Name: De combinatie van Lipophilic kleurstof, In situ Hybridisatie, immunohistochemie, en Histologie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 5 s
Description: Leer een combinatie van lipofiele kleurstof, in situ hybridisatie, immunohistochemie en histologie voor neurobiologisch onderzoek in muizenweefsel. Deze methode maximaliseert de informatie uit één specimen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Confocale beelden werden verkregen bij de Universiteit van Iowa Carver Center for Imaging. De financiering werd verstrekt door een SBIR subsidie ​​(MH079805) om BF Bijkomende ondersteuning voor de fokkerij de muizen voor dit project werd verzorgd door het NIDCD, toont (5R01DC00559007) naar BF

<ol><li>Jensen-Smith, H., Gray, B., Muirhead, K., Ohlsson-Wilhelm, B., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-distance+three-color+neuronal+tracing+in+fixed+tissue+using+NeuroVue+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Long-distance three-color neuronal tracing in fixed tissue using NeuroVue dyes.</a> Immunol Invest. 36, 763-789 (2007).</li>
<li>Tonniges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-+and+bio-physical+characterization+of+novel+violet+and+near-infrared+lipophilic+fluorophores+for+neuronal+tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Photo- and bio-physical characterization of novel violet and near-infrared lipophilic fluorophores for neuronal tracing.</a> Journal of Microscopy. , (2010).</li>
<li>Bartheld, C. S. von, Cunningham, D. E., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+tracing+with+DiI%3A+decalcification%2C+cryosectioning%2C+and+photoconversion+for+light+and+electron+microscopic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Neuronal tracing with DiI: decalcification, cryosectioning, and photoconversion for light and electron microscopic analysis.</a> J Histochem Cytochem. 38, 725-733 (1990).</li>
<li>Gurung, B., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+embryonic+midbrain+thalamic+and+thalamic+auditory+connection+development+in+mice+as+revealed+by+carbocyannine+dye+injection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Time course of embryonic midbrain thalamic and thalamic auditory connection development in mice as revealed by carbocyannine dye injection.</a> J Comp Neurol. 479, 309-327 (2004).</li>
<li>Fritzsch, B., Nichols, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DiI+reveals+a+prenatal+arrival+of+efferents+at+the+differentiating+otocyst+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">DiI reveals a prenatal arrival of efferents at the differentiating otocyst of mice.</a> Hear Res. 65, 51-60 (1993).</li>
<li>Jahan, I., Kersigo, J., Pan, N., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurod1+suppresses+hair+cell+differentiation+in+ear+ganglia+and+regulates+hair+cell+subtype+development+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Neurod1 suppresses hair cell differentiation in ear ganglia and regulates hair cell subtype development in the cochlea.</a> PloS ONE. 5, e11661-e11661 (2010).</li>
</ol>

Muis weefsel werd verzameld in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften uiteengezet door de Universiteit van Iowa Institutional Animal Care en gebruik Comite (ACURF 0804066) in te stellen.

