Name: De cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun Poly-L-lactide Nanovezel Steigers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-15T16:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 3 s
Description: Leer de cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen op electrospun nanovezelsteigers voor zenuwregeneratieonderzoek. Deze methode gebruikt embryonale ratneuronen en immunocytochemie om groeirichting te visualiseren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NIH K08 EB003996

1. Poly-L-melkzuur (PLLA) spinoplossing <ol><li> Los 0,4 g PLLA in 9 ml chloroform door roeren op een laag vuur. </li><li> Voeg 1 mL dimethylformamide aan de oplossing, waardoor de uiteindelijke concentratie van de oplossing tot 4% PLLA (w / v) in chloroform: DMF 09:01 (v / v). </li><li> Plaats de oplossing in een polypropyleen of glazen injectiespuit met een stompe 23ga metalen tip. </li></ol> 2. Spinning Voorbereiding van de ondergrond een <ol><li> Maak een 8% (w / v) oplossing van 85:15 PLGA (poly-melkzuur-co-glycolzuur) in chloroform door te roeren op een laag vuur. </li><li> Vacht schoon glas dekglaasjes in PLGA door het bedekken van het oppervlak van elke dekglas met de PLGA oplossing. Laat de PLGA om te drogen op een dunne film (ca. 30 min). </li></ol> 3. Electrospinning 2 <ol><li> Secure PLGA gecoat glas dekglaasjes naar de collector met geleidende carbon tape. Voor uitgelijnd vezels, de collector is een motor aangedreven wiel. Voor willekeurige vezels, de collector is een stationaire plaat. </li><li> Plaats spuit in de pomp met de tip 20 cm van de collector wiel. Zet de pomp tot ongeveer 2 ml / uur en bij gebruik van een wiel, zet de motor tot 300-400 RPM. Indien mogelijk, toe te passen een -2 kV DC bias naar de collector en +15 kV op metalen tip. Bij het ontbreken van toegang tot een bipolaire voeding, grond de verzamelaar. </li><li> Vezels straal van de spuit en verzamel op de draaiende wiel. Blijven draaien totdat de gewenste dichtheid van de vezels wordt verkregen. Swipe de metalen tip met een papieren handdoek aangebracht op een niet-geleidende staaf regelmatig om verstopping te voorkomen aan het uiteinde. </li></ol> 4. Moating een <ol><li> Na de spinnen, 'gracht' van de electrospun monsters door pipetteren een lijn van PLGA rond de perimeter van het dekglas. Laat de PLGA om te drogen. Dit houdt de uitlijning van de vezels tijdens de cultuur. </li></ol> 5. Eiwit Coating <ol><li> Electrospun vezels en glas controles moeten worden gecoat in eiwit voorafgaand aan de celcultuur. Bedek de substraten in een proteïne-oplossing voor ten minste een uur en dan aspireren overtollige oplossing en ga aanzuigen totdat de ondergrond droog zijn. Mogelijke eiwit oplossingen omvatten: PLL (poly-L-lysine) (100 ug / ml), laminine (25 ug / ml) of met fibronectine (50 ug / ml). Als PLL wordt gebruikt, moet substraten worden gespoeld in steriel water en gedroogd twee keer na de eerste coating. </li></ol> 6. Verkrijgen E15 Rat embryo's 3 * Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de NIH Gids voor Zorg en gebruik van proefdieren, zoals goedgekeurd door de Universiteit van Michigan Comite voor gebruik en verzorging van dieren. <ol><li> Voorbereiding: Controleer of het dier zwanger is. Dooi 3 ml trypsine, 3 ml FBS en warm een ​​fles L15. Brand polish een Pasteur pipet. Desinfecteer alle chirurgische instrumenten in 70% ethanol gedurende 30 minuten. </li><li> Voor te bereiden en warm plating media (zie tabel 1). </li><li> Euthanasie: Voer een IP-injectie van ketamine / xylazine. Wacht 10-15 minuten en controleer of het ontbreken van het hoornvlies en pedaal terugtrekking reflexen. Zodra reflexen zijn afwezig, voert een IC injectie van pentobarbital (FatalPlus). </li><li> Tent de huid van de buik. Gesneden door de huid en de spieren lagen om de buikholte bloot te leggen. Ga naar de baarmoeder en los het op de baarmoederhals en eierstokken. </li><li> Verwijder het embryo uit de baarmoeder met een schaar en onmiddellijk plaats ze in warm L15. (Al de volgende procedures zijn afgerond onder een dissectiemicroscoop en embryo's en ontleed snoeren moeten worden ondergedompeld in een warm L15 ten alle tijden.) Onthoofden van de embryo's door het sluiten van een tang rond de kin en onder de occipitale bot van de schedel. </li></ol> 7. Dissection 3 <ol><li> Plaats de embryo aan een kant. Bescherm het ruggenmerg met een set van de tang tijdens het gebruik van de andere set weg te halen ledematen en buikorganen. </li><li> Draai het embryo en houd hem vast met een set van de tang. Snip langs de lengte van het embryo, vanaf de nek tot de staart, totdat het hele koord wordt blootgesteld. </li><li> Pak het uiteinde van het snoer en trek het over zichzelf naar de staart te verwijderen. Het koord trekt gratis met membraan en achterwortelganglia (DRG) bijgevoegd. </li><li> Als DRG explant of losgekoppeld sensorische neuron cultuur moet worden uitgevoerd, knip de DRG uit het snoer en overbrengen naar een nieuw gerecht van warm L15. <ol><li> Voor de DRG explantatie cultuur, gaat u naar 10,2 stap </li><li> Voor de gescheiden sensorische neuron cultuur, ga dan naar stap 9 </li><li> Voor motorneuron cultuur, zal de DRG worden verwijderd met het membraan in stap 7.5 </li></ol></li><li> Verwijder het membraan van het ruggenmerg door het vast te pakken aan de bovenkant van het snoer en de peeling het naar beneden, vergelijkbaar met het verwijderen van een lange sok. Herhaal dit voor alle embryo's en dan hak de touwen in kleine (2-3 mm) stukken. </li></ol><pclass motor neuron verwerking>5,6,7 <ol><li> Giet de gehakte snoeren en L15 in een conische en de spin bij 1000 rpm gedurende 2-3 min om pellet de stukken. </li><li> Giet het supernatant en voeg 3 ml van trypsine aan het ingehulde koorden. Incubeer in een 37 ° C waterbad gedurende 20 minuten. </li><li> Voeg 3 ml FBS om conische en spin bij 1000 rpm gedurende 2-3 minuten opnieuw pellet. </li><li> Giet het supernatant en de vacht van een brand gepolijst Pasteur pipet met FBS. </li><li> Voeg een Pasteur pipet vol met L15 de conische en dan zachtjes vermaal totdat de oplossing homogeen is zonder zichtbare bosjes. Te vermijden bubbels. </li><li> Bereid een 9% oplossing van Optiprep in L15. Bereid een buisje met 3 ml van de Optiprep oplossing voor elke twee embryo's (als er een oneven aantal embryo's, een stijging van rond). </li><li> Laat de gehomogeniseerde oplossing op de Optiprep oplossing, het verdelen van het gelijkmatig onder alle buizen. Spin de buizen bij 2000 rpm gedurende 15 minuten. </li><li> Zorgvuldig verzamelen top 2 ml van elk buisje en zwembad in een 50 mL conisch. Vul de conische met L15 en draaien op 1000 rpm gedurende 5 minuten aan de cellen van Optiprep spoelen. </li><li> Giet het supernatant en resuspendeer de cellen in een kleine hoeveelheid in de platen media (250-500 pi). Tel de cellen met behulp van trypan blauw uitsluiting aan levende cellen te identificeren. Ga naar 10,1 stap </li></ol> 9. Sensory Neuron (SN) Verwerking 7 <ol><li> Giet de DRG verwijderd uit het ruggenmerg en de L15 in een conische buis en draaien op 1000 RPM gedurende 2-3 min om pellet de stukken. </li><li> Giet het supernatant en voeg 3 ml van trypsine aan het ingehulde DRG. Incubeer in een 37 ° C waterbad gedurende 10 