem een ​​iv canule, die gewoonlijk is voor iv injectie wordt gebruikt bij mensen, en snijden de plastic buis circulair 2 mm van de punt. We maken gebruik van drie verschillende maten van canules aan de sterfte (BD Venflon 18GA (1,2 x45mm, 80 ml / min); 16GA (1,7 x45mm, 180 ml / min) 14GA (2,0 x45mm, 270 ml / min)) controle. </li><li> Na een grondige desinfectie van de buikhuid, incise hij langs de middellijn over 15mm. Open de peritoneale grot door incisie de buikspieren en het buikvlies langs de linea alba. </li><li> Identificeer de cecal paal en voorzichtig trek blindedarm, terminale ileum en colon ascendens uit de buik door het gebruik van wattenstaafjes. </li><li> 15 mm distaal van de Bauhin klep, moet men doorboren de wand van het colon ascendens met een 7 / 0 hechtdraad. Daarbij, beschadiging van de darm schepen moeten worden vermeden. De hechting is gefixeerd op de colon muur door twee chirurgische knopen. </li><li> Nu prik het colon ascendens met de voorbereide canule 1-2 mm proximaal van de 7 / 0 hechtdraad. Schuif de canule in de dikke darm tot aan de groef in de plastic buis ter hoogte van de serosa. </li><li> Zet de vrije uiteinden van de 7 / 0 hechtdraad rond de canule en plaats een twee-voudige knoop precies in de voorbereide groef van de kunststof buis. </li><li> Neem nu de naald van de 7 / 0 hechtdraad en steek het door de antimesenteric wand van de dikke darm. Achtereenvolgens twee chirurgische knopen moeten worden uitgevoerd om de plastic buisje bovendien vast te stellen in het colon muur. Snijd de hechting eindigt. </li><li> Haal de ijzeren gedeelte van de canule een beetje en snijd de plastic buis af te sluiten (1 mm) op de vaststelling 7 / 0 hechtdraad. </li><li> Nu moet men zorgvuldig ontlasting melk uit de blindedarm de richting van de dikke darm stent door het gebruik van wattenstaafjes tot een klein puntje van ontlasting verschijnt op de top van de stent. </li><li> Leg de darm in de peritoneale grot en performe vochttoediening door intraperitoneale toediening van 0,5 ml zoutoplossing. </li><li> Sluit het buikvlies met doorlopende hechting (4 / 0). </li><li> Sluit de huid met hechtingen enkelvoud (4 / 0). </li></ol> 3. Postoperatieve zorg <ol><li> Zet het dier terug in zijn kooi, die voldoende voedsel en water moet bevatten. Voor analgesie, dient intraperitoneale toediening van een krachtige pijnstillende stof (we gebruiken buprenorfine) regelmatig worden uitgevoerd. </li><li> Binnen de eerste twee dagen na de operatie, moet men de controle van de dieren om de 6 uur. </li></ol> 4. Sham CASP <ol><li> Voer de stappen 1,1-2,4. </li><li> Niet doorboren de dikke darm. Voer dan stappen 2,6-2,8. </li><li> Voer de stappen 2.10-3.2. </li></ol> 5. Caspi <ol><li> Voer CASP met behulp van een canule 14G volgende stappen 1.1-3.1 </li><li> 5u na CASP, moet men het dier weer te bedienen. Voor te bereiden en opnieuw verdoven met de muis hand van de stappen 1.1-1.2 </li><li> Open de hechtingen van de buikwand. </li><li> Trek het colon ascendens met ingelegde de stent. </li><li> Knip voorzichtig de hechtingen tot vaststelling van de stent en verwijder de stent. </li><li> Sluit het defect in de dikke darm met een enkele keren hechtingen (7 / 0). </li><li> Leg de darmen in de buikholte en twee keer spoelen de laatste met 10 ml zoutoplossing. </li><li> Sluit het buikvlies met doorlopende hechting (4 / 0). </li><li> Sluit de huid met hechtingen enkelvoud (4 / 0). </li><li> Volg de stappen 3,1-3,2 </li></ol> 6. Representatieve resultaten Binnen een paar uur na de operatie, de dieren klinische symptomen vertonen van een beginnende sepsis. Typische symptomen van de ziekte zijn mobiliteit, driegend jas verminderd, zweten, verminderde voedselinname, gewichtsverlies en verminderde ook uitje gedrag. Dieren ontwikkelen van een ernstige peritonitis met opeenvolgende systemische infectie meestal sterven binnen 48u. Afhankelijk van de geplaatste stent formaat, kan verschillende sterftecijfers worden gegenereerd. Een 14G stent resulteert in 100% mortaliteit, 16G geeft 70% sterfte en sterfte van 50% kan worden bereikt door middel van een 18G stent (figuur 1a). De Sham operatie resulteert in een overlevingspercentage van 100%. Meestal sterven alle dieren daartussen de eerste 48 uur na