Waarom is het toetsen van de nulhypothese belangrijk voor de kolenietelling?

Nulhypothese-testen bij de enumeratie van kolonies maakt een objectieve beoordeling mogelijk van of de waargenomen verschillen in C. difficile-belasting tussen groepen statistisch significant zijn, wat bijdraagt aan een robuuste targetvalidatie en mechanistische studies.

Hoe past de isolatie van de onafhankelijke variabele in workflows voor seriële verdunningen?

Het isoleren van variabelen, zoals behandeling of genetische achtergrond, tijdens seriële verdunning en uitplating zorgt ervoor dat veranderingen in het aantal koloniën echte biologische effecten weerspiegelen, wat het vertrouwen in de ontdekkingsfase vergroot.

Wat maken kwantitatieve kolonietellingen mogelijk in infectiemodellen?

Kwantitatieve kolonietellingen bieden een nauwkeurige meting van de bacteriële belasting, waardoor vergelijkingen tussen experimentele groepen mogelijk zijn en datagestuurde beslissingen in preklinisch onderzoek naar infectieziekten worden ondersteund.

Waarom zijn replicatie-eisen cruciaal voor studies tussen verschillende teams?

Replicatie van de verzameling van fecesmonsters en de kolenietelling waarborgt de reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid, wat de functionele samenwerking en data-integratie in multi-site R&D-programma's faciliteert.

Welke statistische analyses zijn vereist voordat kandidaten worden doorgezet?

Statistische analyses van colony-forming unit-gegevens, inclusief variantie- en significantietoetsing, zijn essentieel om bevindingen te valideren en de verdere ontwikkeling van anti-infectieuze kandidaten in de pipeline te rechtvaardigen.

Quantification of Clostridium difficile in Fecal Samples from an Infected Mouse Model

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiologie

0 weergaven • 3:08 min • March 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a mouse whose gastrointestinal tract is colonized by Clostridium difficile, an anaerobic, spore-forming bacterial pathogen.

Restrain the mouse and allow it to defecate naturally into a sterile, pre-weighed tube.

Determine the net weight of the fecal sample by subtracting the empty tube weight from the total weight to prepare appropriate dilutions.

Transfer the sample into an anaerobic environment to preserve the viability of the oxygen-sensitive bacterium.

Add a buffer to the sample and mechanically disrupt it to release its contents into suspension.

Incubate to allow larger debris to settle, retaining bacterial cells and spores in the supernatant.

Perform serial dilutions of the supernatant in the buffer.

Plate the dilutions onto selective media and incubate under anaerobic conditions.

The media promote spore germination and selective growth of Clostridium difficile while inhibiting competing bacteria, resulting in distinct colonies.

Count the colonies to quantify the Clostridium difficile load in the feces and evaluate gastrointestinal colonization.

To collect fecal samples from mice for assessment, first lightly but firmly restrain the subject mouse by the loose skin on the neck and back, ensuring the animal is not in distress.

Using the pinky finger, gently lift the animal's tail, exposing the anus. Hold a sterile microcentrifuge tube of known weight directly under the animal's anus, ensuring the tube does not directly touch the mouse. When the animal defecates, collect the fecal pellet in the tube.

Store the tube at room temperature until all necessary samples are collected. Weigh the tubes containing feces on an analytical scale and record the mass to four decimal places. Calculate the weight of the fecal pellet by subtracting the weight of the tube.

Next, calculate a one to ten dilution of the contents and resuspend into 1x PBS. Use the tip of the pipette to gently disrupt the fecal matter into solution. Incubate the samples at room temperature for 30 minutes, allowing the contents to settle.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 1 augustus 2026

Quantification of Clostridium difficile in Fecal Samples from an Infected Mouse Model

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschappelijk vakgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële relevantie voor executives

Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D

Vroege Ontdekking & Targetvalidatie

Screening & Assayontwikkeling

Translationeel en preklinisch onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor implementatie

Veelgestelde vragen over biofarmaceutica

Een protocol om de morfologische veranderingen van Clostridium difficile In reactie op Antibiotische Behandeling

Een eiwit Microarray Assay voor serologische bepaling van antigeen-specifieke antilichaam reacties volgende Clostridium difficile -infectie

Ontwikkeling van een Larval Zebrafish Infection Model voor Clostridioides difficile

Quantification of Tissue Bacterial Load in a Mouse Model of Chronic Intestinal Infection

Processing of Infected Tissues for Bacterial Enumeration in a Mouse Co-Infection Model

Visualization of Amino Acid Metabolites in Intestinal Tissues of Infected Mice

Establishing a Mouse Model of Clostridium difficile Infection

Quantification of Bacterial Load in Mouse Spleen and Liver After Systemic Infection

De Citrobacter rodentium Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

4D multimodale beeldvorming van Citrobacter rodentium Infecties in Muizen