minuten. </li><li> Voeg 3 ml FBS om conische en spin bij 1000 rpm gedurende 2-3 minuten opnieuw pellet. </li><li> Giet het supernatant en de vacht van een brand gepolijst Pasteur pipet met FBS. </li><li> Voeg een Pasteur pipet vol met L15 de conische en dan zachtjes vermaal totdat de oplossing homogeen is zonder zichtbare bosjes. Te vermijden bubbels. </li><li> Spin de homogenaat bij 1000 rpm gedurende 5 minuten. Giet het supernatant en resuspendeer de cellen in een kleine hoeveelheid van SN plating media (250-500 pi). Tel de cellen met behulp van trypan blauw uitsluiting aan levende cellen te identificeren. Doorgaan met 10,1 stap </li></ol> 10. Plating en Cultuur <ol><li> Voor gedissocieerd SN of MN cultuur: <ol><li> Bedek de ondergrond met een paar druppels van de media en voeg dan een geschikt volume van de celsuspensie. Gescheiden cellen moet worden uitgeplaat op een lage dichtheid (25-50 cellen / mm 2). Laat de cellen gedurende ten minste een uur houden voor overstromingen van de putten met de media. </li></ol></li><li> Voor de DRG explantatie cultuur: <ol><li> Bedek de ondergrond met een paar druppels van de media en voeg DRG aan de media. Schik de DRG, zodat ze gelijkmatig verdeeld over de ondergrond (ongeveer 4 DRG past op een 22x22 mm dekglas). Laat de DRG gedurende ten minste vier uur voordat u zich overstromingen van de putten met de media. </li></ol></li><li> Culturen kan worden gehandhaafd tot 4 dagen zonder media te veranderen. Voor langere culturen, moet half media veranderingen worden gedaan met diervoeder media. Feed media is het dezelfde samenstelling heeft als beplating media minus de L-glutamine. </li></ol> 11. Immunocytochemie 1,5,8 <ol><li> Bevestiging cellen: Zuig media en te vervangen door warm 4% PFA (paraformaldehyde) gedurende 30 minuten. Vervolgens voert 3X 5 min 1x PBS wasbeurten. </li><li> Blokkeren / permeabilisatie: Bereid block / perm-oplossing (1,25% bovine serum albumine in 1X PBS, 0,05% Triton X-100 en 2,0% gewone geit serum). Aspireren PBS en toe te passen blokkeren / permanenten oplossing om monsters gedurende 30 minuten. Vervolgens voert 1X 5 min 1x PBS wasbeurten. </li><li> Primair antilichaam: Bereid primaire antilichaam werkende oplossing (10% normaal geit serum, 1,25% bovine serum albumine, 0,1% Na azide, 0,05% Triton X-100 en tot 10 ml met 1x PBS). Voeg de juiste hoeveelheid primaire antilichaam (zie tabel 2). Lijn een aantal gerechten met parafilm. Plaats een 200μl kraal van de primaire antistof oplossing op de parafilm voor elke ondergrond. Omkeren van de substraten, drijvende hen cel naar beneden op het primaire antilichaam werkende oplossing 's nachts (als de kamer is voorzien van airconditioning of bijzonder droog is, kan een stukje van het water verzadigd papier worden toegevoegd aan een hoek van de schotel om verdamping van de werkoplossing te voorkomen) . </li><li> Secundair antilichaam: Verwijder de substraten van de primaire (de werkende oplossing kan worden verzameld, opgeslagen bij 4 ° C en hergebruikt) en het uitvoeren van 2X 5 min 1x PBS wasbeurten. Van toepassing zijn 200 ul secundair antilichaam verdund 1:200 in PBS (ook omgekeerd op parafilm gevoerd schotel) voor 4 uur. </li><li> Te verwijderen uit het secundair Vervolgens voert 2X 5 min 1x PBS wasbeurten. Mount substraten op dia's met Verleng Gold met DAPI of een ander geschikt nucleaire tegen vlekken. </li></ol> 12. Representatieve resultaten: De typische morfologie van lijn en willekeurige electrospun vezels zijn weergegeven in figuur 1. We meestal krijgen MN zuiverheid van&gt; 90% neuronen 7,8 met dit protocol en we hebben onderhouden DRG culturen zo lang als een week zonder noemenswaardige fibroblast groei. Figuur 2 toont typische MN verschijning op glas en vezels na 24 uur van cultuur en immunokleuring. Immunostained DRG gekweekt voor drie dagen op glas en vezels zijn afgebeeld in figuur 3. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Fiber uitlijning wordt gemanipuleerd door de keuze van verzamelaar. A.) gebonden vezels gesponnen op een draaiend wiel collector en B.) random vezels gesponnen op een stationaire plaat collector. Schaal bars = 20 urn. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Representatieve motor neuronen gekleurd voor TuJ1 (groen) en DAPI (blauw) na 24 uur van cultuur op PLL gecoate A.) vezels en B.) glas. Schaal bars = 20 urn. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 3"> Figuur 3. Vertegenwoordiger DRG gekleurd voor neurofilament (groen) na 3 dagen van cultuur op PLL gecoat A.) glas en B.) vezels. Schaal bars = 200 micrometer. <table border="1"><tbody><tr><td> Stamoplossing: </td><td> MN media: </td><td> DRG / SN media: </td></tr><tr><td> 10 mg ml-1 albumine </td><td> 12,5 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 10 mg ml-1 apo-transferrine </td><td> 50 ui </td><td> 40 pi </td></tr><tr><td> 50 ug ml-1 β-estradiol </td><td> 2,7 pl </td><td> 2,2 pl </td></tr><tr><td> 0,1 mg ml-1 biotine </td><td> 50 ui </td><td> - </td></tr><tr><td> 16 mg ml-1 catalase </td><td> 8 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 15 mg ml-1 D-galactose </td><td> 50 ui </td><td> - </td></tr><tr><td> 50 ug ml-1 hydrocortisone </td><td> 3,7 pl </td><td> 2,9 pl </td></tr><tr><td> 0,63 mg ml-1 progesteron </td><td> 0,5 pl </td><td> - </td></tr><tr><td> 16 mg ml-1 putrescine </td><td> 50 ui </td><td> - </td></tr><tr><td> 50 ug ml-1 selenium </td><td> 3,4 pl </td><td> 4,1 pl </td></tr><tr><td> 2,5 mg ml-1 superoxide dismutase </td><td> 50 ui </td><td> - </td></tr><tr><td> * 500 ng ml-1 zenuwgroeifactor </td><td> - </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> * 100X PSN </td><td> 0,5 ml </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> * B27 </td><td> 1 mL </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> * 2 mM L-glutamine </td><td> 35 pl </td><td> 35 pl </td></tr><tr><td> * Neurobasal </td><td> tot 50 ml </td><td> tot 50 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Add speelde (*) componenten die de media vlak voor gebruik. De overige onderdelen kunnen worden bereid als een stockoplossing aanwezig zijn en bewaard bij -20 ° C totdat het nodig is 6,7. <table border="1"><tbody><tr><td> Primaire (concentratie) </td><td> Neuronen: </td><td> Glia: </td><td> Fibroblasten: </td></tr><tr><td> anti-β-tubuline (TuJ1) (1:1000) </td><td> ✓ </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> anti-neurofilament (1:1000) </td><td> ✓ </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> anti-S-100 (1:250) </td><td> X </td><td> ✓ </td><td> ✓ </td></tr><tr><td> anti-NGFR p75 (1:500) </td><td> ✓ </td><td> ✓ </td><td> X </td></tr></tbody></table> Tabel 2. De selectie van primaire antilichaam is afhankelijk van de doelstellingen van de onderzoeker. De bovenstaande zijn verschillende antilichamen en de concentraties hebben we met succes gebruikt in ons laboratorium. S-100 is bijzonder nuttig om Schwann-cellen te signaleren en / of voor vervuilende fibroblasten te controleren, maar dat het moet worden gebruikt in combinatie met NGFR p75 onderscheid te maken tussen glia en fibroblasts4 noot. We hebben ook gemerkt dat NGFR p75 vlekken neurieten heel licht, terwijl neurofilament of TuJ1 zijn uitstekende keuzes als het doel is om te visualiseren individuele neurieten. </pclass>