In deze video, demonstreren we een methode om vier technieken te combineren met het oog op het verzamelen van gegevens en de samenhang te maximaliseren door correleren data binnen een bepaald dier (figuur 3). Deze aanpak zal de hoeveelheid fokken en dus de tijd die nodig is om publiceerbare gegevens te verkrijgen terwijl het verbeteren van informatie over de co-localisatie en de correlatieve effecten van de mutanten. Hoewel embryonale muizen werden gebruikt in deze video, volwassen muis evenals andere dieren zoals kippen, Xenopus en zebravis kan worden geanalyseerd met behulp van deze technieken ook. Bij het gebruik van andere soorten proteïnase K spijsvertering moet mogelijk worden aangepast. Hier hebben we gebruik maken van verschillende fluorescerende kleurstoffen NeuroVue specifiek tot het etiket tot drie neuronale populaties van belang. Het voordeel van deze kleurstoffen is dat ze kunnen worden gebruikt in de mutante muizen, die kunnen worden problematisch wanneer zich uitsluitend op immunohistochemie die al dan niet kan worden beïnvloed door de mutaties te analyseren, en ze het etiket neuronen retrogradely en anterogradely 5. Een recente studie heeft ook toename van het aantal neuron populaties die tegelijkertijd kan worden bestempeld tot zes 2. Na, kan de lipofiele kleurstof en hetzelfde weefsel van belang dan worden geanalyseerd met behulp van in situ hybridisatie, voor de analyse van gen-transcriptie en kunnen vervolgens worden geanalyseerd met behulp van immunohistochemie voor eiwit distributie. Deze laatste analyse kan worden aangevuld met gedetailleerde histologie die kan toevoegen aan het fenotype karakterisering 6. Deze multifactoriële analyse heeft het potentieel om nieuwe inzichten te verkrijgen door middel van correlatieve analyse binnen hetzelfde dier, dat anders kan zijn onwaarschijnlijk of op zijn minst behoefte aan meer uitgebreide protocollen en muis fokken.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;in situ&lt;/em&gt; Hybridisatie:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC DIG was- + blokkeringsbuffer set</td><td>Roche Group</td><td>1585762</td><td></td></tr><tr><td>Premix 20x SSC-buffer</td><td>Roche Group</td><td>1666681</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K 20mg/ml</td><td>Ambion</td><td>AM2546</td><td></td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonaat (DEPC)</td><td>Research Products International Corp.</td><td>D43060</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9037</td><td></td></tr><tr><td>Dextraansulfaat</td><td>Research Products International Corp.</td><td>D20020</td><td></td></tr><tr><td>BM Purple</td><td>Roche Group</td><td>11442074001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Dig-AP Fab-fragmenten</td><td>Roche Group</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>RNase A-enzym 10mg/ml</td><td>Fermentas</td><td>EN0531</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away</td><td>Research Products International Corp.</td><td>7003</td><td></td></tr><tr><td>Zalm-sperma DNA 10mg/ml</td><td>Invitrogen</td><td>15632-011</td><td></td></tr><tr><td>Stericup filtereenheid 0,22&amp;mu;m; 500ml</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGVU05RE</td><td></td></tr><tr><td>Filterdiscs 0,2&amp;mu;m; 25mm</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>6780-2502</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing pH 7,4 zakjes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5368</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Immunohistochemie:&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geiten serum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8532</td><td></td></tr><tr><td>H&amp;#8211;-chst kleurstof</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>9460</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Histologie:&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poly/Bed 812 inbedmedium/DMP-30 kit</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>08792-1</td><td></td></tr><tr><td>Propyleenoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>110205</td><td></td></tr><tr><td>Glutaaraldehyde-oplossing 50%</td><td>Fisher Scientific</td><td>G151</td><td></td></tr><tr><td>DPX monteermiddel</td><td>Fluka</td><td>44581</td><td></td></tr><tr><td>Rocker</td><td>MidSci</td><td>55D1114</td><td></td></tr><tr><td>Heat block</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-715-125D</td><td></td></tr><tr><td>Rotator</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>400110Q</td><td></td></tr><tr><td>Incubator ingesteld op 60&amp;#x00B0;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-690-625D</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Kleurstof-tracing:&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microschaartjes</td><td>Geuder</td><td>G-19775</td><td></td></tr><tr><td>Fijne pincet</td><td>E.M.S</td><td>72680-F</td><td></td></tr><tr><td>NeuroVue kleurstof: Maroon, Red, Jade</td><td>MTTI</td><td>FS-100(1,2,6)</td><td></td></tr><tr><td>1X fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5368</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Leica Microsystems</td><td>M205 FA</td><td></td></tr><tr><td>Incubator ingesteld op 36&amp;#x00B0;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-690-506DQ</td><td></td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td>Leica Microsystems</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>Objectglazen</td><td>Surgipath</td><td>00240</td><td></td></tr><tr><td>Dekglasjes</td><td>Surgipath</td><td>00106</td><td></td></tr><tr><td>RPI</td><td>Glycerol</td><td>G22025-0.5</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (4% en 0,4%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td></td></tr></tbody></table>

de combinatie van lipophilic kleurstof, in situ hybridisatie, immunohistochemie, en histologie

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Die verder gaat dan enkel gen-functie om dieper te snijden in de gen-regulatorische netwerken vereist meerdere mutaties gecombineerd in een enkel dier. Een dergelijke analyse van twee of meer genen moet worden aangevuld met in situ hybridisatie van andere genen, of immunohistochemie van hun proteïnen, zowel in geheel aangebracht ontwikkelen van organen of delen voor een gedetailleerde oplossing van de cellen en weefsels expressie veranderingen. Combineren van meerdere genen veranderingen vereist het gebruik van cre-of flipase voorwaardelijk verwijderen genen en te voorkomen embryonale letaliteit. Vereist fokprogramma&#39;s sterk te verbeteren inspanning en kosten in verhouding tot het aantal gemuteerde genen, met een resultaat van de weinige dieren met de volledige repertoire van de gewenste genetische modificaties. Afschrijven van de enorme hoeveelheid tijd en moeite om deze enkele kostbare exemplaren, die het meedragen van meerdere mutaties te verkrijgen noodzakelijk weefsel optimalisatie. Bovendien, het onderzoeken van een enkel dier met meerdere technieken maakt het makkelijker om gendeletie afwijkingen correleren met de expressie profielen. We hebben een techniek ontwikkeld om een ​​meer grondige analyse van een bepaald dier te verkrijgen; met de mogelijkheid om verschillende histologisch herkenbare structuren te analyseren, alsook gen-en eiwitexpressie allemaal uit dezelfde model in beide geheel aangebracht organen en secties. Hoewel muizen zijn gebruikt om de effectiviteit van deze techniek aan te tonen dat kan worden toegepast op een breed scala aan dieren. Om dit te doen combineren we lipofiele kleurstof tracing, ganse berg in situ hybridisatie, immunohistochemie, en histologie aan de maximaal mogelijke hoeveelheid gegevens te extraheren.