CASP. Zo kunnen alle dieren die leven op dit tijdstip worden beschouwd als overlevenden. Echter, we raden een extra observatieperiode van ten minste 72 uur voor zeldzame "late doden" na CASP te detecteren. De uitkomst van Caspi hangt af van de termijn na CASP wanneer de stent wordt verwijderd. Een interventie 3 uur na CASP resulteert in een overlevingspercentage van 45%. Als de stent is 5h verwijderd na CASP, slechts 10% vande dieren overleven de procedure. Een stent verwijderd na 9 uur resulteert in een mortaliteit van 100% (Figuur 1b). Sham Caspi leidt tot 100% overleving. Voor Caspi instellingen, adviseren wij een observatieperiode van 10 dagen, omdat er meestal dieren, die sterft later dan 48 uur na CASP. Macroscopische inspectie van de buik situs 24 uur na CASP laat de typische tekenen van peritonitis: oedeem, vasodilatatie, erythema darmwand, scherpe afbakening van de plaques van Peyer, darm verlamming, vrij vocht, en septische secretie (figuur 2). De systemische infectie kan worden aangetoond door bacteriologische analyse. 12 uur na CASP, enorme hoeveelheden bacteriën kan worden gedetecteerd in peritoneale lavage, bloed, lever, longen, milt en nieren. Kwalitatieve analyse van bacteriën onthult systemische infectie door de typische darmbacteriën zoals E. coli, Bacteroides species, Enterococcus species, enz. (figuur 3). CASP-geïnduceerde sepsis manifesteert in de lokale en systemische afgifte van pro-en anti-inflammatoire cytokines en chemokines. 12 uur na CASP, significante hoeveelheden TNF, IL-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 en anderen kan worden gemeten met behulp van ELISA in het bloed, maar ook in supernatanten van organen suspensies, zoals lever, longen, milt, nieren (afb. 4). Bij het vaststellen van CASP in uw laboratorium, overleving, bacteriologie en cytokine release moeten worden genomen als controle parameters voor een correcte uitvoering van CASP. Later kunnen deze parameters worden genomen als standaard read out-systeem voor alle experimentele instellingen. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1a: Survival na CASP. Overleving na een operatie CASP afhankelijk van de diameter van de geplaatste stent. 14G CASP resulteert in een sterftecijfer van 100%, 16G CASP resulteert in een 70% sterfte, en 18G CASP leidt tot 50% sterfte. Sham CASP wordt geassocieerd met een overleving van 100%. . n = 20/group B: Survival tarieven na Caspi een operatie afhankelijk van het tijdstip van de stent te verwijderen. Stent verwijdering op 3 uur na 14G CASP leidt tot een sterftecijfer van 55%. Stent verwijderen om 5u na 14G CASP resulteert in een mortaliteit van 90%, terwijl de stent verwijderd om 9u na 14G CASP resulteert in 100% sterfte. Sham Caspi (5u) resulteert in een overleving van 100%. n = 10/group (Sham Caspi, Caspi 9u), n = 20/group (3u Caspi, 5u Caspi). <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2: Abdominale situs 24 uur na CASP. De buikwand werd verwijderd 24 uur na 16G CASP of sham CASP, respectievelijk. De situs van de sham bediend muis ziet er fysiologische. In tegenstelling, CASP resulteert in oedeem, hyperemie, gedilateerd darmen, en de afbakening van plaques van Peyer demonstreren ernstige buikvliesontsteking. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3: Bacteriologie. CASP leidt tot een ernstige infectie van verschillende compartimenten en organen door darmbacteriën binnen 12 uur na de operatie. Bacteriële getallen worden gegeven als kolonievormende eenheden (kve) per ml. Bacterieculturen genomen van sham bediend muizen zijn volledig steriel (niet getoond). 16G CASP, n = 5/group. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 4"> Figuur 4: cytokinen. CASP triggers een systemische immuunreactie als verschillende cytokines en chemokines zijn detecteerbaar in plasma en ook in organen supernatants. De figuur laat als voorbeeld van de pro-inflammatoire cytokines tumor necrose factor (TNF) en interleukine-6 ​​(IL-6) en de overwegend anti-inflammatoire IL-10. 12h na CASP, kan opmerkelijke niveau worden gedetecteerd in plasma, lever, longen en milt. Echter, IL-10 niet worden gedetecteerd in de longen en de milt na CASP. Sham operatie leidt niet tot een cytokine secretie (niet getoond). 16G CASP, n = 5/group.

