Name: Isolatie van hersenen en ruggenmerg mononucleaire cellen met behulp van Percoll Verlopen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-02T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Leer een snelle methode voor het isoleren van mononucleaire cellen uit hersenen en ruggenmerg van muizen met Percoll-gradienten. Deze techniek maakt gedetailleerde immunofenotypering door flowcytometrie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Multiple Sclerosis Society (TA 3021-A1 / T naar AEC) en de Universiteit van Texas in San Antonio.

Bereiding van reagentia Bereid voorraad isotone Percoll (SIP), 4 ml per hersenen, door het mengen van 9 delen van Percoll met een deel van de 10X HBSS zonder Ca + + en Mg + +. Bereid SIP op 70% in 1X HBSS zonder Ca + + en Mg + +, 2 ml per hersenen gedispenseerd in een 15 ml polypropyleen conische buis. Opmerking: Het is aanbevolen dat Percoll moet worden gebruikt bij kamertemperatuur, als het gebruikt wordt koud, de cellen hebben de neiging te klonteren en cel-scheiding is minder efficiënt. Tissue verzamelen en homogenisering Verdoven muizen en perfuseren door middel van de linker ventrikel met ijs-koud 1X HBSS. Ontleden hersenen en het ruggenmerg en in stand houden in RPMI zonder fenol rood tot alle muizen worden opgeofferd. Plaats weefsels in 7 of 15 ml dounce homogenisator met 3 ml RPMI, voorzichtig een celsuspensie met een loose-fitting pestle (A maat), gevolgd door een Tigh-fitting pestle (B grootte) om verder te distantiëren van de weefsels. Vul het volume van de cel suspensies tot 7 ml met RPMI. Gradient opgezet Voeg 3 ml van SIP naar de celsuspensie tot een definitief 30% SIP maken Langzaam laag van de 10 ml celsuspensie op de top van de 70% SIP. Dit is de meest kritische fase van de procedure, gebruik van een pipet-steun zijn vastgesteld in de zwaartekracht wijze het vermijden van vermenging van de 70% en 30% oplossingen. Een heel duidelijke vlakke lijn moet duidelijk zichtbaar zijn op de 70% -30% kruising. Centrifugeer 30 min bij 500G 18 ° C. Zorg ervoor dat centrifuge stopt met minimale of geen rem, zodat de interfase niet wordt verstoord. Met behulp van een overdracht pipet, verwijder voorzichtig de laag van puin uit de top van de buis en verzamel 2.0-3.0 ml van de 70% -30% interfase in een schone conische buis met 8 ml 1X HBSS. Zorg ervoor dat de Percoll met de interfase wordt verdund ongeveer drie keer, een paar keer meng door inversie en centrifugre 7 minuten bij 500G bij 18 ° C. Resuspendeer pellet in 1 ml van cel verkleuring buffer en overbrengen naar een 1,5 ml buis en wassen nog een keer met behulp van een micro-centrifuge bij 10.000 G 1 min bij 4 ° C. Antilichaam vlekken Resuspendeer pellets in 50 ul van gezuiverde antimouse CD16/CD32 verdund 1:200 in cel verkleuring buffer aan het Fc-bindingsplaatsen te blokkeren. Incubeer met ijs gedurende 10 minuten. Tellen cellen met behulp van een hemocytometer. Voeg 50 ul van antilichamen cocktail mix en incubeer op ijs gedurende 30 minuten. Elk antilichaam moet eerst worden getitreerd tot een optimale verdunning te beoordelen. Gebruik de juiste fluorochroom combinaties gekozen op basis van de mogelijkheden van laser-en filter-instellingen van uw specifieke flowcytometer. Was de cellen in cel verkleuring buffer, opnieuw in suspensie pellets in 100-200 pi cel verkleuring buffer en analyseren onmiddellijk in de cytometer, of als alternatief cellen kunnen worden gesuspendeerd in 2% paraformaldehyde (PFA), opgesteld in PBS en opgeslagen over-nacht bij 4 ° C . Representatieve resultaten: Na het draaien van de hellingen, moet de 70% -30% interfase hebben een bepaalde witte halo, en kwantificering van de cellen hersteld van een naïeve muis moet opleveren 3-5 x10 5 cellen per muis (hersenen plus ruggenmerg). Ontstoken hersenen zou kunnen hebben, variërend aantallen van ontstekingscellen, afhankelijk van het CZS belediging of de ziekte model (figuur 1). <img src="/files/ftp_upload/2348/2348fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Isolatie van mononucleaire cellen, van naïef en EAE-hersenbarrière tijdens piek-en vaatziekten. Hersencellen suspensies werden gescheiden dan discontinu 70% / 30% Percoll gradiënten. Cellen gekleurd werden geïncubeerd met Fc-blok, gevolgd door anti-CD45 antilichamen voor 30 min op ijs. Cellen werden gespoeld in cel verkleuring buffer, en gefixeerd in 2% PFA eerdere verwerving in een LSR-II. CD45 intensiteit wordt gemeten in de Y-as, waar drie verschillende populaties worden gevisualiseerd. Verdere karakterisering van het immuunsysteem fenotype van CD45 hi infiltrerende cellen wordt uitgevoerd met behulp van extra antilichamen en vervolgens geanalyseerd door flow cytometrie.