<ol><li>Corey, J. M., Gertz, C. C., Wang, B. S., Birrell, L. K., Johnson, S. L., Martin, D. C., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+electrospun+PLLA+nanofiber+scaffolds+compatible+with+serum-free+growth+of+primary+motor+and+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Biomater%22%5BJournal%5D)">The design of electrospun PLLA nanofiber scaffolds compatible with serum-free growth of primary motor and sensory neurons.</a> Acta. Biomater. 4, 863-875 (2008).</li>
<li>Lin, D. Y., Johnson, M. A., Vohden, R. A., Chen, D., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailored+nanofiber+morphologies+using+modulated+electrospinning+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Mat.+Res.+Soc.+Symp.+Proc%22%5BJournal%5D)">Tailored nanofiber morphologies using modulated electrospinning for biomedical applications.</a> Mat. Res. Soc. Symp. Proc. 736, D3.8.1-D3.8.6 (2003).</li>
<li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBanker%2C+G+%22Culturing+Nerve+Cells%22">Culturing Nerve Cells</a>. , MIT Press. Chapter 19 (1998).</li>
<li>Kameda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+glial+progenitor+markers+p75NTR+and+S100+protein+in+the+developing+mouse+parathyroid+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Expression of glial progenitor markers p75NTR and S100 protein in the developing mouse parathyroid gland.</a> Cell Tissue Res. 327, 15-23 (2007).</li>
<li>Corey, J. M., Lin, D. Y., Mycek, K. B., Chen, Q., Samuel, S., Feldman, E. L., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aligned+electrospun+nanofibers+specify+the+direction+of+dorsal+root+ganglia+neurite+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Aligned electrospun nanofibers specify the direction of dorsal root ganglia neurite growth.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 83, 636-645 (2007).</li>
<li>Vincent, A. M., Mobley, B. C., Hiller, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IGF-I+prevents+glutamate-induced+motor+neuron+programmed+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">IGF-I prevents glutamate-induced motor neuron programmed cell death.</a> Neurobiol. Dis. 16, 407-416 (2004).</li>
<li>Russell, J. W., Windebank, A. J., Schenone, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor-I+prevents+apoptosis+in+neurons+after+nerve+growth+factor+withdrawal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor-I prevents apoptosis in neurons after nerve growth factor withdrawal.</a> J. Neurobiol. 36, 455-467 (1998).</li>
<li>Gertz, C. C., Leach, M. K., Birrel, L. K., Martin, D. C., Feldman, E. L., Corey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+neuritogenesis+and+maturation+of+primary+spinal+motor+neurons+in+response+to+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Accelerated neuritogenesis and maturation of primary spinal motor neurons in response to nanofibers.</a> Dev. Neurobiol. 70, 589-603 (2010).</li>
<li>Tan, S. -H., Kotaki, M., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+parameter+study+for+ultra-fine+fiber+fabrication+via+electrospinning+process%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Systematic parameter study for ultra-fine fiber fabrication via electrospinning process.</a> Polymer. 46, 6128-6134 (2005).</li>
<li>Wang, H. B., Mullins, M. E., Cregg, J. M., Hurtado, A., Oudega, M., Trombley, M. T., Gilbert, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+highly+aligned+electrospun+poly-L-lactic+acid+fibers+for+nerve+regeneration+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Creation of highly aligned electrospun poly-L-lactic acid fibers for nerve regeneration applications.</a> J. Neural Eng. 6, (2009).</li>
</ol>