<ol><li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis%3A+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li>
<li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e, Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+role+for+CD4%2B+T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li>
<li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. J., Ulevitch, R., Elson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4%2FMD-2+monoclonal+antibody+therapy+affords+protection+in+experimental+models+of+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR4/MD-2 monoclonal antibody therapy affords protection in experimental models of septic shock.</a> J Immunol. 179, 6107-6114 (2007).</li>
<li>Entleutner, M., Traeger, T., Westerholt, A., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Maier, S., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+interleukin-12%2C+oxidative+burst%2C+and+iNOS+on+the+survival+of+murine+fecal+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Colorectal+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of interleukin-12, oxidative burst, and iNOS on the survival of murine fecal peritonitis.</a> Int J Colorectal Dis. 21, 64-70 (2006).</li>
<li>Kerschen, E. J., Fernandez, J. A., Cooley, B. C., Yang, X. V., Sood, R., Mosnier, L. O., Castellino, F. J., Mackman, N., Griffin, J. H., Weiler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotoxemia+and+sepsis+mortality+reduction+by+non-anticoagulant+activated+protein%5BTitle%5D)+AND+%22C.+J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Endotoxemia and sepsis mortality reduction by non-anticoagulant activated protein.</a> C. J Exp Med. 204, 2439-2448 (2007).</li>
<li>Kiank, C., Koerner, P., Kessler, W., Traeger, T., Maier, S., Heidecke, C. D., Schuett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+variations+in+inflammatory+responses+to+sepsis+and+stress+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Seasonal variations in inflammatory responses to sepsis and stress in mice.</a> Crit Care Med. 35, 2352-2358 (2007).</li>
<li>Lustig, M. K., Bac, V. H., Pavlovic, D., Maier, S., Grundling, M., Grisk, O., Wendt, M., Heidecke, C. D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat%3A+physiological%2C+microcirculatory+and+laboratory+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li>
<li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li>
<li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. van, Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury%2C+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li>
<li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li>
<li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li>
<li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis%2C+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li>
</ol>