<ol><li>Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+direct+characterization+of+resident+microglial+cells+from+the+normal+and+inflamed+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 7438-7442 (1991).</li>
<li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li>
<li>Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+adult+ramified+microglia+separated+from+other+central+nervous+system+macrophages+by+flow+cytometric+sorting.+Phenotypic+differences+defined+and+direct+ex+vivo+antigen+presentation+to+myelin+basic+protein-reactive+CD4%2B+T+cells+compared%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared.</a> J Immunol. 154, 4309-4321 (1995).</li>
<li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li>
<li>Juedes, A. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+and+infiltrating+central+nervous+system+APCs+regulate+the+emergence+and+resolution+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Resident and infiltrating central nervous system APCs regulate the emergence and resolution of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 166, 5168-5175 (2001).</li>
<li>Prinz, M., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tickets+to+the+brain%3A+Role+of+CCR2+and+CX%283%29CR1+in+myeloid+cell+entry+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Tickets to the brain: Role of CCR2 and CX(3)CR1 in myeloid cell entry in the CNS.</a> J Neuroimmunol. , (2010).</li>
<li>Mildner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2%2B+monocytes+only+under+defined+host+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat. Neurosci. 10, 1544-1553 (2007).</li>
<li>Djukic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+monocytes+engraft+in+the+brain%2C+differentiate+into+microglia+and+contribute+to+the+pathology+following+meningitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Circulating monocytes engraft in the brain, differentiate into microglia and contribute to the pathology following meningitis in mice.</a> Brain. 129, 2394-2403 (2006).</li>
</ol>

Analyses van celoppervlaktemerkers in het CZS leukocyten uit normale muis ontstoken weefsels zijn gebruikt voor enkele decennia 1-3. Isolatie protocollen zijn gebaseerd op de scheiding van microglia en leukocyten door de dichtheid centrifugeren 4. Hier beschrijven we een snelle en effectieve methode voor het isoleren van CNS leukocyten met behulp van discontinue Percoll gradiënten. Na isolatie van cellen, kleuring met verschillende antilichamen, zoals-maar niet beperkt tot-CD45, CD4, CD8, CD11b, CD...