Dit protocol heeft een aantal kritische stappen. De eerste betreft de goede productie van de vezel electrospun substraten. In vloeibare media, zal de PLLA vezels, PLGA film en PLGA gracht gescheiden van de glazen dekglas als een eenheid. Als de PLGA is weggelaten, zal de PLLA vezels niet blijven een vlakke plaat - ze zullen krullen in een kluwen onbruikbaar. Zo wordt de PLGA film opgenomen als een geschikt substraat naar glasvezel lijn te behouden tijdens de cultuur. De gracht wordt toegevoegd na het spinnen zowel om ervoor te zorgen dat de vezels stevig bevestigd aan de PLGA film en de structurele stijfheid toe te voegen aan de film. De gracht dient ook als een nuttig handvat wanneer de substraten worden gemanipuleerd tijdens de vaststelling van vlekken en montage. Fijnwrijving is de tweede belangrijke stap. Alles in het werk moet worden gedaan om de vorming van luchtbellen te voorkomen. Daarnaast hebben wij veel hogere opbrengsten bij een brand-gepolijste pipet is gebruikt voor deze stap. Om brand polijsten, licht een bunsenbrander en voeg een gloeilamp aan het pipet. Snel voorbij de punt van de pipet door de vlam 2-3 keer onder voortdurend knijpen en loslaten van de bol - luchtstroom door de pipet zal helpen voorkomen dat de tip van het sluiten van volledig. Onderzoek de punt van de pipet om ervoor te zorgen het gat is nog steeds open en dat de randen verschijnen een beetje afgerond voor gebruik. Electrospinning is een zeer veelzijdige proces; de electrospinning parameters kunnen worden aangepast aan vezels met een verscheidenheid van morfologieën te produceren. Tan et al.. (2005) bevat een systematische studie van de parameters die de diameter van PLLA electrospun vezels. Wang et al.. (2009) geeft een gedetailleerde studie van de parameters die de afstemming van electrospun PLLA vezels.