CASP is een polymicrobiale model van abdominale sepsis dat de meeste criteria gepostuleerd voor een waardevolle sepsis model voldoet: CASP kan worden uitgevoerd in kleine dieren, is zeer reproduceerbaar, gemakkelijk te controleren door middel van standaard parameters, biedt een goede uitgelezen mogelijkheden, en nauw bootst klinische instellingen van abdominale sepsis. In een vergelijkende studie konden we aantonen dat CASP leidt tot peritonitis diffuse met vroege en gestaag toenemende systemische infecties en ontstekingen (systemic inflammatory response syndrome), terwijl cecal ligatie en prik (CLP) toont een model van de intra-abdominaal abces formatie met duurzame en kleine symptomen van systemische ontsteking (1). De techniek van Caspi biedt een mogelijkheid om het klinische verloop van peritonitis simuleren met opeenvolgende chirurgische richten sanitaire voorzieningen, dat is het belangrijkste therapeutische principe bij de mens. CASP kan worden toegepast voor alle vragen rondom sepsis of peritonitis en is daarom geschikt voor alle disciplines omgaan met sepsis onderzoek, bijvoorbeeld immunologie, farmacologie, chirurgie, intensive care geneeskunde, etc. Een selectie van publicaties over verschillende onderwerpen van sepsis het gebruik van de CASP model wordt hieronder gegeven (1-14). Bij het starten met CASP, dient men zich ervan bewust dat wat oefening nodig is om de operatie uit te voeren precies en snel. Chirurgische ervaring kan nuttig zijn, maar is niet vereist. Wij raden detectie van letality als een parameter voor de juiste uitvoering van CASP. Men moet beginnen met 14G CASP als een groot stent is gemakkelijker te hanteren dan een dunnere een. Een getrainde CASP chirurg in staat is om een ​​muis te bedienen binnen de 10 minuten. Voordat u begint met experimenten, moet u ervoor zorgen dat u zich in de buurt die periode. Als u enige ervaring met de chirurgische procedure opgedaan, moet u voert een survival kinetische om je vaardigheden te controleren. 14G CASP zou moeten resulteren in een 100% letaliteit. Beginners in ons laboratorium hebben om te bewijzen dat ze in staat zijn om een ​​100% letaliteit met 14G CASP genereren voordat ze beginnen met experimenten. Bovendien, bacteriologie en cytokine metingen moeten worden uitgevoerd om sepsis te controleren. Als u problemen hebt in het begin met de microchirurgische stappen van CASP, kan het gebruik van een vergrootglas of een chirurgische microscoop nuttig zijn. Maar in principe kan CASP goed worden uitgevoerd zonder deze hulpprogramma&#39;s. Voor de reproductie van onze overleving, is het absoluut noodzakelijk dat dezelfde materialen, met name de stents (BD Venflon, zie hieronder), worden gebruikt. Anders, aanzienlijke verschillen van de resultaten zijn mogelijk. Daarnaast stellen we voor dat er kan worden variaties van de resultaten, afhankelijk van, bijvoorbeeld, de eigenheid van de chirurg. Toch moet de invloed van factoren zoals die te klein zijn. Samengevat, CASP is een praktisch, eenvoudig, reproduceerbare en waardevolle sepsis model dat nauw bootst de klinische situatie van abdominale sepsis. Het is daarom geschikt voor alle terreinen van sepsis onderzoek.