Tissue homogenisering en verlopen <ul><li> Percoll (Amersham) </li><li> Balanced Salt 10X Hanks &#39;Solution, zonder Calcium en Magnesium (Gibco) </li><li> RPMI Medium 1640, zonder fenol rood (Gibco) </li><li> 7-ml of 15 ml Dounce Tissue Grinders (VWR) </li></ul> Flowcytometrie <ul><li> Cel Staining Buffer (Biolegend) </li><li> Gezuiverd Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Muis BD Fc Block), BD Pharmingen </li><li> Hemacytometer (Fisher) </li><li> Anti-muis CD45 (kloon 30-F11), CD4 (kloon RM4-5), CD19 (kloon 6D5), BioLegend </li><li> 10X fosfaat gebufferde fysiologische zoutoplossing, zonder Calcium en Magnesium (Thermo Scientific) </li><li> Paraformaldehyd (Sigma Aldrich) </li><li> Flowcytometrie-analyse uitgevoerd met een LSR II (BD Biosciences) </li></ul>

isolatie van hersenen en ruggenmerg mononucleaire cellen met behulp van percoll verlopen

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

Isolatie van immuuncellen die het centrale zenuwstelsel (CZS) tijdens infectie, trauma, auto-immuniteit of neurodegeneratie infiltreren, is het vaak nodig om hun fenotype en effector functies te definiëren. Histochemische benaderingen zijn wat belangrijk is voor de locatie van de infiltrerende cellen te bepalen en om de bijbehorende CNS pathologie analyseren. Echter, in-situ histochemie en immunofluorescentie kleuringstechnieken beperkt door het aantal antilichamen die gebruikt kunnen worden in een keer om immuun cel subtypen karakteriseren in een specifiek weefsel. Daarom, histologische benadering in combinatie met immuun-fenotypering door flowcytometrie zijn cruciaal voor het volledig karakteriseren van de samenstelling van de lokale CNS infiltratie. Dit protocol is gebaseerd op de scheiding van CNS cellulaire suspensies meer dan discontinous Percoll gradiënten. Het huidige artikel beschrijft een snelle protocol om efficiënt te isoleren mononucleaire cellen van hersenen en het ruggenmerg weefsels die effectief kan worden gebruikt voor de identificatie van verschillende immuun celpopulaties in een enkel monster door flowcytometrie.

Het huidige artikel beschrijft een snelle protocol om efficiënt te isoleren mononucleaire cellen van hersenen en het ruggenmerg weefsels die effectief kan worden gebruikt voor flowcytometrische analyses.

Isolatie van hersenen en ruggenmerg mononucleaire cellen met behulp van Percoll Verlopen

De isolatie van immuuncellen die het centrale zenuwstelsel (CZS) infiltreren tijdens infecties, trauma's, auto-immuniteit of neurodegeneratie, is vaak vereist ...