<table><tbody><tr><td>PLLA</td><td>Boehringer Ingeheim</td><td>Resomer L210</td><td></td></tr><tr><td>PLGA 85:15</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43471</td><td></td></tr><tr><td>L15</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11415</td><td></td></tr><tr><td>Albumine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2289</td><td></td></tr><tr><td>Apo-transferrine</td><td>Akorn Inc</td><td>AK8227</td><td></td></tr><tr><td>Biotine</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC 23009-0010</td><td></td></tr><tr><td>Galactose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G0625</td><td></td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7556</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5780</td><td></td></tr><tr><td>Selenium </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9133</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#946;-estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E 1132</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0396</td><td></td></tr><tr><td>Catalase </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Superoxidedismutase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4636</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>PSN</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15640</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Nalge Nunc international</td><td>1680149</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Nalge Nunc international</td><td>1689149</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal rundenserum</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>26140</td><td></td></tr><tr><td>Optiprep</td><td>Accurate Chemical &amp;amp; Scientific Corporation</td><td>2011</td><td></td></tr><tr><td>PLL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4832</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F 4759</td><td></td></tr><tr><td>Laminine</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TuJ1</td><td>BD Biosciences</td><td>556321</td><td></td></tr><tr><td>Anti-neurofilament</td><td>EMD Millipore</td><td>AB1987</td><td></td></tr><tr><td>Anti-S100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2532</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NGFR p75</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N3908</td><td></td></tr><tr><td>Normaal geitenserum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6767</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Natriumazide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8032</td><td></td></tr><tr><td>Koolstofband</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>13073-1</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold +DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P36931</td><td></td></tr></tbody></table>

de cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun poly-l-lactide nanovezel steigers

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Electrospinning is een techniek voor de productie van micro-naar nano-schaal vezels. Vezels kunnen worden electrospun met verschillende gradaties van afstemming, van zeer afgestemd op volledig willekeurig. Daarnaast kunnen vezels worden gesponnen uit een verscheidenheid van materialen, waaronder biologisch afbreekbare polymeren, zoals poly-L-melkzuur (PLLA). Deze eigenschappen maken electrospun vezels geschikt voor een verscheidenheid aan toepassingen in de steigers tissue engineering. Onze focus ligt op het gebruik van de lijn electrospun vezels voor zenuw regeneratie. We hebben eerder al aangetoond dat afgestemd electrospun PLLA vezels de uitgroei van zowel de primaire sensorische en motorische neuronen in vitro direct. Wij onderhouden dat het gebruik van een primaire celkweek systeem essentieel is bij het ​​evalueren van biomaterialen om model echte neuronen gevonden in vivo zo dicht mogelijk. We beschrijven hier technieken die gebruikt worden in ons laboratorium te vezelig steigers en cultuur achterwortelganglia explantaten, evenals gedissocieerd sensorische en motorische neuronen, op electrospun steigers electrospin. Echter, de electrospinning en / of cultuur hier gepresenteerde technieken makkelijk aangepast voor gebruik in andere toepassingen.

Uitgelijnd electrospun vezels direct de groei van neuronen in vitro en zijn een potentieel onderdeel van de zenuw regeneratie steigers. We beschrijven een procedure voor het bereiden van electrospun vezels substraten en de serum-vrije cultuur van primaire rat E15 sensorische (DRG) en de motor neuronen. Visualisatie van de neuronen door middel van immunocytochemie is ook inbegrepen.

De cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun Poly-L-lactide Nanovezel Steigers

Electrospinning is een techniek voor het produceren van vezels op micro- tot nanometerschaal. Vezels kunnen worden ge-electrospun met verschillende graden van uitlijning, van sterk uitgelijnd ...