<table><tbody><tr><td>Narcotische vloeistof</td><td></td><td></td><td>Meng 0,5 mL Rompun met 4,0 mL Ketanest en voeg 5,5 mL zoutoplossing (0,9%) toe. Injecteer voor volledige anesthesie intraperitoneaal 10 &amp;#x03BC;L/g lichaamsgewicht</td></tr><tr><td>Rompun (20 mg/ml Xylazine)</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketanest (25mg/ml Esketamine)</td><td>Pfizer Pharma GmbH</td><td>647028001E</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 18GA (1,2x45mm, 80ml/min)</td><td>BD Biosciences</td><td>391457</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 16GA (1,7x45mm, 180ml/min)</td><td>BD Biosciences</td><td>391455</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon 14GA (2,0x45mm, 270ml/min)</td><td>BD Biosciences</td><td>391456</td><td></td></tr><tr><td>Catgut Polyester 4/0 wit, niet-absorbeerbaar</td><td>Catgut GmbH</td><td>17218113</td><td></td></tr><tr><td>Mariderm zwart 7/0, niet-absorbeerbaar</td><td>Catgut GmbH</td><td>18104900</td><td></td></tr></tbody></table>

colon ascendens stent peritonitis (casp) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Sepsis blijft een hardnekkig probleem op de intensive care units over de hele wereld. Inzicht in de complexe mechanismen van sepsis is de voorwaarde voor de oprichting van nieuwe therapeutische benaderingen op dit gebied. Daarom zijn dierlijke modellen nodig die in staat zijn om nauw samen te bootsen de menselijke ziekte en ook voldoende omgaan met wetenschappelijke vragen. De Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) is een zeer gestandaardiseerd model voor de polymicrobiale abdominale sepsis bij knaagdieren. In dit model wordt een klein stent operatief ingebracht in de opgaande dikke darm van muizen of ratten leidt tot een continue lekkage van darmbacteriën in de buikholte. De procedure leidt tot peritonitis, systemische bacteriëmie, orgel infectie door darmbacteriën, en systemische maar ook lokale vrijlating van een aantal pro-en anti-inflammatoire cytokines. De dodelijkheid van CASP kan worden gecontroleerd door de diameter van de stent ingebracht. Een variant van dit model, de zogenaamde CASP met interventie (Caspi), verhoogt kans om de septische zich te verwijderen door een tweede operatie op basis van gemeenschappelijke procedures in de klinische praktijk. CASP is een makkelijk leerbaar en zeer reproduceerbaar model, dat nauw bootst het klinisch beloop van abdominale sepsis. Het leidt manier om te studeren op de vragen in verschillende wetenschappelijke domeinen zoals immunologie, infectiologie, of een operatie.

De Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) is een zeer gestandaardiseerd model voor de polymicrobiale abdominale sepsis bij knaagdieren. Dit artikel beschrijft de chirurgische ingreep van CASP. Het CASP model en zijn varianten kan de systematisch onderzoek van verschillende problemen met betrekking tot het onderwerp van sepsis.

Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Sepsis blijft een hardnekkig probleem op intensive care-afdelingen over de hele wereld. Inzicht in de complexe mechanismen van sepsis is de voorwaarde voor ...