Immuuncellen infiltreren het centrale zenuwstelsel tijdens infecties, trauma, autoimmuniteit of neurodegeneratie. Hoewel histochemische benaderingen kunnen worden gebruikt om de locatie van de infiltrerende cellen te bepalen en de geassocieerde pathologie te analyseren, worden deze technieken beperkt door het aantal antilichamen dat gelijktijdig kan worden gebruikt. Hier wordt een methode getoond voor de snelle isolatie van mononucleaire cellen uit hersen- en ruggenmergweefsels, waarbij het geprepareerde weefsel eerst wordt gehomogeniseerd.Vervolgens wordt er een Percoll-gradiënt opgezet en worden, na centrifugatie, de mononucleaire cellen van de interface verzameld. Ten slotte worden de cellen gespoeld en gekleurd met antilichamen. Via flowcytometrie-analyse worden hematogene cellen en surveillancemicroglia onderscheiden, waarna hun relatieve proporties tijdens ziektestadia kunnen worden bepaald. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals een Aris-gradiënt of histochemie, is dat deze minder tijdrovend is.Hiermee kunt u meer weefsels tegelijkertijd verwerken. De gradiëntopstelling wordt gedemonstreerd door een technicus uit mijn laboratorium. Bereid de reagentia voor die nodig zijn voor dit protocol. Begin met vier milliliters isotonic perol stockoplossing, aangeduid als SIP, per brein.Om dit te doen, combineert u negen delen perol met één deel 10x HBSS zonder calcium en magnesium door mengen via inversie. Bereid vervolgens 70% per call door de bereide SIP te mengen met 1x HBSS zonder calcium en magnesium. Dispenseer daarna twee milliliter van de 70% per cole in een polypropyleen conische buis van 15 milliliter om weefsel te verzamelen.Plaats voor deze procedure de gedissekeerde hersenen en ruggenmergen van alle studiemuizen in bekerglazen met 10 milliliters RPMI op ijs. Draag het weefsel vervolgens over naar een homogenisator van zeven of 15 milliliter die drie milliliters eenmalig HBSS bevat. Maak met een lospassende stamper van maat B voorzichtig een celstuspensie en stap daarna over op een strakpassende stamper van maat B om de weefsels verder te dissociëren.Zodra het weefsel is gehomogeniseerd, voegt u RPMI of één keer HBSS toe tot een eindvolume van zeven milliliter en gaat u over tot het opzetten van de gradiënt om de PERCOCO-gradiënt te maken. Begin met het toevoegen van drie milliliter SIP aan de cel-suspensie tot een uiteindelijke PERCOCO-concentratie van 30%. Houd er rekening mee dat de Percoll op kamertemperatuur gebruikt moet worden. Als dit koud wordt gebruikt, hebben de cellen de neiging om te klonteren en is de celseparatie minder efficiënt.Breng vervolgens, met behulp van de pipetteerhulp in de zwaartekrachtmodus, de 10 milliliter celсусpensie langzaam in lagen aan bovenop de 70% SIP. Vermijd menging van de 70% en 30% oplossingen. Dit is de meest kritische stap van de procedure.Er moet een zeer duidelijke vlakke lijn zichtbaar zijn bij de overgang van 70 naar 30%. Over het algemeen zullen personen die nog niet bekend zijn met deze methode moeite hebben, omdat de derde oplossing en de 70%-oplossing tijdens het laagjes maken zullen mengen. Volgende stap, om de interface te stabiliseren: centrifugeer 30 minuten bij 500 Gs op 18 graden Celsius.Zorg ervoor dat de centrifuge stopt met een minimale of geen remming, zodat de interface niet wordt verstoord. Na het centrifugeren van de gradiënten moet er een dikke en viskeuze laag debris aan de bovenkant van de buis ontstaan. De volgende laag is de geelachtige 30% percore-laag, die soms debris bevat.Vervolgens volgt de interface tussen de 70% en 30% lagen, die een duidelijk witte halo moet vertonen en de mononucleaire cellen bevat. Ten slotte bevindt zich onderaan de buis de heldere 70% Percoll-laag. Als er geen interface zichtbaar is, zal de celopbrengst waarschijnlijk zeer