Uitgelijnde electrospun BUN-vezels sturen de groei van neuronen in vitro en vormen een potentieel onderdeel van steigers voor zenuwregeneratie. Hier worden electrospun BUN-vezelsteigers gegenereerd en worden primaire sensorische en motorische neuronen van ratten erop gekweekt. Eerst worden vezelsteigers via electrospinning op glazen dekglasplaatjes aangebracht.Vervolgens worden primaire neuronen verkregen van ratten op embryonale dag 15 en gekweekt op de electrogesponnen vezelsteigers. De neuronen krijgen de tijd om te hechten en te groeien, waarna ze worden gefixeerd en gekleurd met behulp van immunocytochemische technieken. Beeldvormingsresultaten onthullen veranderingen in de morfologie van neuronen die op electrogesponnen vezels zijn gekweekt, wat aangeeft dat de nanotopografie van de electrogesponnen vezels de uitgroei van neurieten kan sturen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals het gebruik van getransformeerde cellijnen, is dat primaire neuronen in vitro het gedrag van neuronen in vivo nauwkeuriger nabootsen dan getransformeerde cellen dat doen. Deze technieken bieden de mogelijkheid om electro fun fibers te gebruiken bij andere celtypen. Als alternatief kunnen onderzoekers gekweekte motorische en sensorische neuronen gebruiken voor andere onderzoeksdoeleinden.Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben, omdat electrospinning een nauwgezet proces is, wat we in ons bijbehorende video-artikel verder uitdiepen. Om electrospun vezelsubstraten voor te bereiden, begin je met het maken van een 8% oplossing van 85:15 polylactide-co-glycolidezuur of PLGA in chloroform en een 4% poly-L-lactide of PLLA-oplossing in chloroform door te roeren bij lage temperatuur. Breng vervolgens een laag PLGA aan op schone glazen dekglasjes door het oppervlak van elk dekglasje te bedekken met de PLGA-oplossing; laat de PLGA vervolgens drogen tot een dunne film, wat ongeveer 30 minuten duurt.Zodra de PLGA droog is, gebruik dan geleidende koolstofband om een PLG-gecoat dekglas te bevestigen aan ofwel een door een motor aangedreven wiel voor het genereren van uitgelijnde vezels of een stationaire plaat voor willekeurige vezels. Plaats een spuit met de 4%PLLA-oplossing in een pomp met een tip, gepositioneerd op 20 centimeter van de collector.Stel de pomp in op ongeveer 0,22 milliliters per uur. Stel de wielmotor in op 300 tot 400 rotaties per minuut. Breng een DC-bias van min twee kilovolt aan op de collector en plus 15 kilovolt op de geleiderplaat, die in contact staat met de metalen tip.Bij afwezigheid van toegang tot een bipolaire voedingsaarding, zullen de vezels bij het opstarten van de spuitpomp uit de spuitpunt spuiten en zich verzamelen op het draaiende wiel. Ga door met spinnen totdat de gewenste vezeldichtheid is bereikt; om verstopping van de metalen punt te voorkomen, veegt u deze periodiek af met een papieren handdoek die aan een niet-geleidende staaf is bevestigd. Pipetteer na het spinnen een lijn PLGA rond de omtrek van het dekglas, waardoor er in feite een slotgracht rond de elektroden wordt geplaatst.Laat de monsters drogen zodat het PLGA kan uitharden. Dit behoudt de uitlijning van de vezels tijdens de kweek. De elektrogesponnen vezels en de glazen controles moeten vóór de celkweek worden gecoat met eiwit.Om dit te doen, worden de substraten gedurende ten minste één uur bedekt met polyol, lysine, laminine of fibronectine. Aspireer vervolgens de overtollige oplossing totdat de substraten droog zijn. Indien polyol-lysine wordt gebruikt, moet het substraat na de initiële coating tweemaal worden gespoeld met steriel water en gedroogd.Zodra ze droog zijn, plaatst u de substraten in zes-wells weefselkweekplaten voor celkweek om de gecultiveerde cellen voor te bereiden die op de electros bun-vezels zullen worden gekweekt. Verkrijg E 15 embryo's van een geëuthanaseerde drachtige rat. Begin met het steriliseren van het gebied met 70% ethanol en maak vervolgens een incisie in de huid van de buik.Snijd door de huid- en spierlagen om de buikholte bloot te leggen. Lokaliseer de uterus en scheid deze los bij de cervix en de eierstokken. Verplaats de uterus naar een steriele schaal.Verwijder vervolgens de embryo's met een schaar uit de baarmoeder en plaats ze onmiddellijk in warm L 15. Nadat de embryo's zijn gedecapiteerd, wordt een embryo op zijn zij geplaatst terwijl het ruggenmerg met één set pincetten wordt beschermd. Gebruik de andere set om de ledematen en buikorganen te verwijderen.Draai vervolgens het embryo en houd het stevig vast met één set pincetten. Snijd langs de lengte van het embryo van de nek naar de staart tot het gehele ruggenmerg is blootgelegd. Pak het uiteinde van het ruggenmerg voorzichtig vast en trek het over zichzelf heen in de richting van de staart.Om het te verwijderen, wordt het ruggenmerg losgetrokken met het membraan en de dorsale wortelganglia eraan vastgehecht. Als er een preparaat van de dorsale wortelganglia x explan, of een cultuur van gedissocieerde sensorische neuronen moet worden uitgevoerd, knip dan de dorsale wortelganglia van het ruggenmerg af en breng ze over naar een schone schaal met warm L 15. Voor motorneuroncultuur.Pak het membraan van het ruggenmerg vast bij het anterieure uiteinde van het merg en pel het naar beneden. Herhaal dit proces voor alle embryo's, vergelijkbaar met het uittrekken van een lange sok, en gebruik vervolgens een pincet. Snijd de mergen in kleine stukjes om motorneuronculturen te verkrijgen.Giet de versnipperde ruggenmergen en L 15 in een conische buis en centrifugeer deze bij 180 ×g gedurende twee tot drie minuten. Verwijder het supernatant om de fragmenten te pelletiseren en voeg drie milliliters trypsine toe aan de gepelletiseerde mergen. Plaats de buis in een waterbad van 37 °C en incubeer deze gedurende 20 minuten.Voeg na de incubatie drie milliliters FBS toe aan de conische buis. Centrifugeer vervolgens bij 180 ×g gedurende twee tot drie minuten om het te pelletteren. Ondertussen wordt een vuurgepolijste glaspipet geprepareerd met FBS door het FBS in de pipet op te zuigen en vervolgens weer uit te stoten.Dit voorkomt dat stukjes weefsel aan het glas kleven tijdens het tritureren. Verwijder na het centrifugeren het supernatant. Voeg vervolgens één pasteurpipet vol L 15 toe aan de conische buis en tritureer voorzichtig met de FBS-gecoate pipet totdat de oplossing homogeen is en er geen zichtbare klontjes meer aanwezig zijn.Vermijd luchtbellen. Bereid voor elke twee embryo's één buisje voor met drie milliliters