Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Het algemene doel van deze procedure is het opwekken van abdominale sepsis door een stent in hetstijgende colon van een muis te plaatsen. Dit wordt bereikt door eerst hetstijgende colon voor te bereiden. Vervolgens wordt een aangepaste canule in het colon ingebracht en daarna vastgezet.

Ten slotte wordt de stent verwijderd en wordt de colon teruggeplaatst in de peritoneale holte. Uiteindelijk kunnen resultaten worden behaald die sepsis aantonen door cytokines en bacteriële tellingen in het plasma te meten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals ligatie en punctie, is dat sepsis en mortaliteit kunnen worden getitreerd door de grootte van de ingebrachte stent.

Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode problemen ondervinden, aangezien microsurgische technieken enige oefening vereisen. Totdat een perfecte uitvoering kan worden gegarandeerd, begint men met het anesthetiseren van de muis via een intraperitonele injectie van narcosevloeistof, waarna het dier in rugligging wordt geplaatst. De poten van de muis moeten met tape op de plaat worden vastgezet om een stabiele positie van het dier tijdens de operatie te waarborgen.

Pas voor deze procedure een IV-canule aan, die gewoonlijk wordt gebruikt voor IV-injecties bij mensen, en snijd de plastic buisjes ervan uit. Maak na grondige desinfectie van de buikhuid van de muis een incisie van ongeveer 15 millimeter langs de middellijn, cirkelvormig twee millimeter vanaf de punt. Open de peritoneumholte door de buikspieren en het peritoneum langs de linea alba in te snijden.

Identificeer de caecumpool en gebruik wattenstaafjes om het terminale ileum en het colon ascendens voorzichtig uit de buikholte te trekken. Doorboor de wand van het colon ascendens op 15 millimeters distaal van de ileocaecale klep met een 7-0 hechtdraad. Fixeer de hechtdraad aan de colonwand met twee chirurgische knopen.

Puncteer het colon ascendens met een voorbereide canule, één tot twee millimeter proximaal van de 7-0 hechting. Voer de canule voorzichtig in het colon in totdat de groeve en de plastic buis op hetzelfde niveau liggen als de cirr.

Sla de vrije uiteinden van de 7-0 hechtdraad rond de canule en plaats een dubbele knoop precies in de voorbereide groef van de plastic buis. Neem de naald van de 7-0 hechtdraad en hecht deze opeenvolgend door de antimesenteriale wand van het colon. Maak twee chirurgische knopen om de plastic buis en de colonwand extra te fixeren.

Knip de uiteinden van de hechting af. Trek het ijzeren deel van de canule een klein stukje terug en knip de plastic buis vlakbij de fixerende 7.0 hechting af. Melk nu voorzichtig, met behulp van wattenstaafjes, de feces vanuit het caecum richting de colonstent tot er een klein beetje feces bovenop de stent verschijnt.

Plaats de darmen terug in de peritoneale holte en voer vloeistofresuscitatie uit door intraperitonele toediening van 0,5 milliliters zoutoplossing. Sluit het peritoneum met een doorlopende hechting. Sluit de huid met enkelvoudige hechtingen ter analgesie.

Indien nodig dient een krachtig analgeticum zoals buprenorfine subcutaan te worden toegediend; plaats het dier vervolgens terug in de kooi, waarin voedsel en water aanwezig moeten zijn. Vijf uur na de casp-procedure wordt de muis opnieuw voorbereid en geanestheseerd om de operatieve interventie bij het dier uit te voeren. Open de hechtingen van de bukwand.

Trek de colon ascendens met de geplaatste stent voorzichtig naar buiten, knip de hechtingen die de stent fixeren door en verwijder de stent. Sluit het defect in het colon met enkelvoudige inverterende hechtingen. Plaats de darm terug in de buikholte en spoel de ladder twee keer met vijf milliliter zoutoplossing.

Sluit het peritoneum met een continue hechting. Sluit de huid met enkelvoudige hechtingen voor analgesie. Dien regelmatig een krachtig analgeticum subcutaan toe.

Plaats het dier binnen de eerste twee dagen na de operatie terug in de kooi met voldoende voedsel en water. Controleer de dieren elke zes uur; binnen enkele uren na de CASP-operatie vertonen de dieren klinische tekenen van beginnende sepsis. De overlevingspercentages na de CASP-chirurgie hangen af van de diameter van de ingebrachte stent. Een 14 gauge CASP resulteert in een mortaliteit van 100%, een 16 gauge CASP resulteert in 70% mortaliteit en een 18 gauge CASP leidt tot 50% mortaliteit.

Sham CASP is geassocieerd met een overleving van 100%. De uitkomst van CASP hangt af van de tijdsduur. Na CASP, wanneer de stent wordt verwijderd, resulteert een interventie drie uur na CSP in een overlevingspercentage van 45%. Als de stent vijf uur na CSP wordt verwijderd, overleeft slechts 10% van de dieren de procedure. Een stentverwijdering na negen uur resulteert in een mortaliteit van 100%. Sham CASP leidt tot 100% overleving.

Macroscopische inspectie van de buikholte 24 uur na CSP vertoont typische tekenen van peritonitis, oedeem, vasodilatatie, aritmie, scherpe demarcatie van purulente plekken op de darmwand, darmparalyse, vrij vocht en septische secreties. De systemische infectie kan worden aangetoond via bacteriologische analyse 12 uur na CSP. Massale hoeveelheden bacteriën kunnen worden aangetroffen in de peritoneale lavage, het bloed, de lever, de longen, de milt en de nieren.

Door CSP geïnduceerde sepsis uit zich in zowel lokale als systemische afgifte van pro- en anti-inflammatoire cytokinen en chemokinen. 12 uur na CSP kunnen significante hoeveelheden TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 en andere via ELISA worden gemeten in het bloed, maar ook in supernatanten van organsuspensies zoals lever, long, milt en nier. Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in 10 minuten worden uitgevoerd mits deze correct wordt uitgevoerd.

Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe abdominale sepsis kan worden opgewekt met de modellen van SSP en SSP met interventie. Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.