laag zijn, waardoor verdere analyse extreem moeilijk wordt.Daarom kunnen op dat moment verse celsuspensies nodig zijn om contaminatie te verminderen. Verwijder voorzichtig de laag debris van de bovenkant van de buis en gooi deze weg. Gebruik vervolgens een plastic pipet om door de bovenste 30%-laag te gaan, verzamel twee tot drie milliliters van de 70/30-interfase en breng dit over naar een schone conische buis met acht milliliters 1x HBSS.Meng de verdunde interfaces een paar keer door inversie en centrifugeer vervolgens zeven minuten bij 500 GS bij 18 °C. Verwijder na het centrifugeren de supernatant en resuspendeer het pellet. Breng de celсусpensie over in een buisje van 1,5 ml met één milliliter celkleuringsbuffer en was deze nog één keer.Centrifuge één minuut bij 10.000 ×g bij vier graden Celsius voordat u overgaat tot antilichaamkleuring. Resuspendeer de pellets in 50 µL gezuiverde anti-US CD 16, CD 32, verdund 1:200 in celkleuringsbuffer om de FC-bindingsplaatsen te blokkeren. Zoals bij elke kleuringsprocedure is het essentieel dat alle antilichamen adequaat worden getitreerd. Incubeer 10 minuten op ijs. Verwijder tijdens de incubatie twee tot vijf µL cellen en tel deze met een hemocytometer.De gecombineerde weefsels van de naïeve hersenen en het ruggenmerg zouden ongeveer drie tot vijf keer 10^5 cellen per muis moeten opleveren. Ontstoken hersenen zullen variërende aantallen ontstekingscellen bevatten, afhankelijk van het tijdstip van afname en het ziektemodel. Voeg na de incubatie met CD 16 en CD 32 50 µL van een immuuncelspecifieke antilichaamcocktailmix toe. De mix die in dit voorbeeld wordt gebruikt, bevat antilichamen tegen CD 45, CD 4 en CD 19; incubeer dit gedurende 30 minuten op ijs.Belangrijk is dat elk antilichaam eerst getitreerd moet worden. Om de optimale verdunning te bepalen, gebruikt u geschikte fluorochroomcombinaties die zijn gekozen op basis van de mogelijkheden van de laser- en filterinstellingen van uw specifieke flowcytometer. Was de cellen na het kleuren in celkleuringsbuffer door één milliliter celkleuringsbuffer toe te voegen en ze één minuut te centrifugeren.Centrifuge bij 10.000 Gs na het centrifugeren, verwijder de bovenzit en resuspendeer de pellets in 100 tot 200 µL celkleuringsbuffer voor onmiddellijke flowcytometrische analyse of voor latere analyse. Resuspendeer de cellen in 2% paraformaldehyde bereid in PBS en bewaar deze overnight bij vier °C. Hier worden mononucleaire cellen getoond die zijn verkregen en geïncubeerd met FC-block, gevolgd door anti-CD45, CD4 en CD19 antilichamen.In overeenstemming met het gedemonstreerde protocol scheidt CD 45-kleuring via flowcytometrie CD 45-hoge hematogene cellen effectief van CD 45-dim surveillancemicroglia. Deze figuur vergelijkt cellen geïsoleerd uit een naïef brein en een ontstoken brein van een muis bij wie experimentele auto-immuunencefalomyelitis is geïnduceerd. De CD 45 APC-intensiteit wordt op de Y-as weergegeven, waarbij drie duidelijk verschillende populaties zichtbaar zijn in het naïeve brein.Er worden zeer weinig CD 45-high cellen gedetecteerd. Meestal minder dan 2% van de totale geïsoleerde populatie. In vergelijking hiermee vertonen hersenen van EAE-beïnvloede muizen een massale instroom van gerekruteerde bloedcellen in de hersenen.De toevoeging van andere celoppervlaktemarkers zoals CD 11 b, CD 4, CD 8, enzovoort, maakt verdere karakterisering van de CD 45 high populatie mogelijk. Zodra de techniek beheerst is, kan deze in drie tot vier uur worden uitgevoerd indien deze correct wordt uitgevoerd. Tijdens deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat histologische benaderingen in combinatie met immuunfenotypering via flowcytometrie essentieel zijn om de samenstelling van de inflammatoire infiltraten in het CZS volledig te karakteriseren.

