Co-Infiltration Assay for Screening Pathogen Effectors that Suppress Plant RNA Silencing

0 weergaven2:12 min • January 30th, 2026

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Take a mixture containing equal volumes of two Agrobacterium tumefaciens suspensions, each carrying a plasmid-one encoding GFP, and the other encoding an effector protein.

Puncture a hole and use a needleless syringe to infiltrate the mixture into the lower surface of healthy, fully expanded Nicotiana benthamiana 16c leaves.

Blot any excess suspension with soft tissue to prevent bacterial overgrowth.

Mark the infiltrated areas and incubate the plants under optimal growth conditions.

Agrobacterium transfers the plasmid DNAs into the plant cells, where the GFP and effector genes are transcribed into mRNAs and translated into proteins.

The plant’s defense system uses RNA silencing, where duplex siRNAs are loaded into RISC. The passenger strand is removed, and the guide strand directs the complex to degrade target GFP mRNA.

However, the effector proteins bind to siRNAs, preventing their association with RISC and allowing GFP fluorescence to persist.

This enables the identification of pathogen effectors that suppress plant RNA silencing.

Mix equal volumes of an Agrobacterium culture containing 35S green fluorescent protein with an Agrobacterium culture containing 35S cucumber mosaic virus suppressor 2b, putative effector, or empty vector. Using a 1 milliliter needleless syringe, carefully and slowly infiltrate the mixed Agrobacterium suspensions on the abaxial sides of Nicotiana bethamiana 16c leaves.

Remove the remaining bacterial suspension from the leaves with soft tissue wipes, and circle the margins of the infiltrated patches with a marker pen.

11:16

Een hydroponisch co-cultuursysteem voor gelijktijdige en systematische analyse van plant- / microbe moleculaire interacties en signalering

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:10

Een visuele gids voor het bestuderen van gedrags verdediging aan Pathogen aanslagen in blad-Cutting mieren

Gerelateerde video's

0 Bekeken

05:03

Directe observatie en geautomatiseerde meting van stomatale responsen op Pseudomonas syringae pv. tomaat DC3000 in Arabidopsis thaliana

Gerelateerde video's

0 Bekeken

06:34

Virus-geïnduceerde gen silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana En Tomaat

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:45

Test voor Pathogeen-geassocieerde Moleculaire Pattern (PAMP)-Triggered Immuniteit (PTI) in Planten

Gerelateerde video's

0 Bekeken

10:58

Kwantitatieve en geautomatiseerde high-throughput genoomwijde RNAi schermen in C. elegans

Gerelateerde video's

0 Bekeken

07:33

Agro-infiltratie en PVX Agro-infectie in aardappel en Nicotiana benthamiana

Gerelateerde video's

0 Bekeken

08:17

VIGS-Mediated Forward Genetics Screening voor de identificatie van genen betrokken bij Nonhost Resistance

Gerelateerde video's

0 Bekeken

11:50

Bacteriële Leaf Infiltratie Assay voor Beeldende karakterisatie van Plant Defense Reacties met behulp van de Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

Gerelateerde video's

0 Bekeken

09:44

RNAi-gemedieerde controle van Aflatoxines in Peanut: Methode om Mycotoxine Productie en transgenexpressie Analyseer de Peanut / Aspergillus Pathosystem

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 15 augustus 2026