van 9%opre in L 15. Als er een oneven aantal embryo's is, voeg dan één druppel toe.Voeg de gehomogeniseerde oplossing toe aan de OptiPrep-oplossing door het homogenaat gelijkmatig over alle buisjes te verdelen. Het homogenaat zal een zichtbare troebele laag vormen bovenop de OptiPrep-oplossing. Centrifugeer de buisjes 15 minuten bij 700 ×g.Verzamel zorgvuldig de bovenste 2 mL uit elke buis en breng deze over in een conische buis van 50 mL. Vul de conische buis aan met L 15 en centrifugeer bij 180 ×g gedurende vijf minuten om de cellen te spoelen van opre. Verwijder het supernatant.De pellet is zelden met het blote oog zichtbaar. In dit stadium, Reese, resuspendeert u de cellen in een kleine hoeveelheid platingmedium. Tel de cellen met behulp van trypaanblauw-uitsluiting om de levende cellen te identificeren.De cellen zijn nu klaar om uit te platen. Voor het verkrijgen van sensorische neuronenculturen wordt een zuiverheid van meer dan 90% neuronen verwacht. Begin met het overgieten van de uit de ruggenmergen verwijderde dorsal root ganglia en L 15 in een conische buis.Centrifuge 2 tot 3 minuten bij 180 ×g om de fragmenten te pelletteren. Giet het supernatant af en voeg 3 mL trypsine toe aan de gepelletteerde DRG; incubeer dit in een waterbad van 37 °C. Verwijder de buis na 10 minuten uit het waterbad en voeg 3 mL FBS aan de buis toe; centrifugeer 2 tot 3 minuten bij 180 ×g om het te pelletteren.Coat ondertussen een vuurgepolijste Pasteurpipet met FBS. Gebruik, zoals eerder, de met FBS gecoate pipet om één volle pipet L 15 aan het pellet toe te voegen en tritere voorzichtig totdat de oplossing homogeen is en er geen zichtbare klonten meer aanwezig zijn. Voorkom beluchting voordat het homogenaat vijf minuten wordt gecentrifugeerd bij 180 ×g.Verwijder het supernatant en resuspendeer de cellen in een kleine hoeveelheid kweekmedium voor sensorische neuronen. Tel de cellen met behulp van trypaanblauw-uitsluiting om de levende cellen te identificeren. De cellen zijn nu klaar om te worden geplaatst voor de kweek van sensorische of motorische neuronen.Begin met het bedekken van de met proteïne gecoate electro bun-vezelsubstraten met een paar druppels medium. Voeg vervolgens een geschikt volume celconcentraat toe. Gedissocieerde cellen moeten met een lage dichtheid worden geplaatst.Laat de cellen ten minste één uur in de incubator aanhechten voordat de wells worden gevuld met medium en teruggeplaatst worden in de incubator voor cultivering. Bedek de met proteïne gecoate electro-gesponnen vezelsubstraten voor dorsale wortelganglia met enkele druppels medium. Voeg vervolgens de dorsale wortelganglia toe aan het medium.Schik de dorsale wortelganglia zodanig dat ze gelijkmatig over het substraat zijn verdeeld. Op een dekglas van 22 bij 22 millimeter passen ongeveer vier dorsale wortelganglia. Plaats de culturen van de dorsale wortelganglia in de incubator bij 37 °C en laat ze na de incubatie gedurende ten minste vier uur hechten.Vul de wells volledig met medium en plaats ze terug in de incubator. Culturen kunnen tot vier dagen worden onderhouden zonder mediumverversing. Voor langere culturen moeten halve mediumverversingen worden uitgevoerd met voedingsmedium.Het voedingsmedium heeft dezelfde samenstelling als het plaatmedium, maar zonder L-glutamine. Zodra de cellen het gewenste tijdstip hebben bereikt, kan immunocytochemie worden uitgevoerd volgens de instructies in het bijbehorende schriftelijke protocol. Deze SEM-afbeelding illustreert de typische morfologie van uitgelijnde en willekeurige elektrogesponnen vezels.De uitlijning van de vezels wordt gestuurd door de keuze van de collector. Let erop dat vezels die op een roterende wielcollector worden gesponnen, uniform zijn uitgelijnd. Daarentegen hebben vezels die op een stationaire collector worden gesponnen een willekeurige morfologie.Deze afbeeldingen tonen de kleuring van motorneuronen voor bèta-tubuline in het groen en DPI-kernkleuring in het blauw. Na 24 uur cultuur op PLL-gecoate vezels en glas op vezels bezitten motorneuronen doorgaans enkele uitlopers die vanuit het cellichaam parallel aan de richting van de vezeluitlijning projecteren, wat in deze afbeelding van links naar rechts is. De belangrijkste uitlopers van cellen die op vezels zijn gekweekt, zijn veel langer dan de belangrijkste uitlopers van cellen die gedurende dezelfde tijd op glas zijn gekweekt.Motorneuronen op glas vertonen doorgaans na 24 uur meer uitlopers, die radiaal vanuit het cellichaam uitstrekken. De neuronen die op vezels zijn gekweekt. De belangrijkste uitloper is op glas bovendien korter dan die welke op de vezels in deze beelden te zien zijn.Dorsale wortelganglia zijn gekleurd voor neurofilament, weergegeven in het groen. Na drie dagen cultuur op met PLL gecoate glazen plaatjes en vezels op glas stralen neurieten radiaal uit vanuit het dorsale wortelganglion. Er is ook een aanzienlijke overlap van aangrenzende neurieten op de vezels.De neurieten stralen ook radiaal uit vanuit het ganglion. Vervolgens buigen ze echter af en volgen ze de richting van de uitgelijnde vezels. Er is aanzienlijk minder overlap van aangrenzende neurieten zodra deze procedures onder de knie zijn.Electrospinning kan in ongeveer 30 minuten worden voltooid, en motorische en sensorische neuronen kunnen in ongeveer twee uur worden verkregen. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om steriele technieken toe te passen. Het gebruik van een vuurgepolijste pipet voor de iteratiestap is noodzakelijk om de overleving van de neuronen te maximaliseren.Daarnaast is het belangrijk om het adhesiemolecuul en de elektrogesponnen vezels gedurende de juiste tijd te incuberen. Als de vezels bijvoorbeeld minder dan een uur met polylysine zijn gecoat, zal de coating onvoldoende zijn om celadhesie te ondersteunen. Echter, als polylysine te lang wordt gelaten, zoals gedurende de nacht, kunnen de vezels degraderen.Het is ook belangrijk om te onthouden dat de meeste microscopen geen visualisatie van neuronen op vezels tijdens de cultuur mogelijk maken. Dit komt doordat de vezels en de neuronale uitlopers sterk op elkaar lijken. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u primaire culturen van motorische en sensorische neuronen uit ratten van embryonale dag 15 kunt kweken op elektrogesponnen vezelsubstraten.Vergeet niet dat werken met hoge spanningen extreem gevaarlijk kan zijn en dat passende voorzorgsmaatregelen altijd genomen moeten worden om de operator te isoleren van de elektrospin-opstelling.