isolation-brain-spinal-cord-mononuclear-cells-using-percoll

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

In deze video laten we zien hoe de mononucleaire cellen van het centrale zenuwstelsel van ratten met experimentele auto-immune encephalomyelitis isoleren.

Isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE

Hier presenteren wij een methode om te isoleren en cultuur cerebellaire granule neuron progenitor cellen en cerebellaire korrel neuronen van postnatale muis.

Isolatie en Cultuur van Post-Natal Mouse Cerebellaire Korrel Neuron progenitor cellen en Neuronen

Een snelle methode om te infiltreren leukocyten te verkrijgen van de muis hersenen wordt beschreven. Deze methode maakt gebruik van een continue en discontinue gradiënt Percoll Ficoll gradiënt te selecteren en te zuiveren van de leukocyten-verrijkte laag. Geïsoleerde leukocyten kan dan worden gekenmerkt door flowcytometrische metingen.

Isolatie van Brain-infiltrerende leukocyten

In this video, we perform the isolation of mononuclear cells from a mouse’s brain using density gradient centrifugation. The isolated mononuclear cell suspension can be used for further downstream analysis.

Mononuclear Cell Isolation from Mouse Brain: A Density Gradient Centrifugation Technique to Isolate Brain Resident Mononuclear Cells

Source: Eldeiry, M. et al. Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice. J. Vis. Exp. (2017)In this video, we describe a step-by-step protocol for isolating spinal cord neurons from a neonatal mouse for in vitro studies.

Spinal Cord Neuron Isolation: A Density Gradient Procedure to Isolate Neonatal Spinal Cord Neurons for In Vitro Studies

The video demonstrates the isolation of tumor-infiltrating peripheral blood mononuclear cells from a mouse brain using mechanical dissociation and enzymatic digestion. This is followed by density gradient centrifugation to collect the immune cells for further analysis.

Isolating Tumor-Infiltrating Immune Cells from a Murine Brain

The video demonstrates the preparation of a single-cell suspension of immune cells from a murine brain tissue. It involves enzymatic digestion to release cells from the brain tissue, followed by density gradient centrifugation to isolate the immune cells based on their densities to obtain the single-cell suspension.

Preparing a Single-Cell Suspension of Immune Cells from Murine Brain Tissue

This video demonstrates a technique for isolating and culturing primary mixed glial cells from adult mouse spinal cord tissue. The protocol involves enzymatic digestion of the tissue, followed by the removal of broken cell membranes and myelin debris to obtain a single-cell population. The cells are then cultured in media optimized for mixed glial cell growth.

Establishing Primary Mixed Glial Cell Cultures from a Mouse Spinal Cord

Een protocol voor de isolatie van primaire microglia vanuit lymfkliertest brains wordt gepresenteerd. Deze techniek helpt bij het bevorderen van het huidige begrip van neurologische aandoeningen. Dichtheid kleurovergang centrifugeren en magnetische scheiding worden gecombineerd om voldoende opbrengst van een zeer zuivere monster. Voorts schetsen we de stappen voor de karakterisering van microglia.

Karakterisering en isolatie van de primaire Microglia muis door dichtheid kleurovergang centrifugeren

Dit artikel presenteert twee geoptimaliseerde protocollen voor het onderzoeken van residente en perifeer afgeleide immuuncellen in het centrale zenuwstelsel, waaronder de hersenen, het ruggenmerg en de hersenvliezen. Elk van deze protocollen helpt bij het vaststellen van de functie en samenstelling van de cellen die deze compartimenten bezetten onder steady state en ontstekingsomstandigheden.

Isoleren van weefsels van het centrale zenuwstelsel en bijbehorende hersenvliezen voor de downstream-analyse van immuuncellen

Tot op heden zijn protocollen voor de gelijktijdige isolatie van alle belangrijke celtypen van het centrale zenuwstelsel uit dezelfde muis een onvervulde vraag. Het protocol toont een procedure die toepasbaar is bij naïeve en experimentele auto-immuun encefalomyelitis-muizen om complexe cellulaire netwerken tijdens neuro-inflammatie te onderzoeken en tegelijkertijd het vereiste aantal muizen te verminderen.

Gelijktijdige isolatie van de belangrijkste celtypen van het centrale zenuwstelsel van volwassen auto-immuun encefalomyelitis-muizen

Leer een snelle methode voor het isoleren van mononucleaire cellen uit hersenen en ruggenmerg van muizen met Percoll-gradienten. Deze techniek maakt gedetailleerde immunofenotypering door flowcytometrie mogelijk.

Isolatie van hersenen en ruggenmerg mononucleaire cellen met behulp van Percoll Verlopen

Meer video's verkennen