Het algemene doel van deze procedure is het opwekken van abdominale sepsis door een stent in hetstijgende colon van een muis te plaatsen. Dit wordt bereikt door eerst hetstijgende colon voor te bereiden. Vervolgens wordt een aangepaste canule in het colon ingebracht en daarna vastgezet.Ten slotte wordt de stent verwijderd en wordt de colon teruggeplaatst in de peritoneale holte. Uiteindelijk kunnen resultaten worden behaald die sepsis aantonen door cytokines en bacteriële tellingen in het plasma te meten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals ligatie en punctie, is dat sepsis en mortaliteit kunnen worden getitreerd door de grootte van de ingebrachte stent.Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode problemen ondervinden, aangezien microsurgische technieken enige oefening vereisen. Totdat een perfecte uitvoering kan worden gegarandeerd, begint men met het anesthetiseren van de muis via een intraperitonele injectie van narcosevloeistof, waarna het dier in rugligging wordt geplaatst. De poten van de muis moeten met tape op de plaat worden vastgezet om een stabiele positie van het dier tijdens de operatie te waarborgen.Pas voor deze procedure een IV-canule aan, die gewoonlijk wordt gebruikt voor IV-injecties bij mensen, en snijd de plastic buisjes ervan uit. Maak na grondige desinfectie van de buikhuid van de muis een incisie van ongeveer 15 millimeter langs de middellijn, cirkelvormig twee millimeter vanaf de punt. Open de peritoneumholte door de buikspieren en het peritoneum langs de linea alba in te snijden.Identificeer de caecumpool en gebruik wattenstaafjes om het terminale ileum en het colon ascendens voorzichtig uit de buikholte te trekken. Doorboor de wand van het colon ascendens op 15 millimeters distaal van de ileocaecale klep met een 7-0 hechtdraad. Fixeer de hechtdraad aan de colonwand met twee chirurgische knopen.Puncteer het colon ascendens met een voorbereide canule, één tot twee millimeter proximaal van de 7-0 hechting. Voer de canule voorzichtig in het colon in totdat de groeve en de plastic buis op hetzelfde niveau liggen als de cirr.Sla de vrije uiteinden van de 7-0 hechtdraad rond de canule en plaats een dubbele knoop precies in de voorbereide groef van de plastic buis. Neem de naald van de 7-0 hechtdraad en hecht deze opeenvolgend door de antimesenteriale wand van het colon. Maak twee chirurgische knopen om de plastic buis en de colonwand extra te fixeren.Knip de uiteinden van de hechting af. Trek het ijzeren deel van de canule een klein stukje terug en knip de plastic buis vlakbij de fixerende 7.0 hechting af. Melk nu voorzichtig, met behulp van wattenstaafjes, de feces vanuit het caecum richting de colonstent tot er een klein beetje feces bovenop de stent verschijnt.Plaats de darmen terug in de peritoneale holte en voer vloeistofresuscitatie uit door intraperitonele toediening van 0,5 milliliters zoutoplossing. Sluit het peritoneum met een doorlopende hechting. Sluit de huid met enkelvoudige hechtingen ter analgesie.Indien nodig dient een krachtig analgeticum zoals buprenorfine subcutaan te worden toegediend; plaats het dier vervolgens terug in de kooi, waarin voedsel en water aanwezig moeten zijn. Vijf uur na de casp-procedure wordt de muis opnieuw voorbereid en geanestheseerd om de operatieve interventie bij het dier uit te voeren. Open de hechtingen van de bukwand.Trek de colon ascendens met de geplaatste stent voorzichtig naar buiten, knip de hechtingen die de stent fixeren door en verwijder de stent. Sluit het defect in het colon met enkelvoudige inverterende hechtingen. Plaats de darm terug in de buikholte en spoel de ladder twee keer met vijf milliliter zoutoplossing.Sluit het peritoneum met een continue hechting. Sluit de huid met enkelvoudige hechtingen voor analgesie. Dien regelmatig een krachtig analgeticum subcutaan toe.Plaats het dier binnen de eerste twee dagen na de operatie terug in de kooi met voldoende voedsel en water. Controleer de dieren elke zes uur; binnen enkele uren na de CASP-operatie vertonen de dieren klinische tekenen van beginnende sepsis. De overlevingspercentages na de CASP-chirurgie hangen af van de diameter van de ingebrachte stent. Een 14 gauge CASP resulteert in een mortaliteit van 100%, een 16 gauge CASP resulteert in 70% mortaliteit en een 18 gauge CASP leidt tot 50% mortaliteit.Sham CASP is geassocieerd met een overleving van 100%. De uitkomst van CASP hangt af van de tijdsduur. Na CASP, wanneer de stent wordt verwijderd, resulteert een interventie drie uur na CSP in een overlevingspercentage van 45%. Als de stent vijf uur na CSP wordt verwijderd, overleeft slechts 10% van de dieren de procedure. Een stentverwijdering na negen uur resulteert in een mortaliteit van 100%. Sham CASP leidt tot 100% overleving.Macroscopische inspectie van de buikholte 24 uur na CSP vertoont typische tekenen van peritonitis, oedeem, vasodilatatie, aritmie, scherpe demarcatie van purulente plekken op de darmwand, darmparalyse, vrij vocht en septische secreties. De systemische infectie kan worden aangetoond via bacteriologische analyse 12 uur na CSP. Massale hoeveelheden bacteriën kunnen worden aangetroffen in de peritoneale lavage, het bloed, de lever, de longen, de milt en de nieren.Door CSP geïnduceerde sepsis uit zich in zowel lokale als systemische afgifte van pro- en anti-inflammatoire cytokinen en chemokinen. 12 uur na CSP kunnen significante hoeveelheden TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 en andere via ELISA worden gemeten in het bloed, maar ook in supernatanten van organsuspensies zoals lever, long, milt en nier. Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in 10 minuten worden uitgevoerd mits deze correct wordt uitgevoerd.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe abdominale sepsis kan worden opgewekt met de modellen van SSP en SSP met interventie. Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

colon-ascendens-stent-peritonitis-casp-standardized-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De muis model van cecal ligatie en lek als een waardevol instrument voor de studie van de menselijke sepsis.