the-culture-primary-motor-sensory-neurons-defined-media-on

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Electrospun steigers kunnen worden verwerkt post-productie voor tissue engineering toepassingen. Hier beschrijven we methoden voor het spinnen complexe steigers (door opeenvolgende spinnen), voor het maken van dikkere steigers (door meerdere lagen met behulp van warmte of damp gloeien), voor het bereiken van steriliteit (aseptische productie of sterilisatie post-productie) en zorgt voor een juiste biomechanische eigenschappen.

Postproduction Verwerking van electrospun Vezels voor Tissue Engineering

This video showcases the creation of a 3D polarized neural tissue model utilizing silk-collagen scaffolds. It details the process of seeding neuronal cells on porous silk scaffolds, incubating for cell attachment, embedding the scaffold with collagen, and underscores the significance of the supportive collagen matrix in forming a 3D polarized neural tissue model.

Developing an Engineered Silk-Collagen-Based 3D Model of Polarized Neural Tissue

Dit protocol combineert elektrospinnen en microsferen om weefselgeëngineerde scaffolds te ontwikkelen om neuronen te richten. Het zenuwgroeifactor werd ingekapseld in PLGA-microsferen en elektrogespunnen in hyaluronzuur (HA) vezelige scaffolds. De bioactiviteit van het eiwit werd getest door de scaffolds te zaaien met primaire kippendorsaalwortelganglia en 4-6 dagen te kweken.

Elektrospinproces Growth Factor Releasing microsferen in Stapel- Steigers

Synthese en de fabricage van electrospun lange vezels verspreid over een grotere storting gebied via een nieuw ontworpen verzamelaar uit een roman biologisch afbreekbaar polymeer genoemd poly (glycerol-dodecanoaat) (PGD) werd gemeld. De vezels waren in staat de groei van cellen afkomstig van muizen pluripotente stamcellen ondersteunen.

Electrospun Stapel Stellingen van Poly (glycerol-dodecanedioate) voor Engineering zenuwweefsel Van muis embryonale stamcellen

Dit artikel beschrijft een reeks configuraties voor het zaaien van menselijke mesenchymale stamcellen op materialen, in dit geval geëlektrospunnen garens, die de basis van standaard kweekputjes niet bedekken om het aantal cellen dat aanvankelijk hecht te maximaliseren en te kwantificeren in vergelijking met de bekende zaaidichtheid.

Het optimaliseren van Bevestiging van menselijke mesenchymale stamcellen op Poly (ε-caprolacton) elektrogesponnen Yarns

Hier presenteren we een protocol om elektrogesponnen nanovezel steigers met gradated organisatie van vezels fabriceren en hun toepassingen verkennen in het reguleren van de cel morfologie / oriëntatie. Verlopen met betrekking tot fysische en chemische eigenschappen van de nanovezel scaffolds biedt een grote verscheidenheid aan toepassingen op biomedisch gebied.

Electrospun Nanovezel Steigers met gradaties in Fiber Organisatie

Inzicht in de complexe werkingen van de hersenen vereist geavanceerde onderzoeksinstrumenten. Hier demonstreren we een nieuwe op zijde-collageen gebaseerd 3D-geengineerd model van zenuwweefsel dat lijkt op een hersen-achtige architectuur. Het model kan worden gebruikt om de assemblage van neuronale netwerken, axongeleide, cel-cel interacties en elektrische activiteit te bestuderen.

Engineered 3D Silk-collageen-gebaseerde model van de gepolariseerde zenuwweefsel

Vooruitgang in biomateriaaltechnologieën maakt de ontwikkeling van driedimensionale constructen met meerdere celtypen mogelijk. We hebben electrospinning protocollen ontwikkeld om drie individuele scaffolds te produceren om de belangrijkste structurele cellen van de luchtweg te kweken en zo een 3D in vitro model van de wand van de bronchiolen in de luchtweg te bieden.

Aanpassing van de elektrospinproces te bieden drie unieke omgevingen voor een Tri-layered<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van de Airway Muur

Hierin presenteren wij een protocol voor de 3D cultuur van rat hersenen-afgeleide glia cellen, met inbegrip van astrocyten, oligodendrocyten en microglia. We tonen primaire celculturen, methacrylated hyaluronzuur (HAMA) hydrogel synthese, HAMAphoto-polymerisatie en cel inkapseling en monster verwerking voor confocale en scanning elektronen microscopische beeldvorming.

Verbeterd 3D Hydrogel culturen van primaire gliacellen voor In Vitro modellering van Neuroinflammation

Deze methodologie heeft tot doel de mechanismen te illustreren waarmee extracellulaire matrixsignalen zoals substraatstijfheid, eiwitsamenstelling en celmorfologie het fenotype van Schwann-cel (SC) reguleren.

Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren

Hier laten we zien hoe epitheelcellen gekweekt met fibroblasten in het nanovezelige membraangebaseerde tweelaagse systeem stabiel kunnen hechten aan en groeien op het membraan.

Het opzetten van een driedimensionale cocultuurmodule van epitheelcellen met behulp van nanovezelmembranen

Leer de cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen op electrospun nanovezelsteigers voor zenuwregeneratieonderzoek. Deze methode gebruikt embryonale ratneuronen en immunocytochemie om groeirichting te visualiseren.

De cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun Poly-L-lactide Nanovezel Steigers (Video) | JoVE Journal

De cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun Poly-L-lactide Nanovezel Steigers

Meer video's verkennen