Cecal Ligatie Puncture Procedure

Experimentele sepsis kan worden geïnduceerd in muizen met de blindedarm ligatie en punctie (CLP) methode. Voor deze protocollen autofagie in vivo beoordelen in het kader van CLP-geïnduceerde sepsis worden hier gepresenteerd: Een protocol voor het gebruik autofagie (GFP)-LC3 muizen, en een protocol voor autophagosome vorming van elektronenmicroscopie.

Cecal ligatie en punctie-geïnduceerde Sepsis als een model om Autophagy studie bij muizen

Dit protocol beschrijft technieken om besmettelijke resultaten te meten aan de onderliggende secundaire ziekenhuisinfecties in de immunosuppressieve voorwaarde, eerst door de oprichting van cecal afbinding/punctie muizen dan uitdagend hen met intranasal infectie Maak een klinisch relevant model van immunosuppressie sepsis.

Ontwerp van Cecal afbinding en punctie en Intranasal infectie Dual model van sepsis-geïnduceerde immunosuppressie

Hier presenteren we een reproduceerbaar intensive care unit-georiënteerd endotoxine model bij ratten.

Een reproduceerbaar intensive care-unit-georiënteerd endotoxinemodel bij ratten

Dit protocol presenteert de operationele details van cecal ligatie en punctie (CLP) in een muismodel van sepsis. CLP is een van de meest gebruikte technieken om een diermodel van sepsis te maken. Daarom is een gestandaardiseerd CLP-protocol vereist voor het verkrijgen van betrouwbare onderzoeksresultaten.

Evaluatie van een betrouwbare biomarker in een cecale ligatie en punctie-geïnduceerd muismodel van sepsis

Dit protocol beschrijft de inductie van Gram-negatieve monobacteriële sepsis in een muismodelsysteem. Het model is nuttig bij het onderzoeken van de inflammatoire en dodelijke gastheerreacties tijdens sepsis.

Karakterisering van Salmonella Typhimurium-geïnduceerde septische peritonitis bij muizen

Om de drainage van patiënten met necrotiserende pancreatitis gecompliceerd door peripancreatisch abces te verbeteren en de mortaliteit van patiënten met necrotiserende pancreatitis te verminderen, hebben we een retroperitoneale benadering aangenomen voor peripancreatisch abcesdebridement en drainage door laparoscopie.

Retroperitoneaal laparoscopisch debridement en drainage voor pancreasabces

Dit protocol biedt de nodige maatregelen treffen en evalueren van neonatale sepsis in 7 dagen oude muizen.

Een gecontroleerde muismodel voor neonatale Sepsis van de Polymicrobial

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het gebruik van hoge frequentie echografie om luminale diameter, puls vermeerderingssnelheid, distensibiliteit en radiale belasting op een muis model van abdominale aorta aneurysma te meten.

Meting van pulse propagatiesnelheid, distensibiliteit en spanning in een abdominale aortaaneurysma muismodel

Infectie van neonatale muizen met bioluminescente E. coli O1:K1:H7 resulteert in een septische infectie met significante longontsteking en longpathologie. Hier beschrijven we procedures om neonatale sepsis te modelleren en verder te bestuderen met behulp van longitudinale intravitale beeldvorming parallel met de opsomsoming van systemische bacteriële lasten, ontstekingsprofilering en longsentopathologie.

Een neonatale beeldvorming model van gram-negatieve bacteriële sepsis

Leer de CASP-techniek voor het induceren van polymicrobiële abdominale sepsis bij muizen. Deze methode maakt titratie van mortaliteit via stentgrootte mogelijk en biedt een gestandaardiseerd model voor preklinisch sepsisonderzoek.

Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Meer video's verkennen