Een combinatie van verschillende technieken om het verzamelen van gegevens te maximaliseren van muis weefsel wordt gepresenteerd.

De combinatie van Lipophilic kleurstof, In situ Hybridisatie, immunohistochemie, en Histologie

Om verder te gaan dan de functie van een enkel gen en dieper in te gaan op genregulerende netwerken, is het noodzakelijk om meerdere mutaties in één enkel dier te combineren. Een dergelijke analyse van ...

Om verder te gaan dan de functie van een enkel gen en genregulerende netwerken te analyseren, zijn meerdere mutaties in één dier vereist. In dit systeem optimaliseren we de hoeveelheid gegenereerde gegevens uit één enkel weefsel om genetische mutaties te correleren met morfologische en expressieprofielen. Dit wordt bereikt door eerst lipofiele kleurstoffen te injecteren om verschillende afzonderlijke neuronale populaties te visualiseren.In situ hybridisatie wordt uitgevoerd om het spatio-temporele patroon van gentranscripten te visualiseren. Terwijl immunohistochemie specifieke patronen van eiwitexpressie weerspiegelt, draagt de toegevoegde dimensie van histologische doorsneden bij aan de fenotypekarakterisering. Dit experimentele systeem biedt de mogelijkheid om verschillende histologisch herkenbare structuren, evenals gen- en eiwitexpressie, te analyseren vanuit hetzelfde specimen, zowel in volledige preparaten als in doorsneden; een systeem dat lipofiele kleurstofspooring, in situ hybridisatie, immunohistochemie en histologie combineert.Deze techniek maximaliseert de verkregen informatie uit één enkel specimen door morfologie te correleren met gen- en eiwitexpressie voor alle weefseldissecties en manipulaties. Fixeer de dieren in 4%paraldehyde in 0,1 molair fosfaatbuffer via transcardiale perfusie met behulp van peristaltische pompen met naalden van een passende grootte. Aangezien de DY lichtgevoelig zijn, dienen ze in een donker, gesloten compartiment te worden bewaard en moet, om kruisbesmetting te voorkomen, een aparte set instrumenten worden aangewezen voor het hanteren van elke kleurstof onder een dissectiemicroscoop.Bepaal een plek voor de applicatie van de kleurstof om selectief de betreffende neuronale populatie te labelen en geen andere vreemde structuren. Verwijder overbodig weefsel om de gekozen plek visueel te bevestigen en toegang te verkrijgen voor het plaatsen van de kleurstof. Knip nu de vooraf geladen neuro view-kleurstofstripjes met microschaartjes in driehoekige stukjes van de juiste grootte.Zorg ervoor dat u een zo klein mogelijk stukje afsnijdt om te voorkomen dat andere structuren worden gelabeld bij insertie in zachte weefsels, zoals direct in de hersenen. Voeg het filter in door een punt van de filterdriehoek te gebruiken om het weefsel te doorboren. Maak bij stevigere weefsels een incisie om de insertie van de D. te vergemakkelijken. Gebruik geen dissectienaald om het filter in het weefsel te duwen.Plaats de specimens in een stevig gesloten vial met 4% paraformaldehyde en incubeer deze gedurende twee tot 14 dagen bij 36 °C in het donker, afhankelijk van de leeftijd en de te overbruggen diffusieafstand. Controleer met een dissectiemicroscoop met epifluorescentie of de kleurstof is gediffundeerd naar de gewenste locatie en dissecteer het betreffende weefsel uit. Monteer het specimen met glycerol op een objectglas voor beeldvorming met een confocale microscoop.Na het afbeelden van de lipofiele ogen met de confocale microscoop worden de monsters systematisch overgebracht naar een RNAse-vrije eppendorfbuis van twee milliliter met RNAse-vrije PBS om de glycerol af te spoelen. Verwerk de monsters via dehydratie en rehydratie met een methanolserie met oplopende concentraties bij vier graden Celsius. Begin met een incubatie in 100% methanol gedurende ten minste een uur en werk af naar 25% methanol voor 15 minuten.Was drie keer gedurende vijf minuten in 1× PBS. Verteer het weefsel met 2 µL van 20 mg/mL stock proteinase K in 2 mL vers PBS. Monitor de verteeringsreactie door de verandering in weefselopaciteit van opaak naar bijna helder.Om de enzymatische digestie te stoppen, worden de monsters vijf minuten geïncubeerd in 4% paraformaldehyde. Was vervolgens één keer gedurende één minuut met PBS, gevolgd door drie wasbeurten van vijf minuten. Gooi de laatste PBS-was weg, waarbij speciale aandacht wordt besteed aan het zoveel mogelijk verwijderen hiervan als pre-hybridisatiestap.Incubeer de monsters in 1,8 milliliters hybridisatiebuffer. Meng gedurende één uur bij 60 °C op een inverter. Denatureer zalmsperma-DNA door incubatie bij 85 °C gedurende 10 minuten en plaats dit vervolgens op ijs. Voeg 200 microliters gedenatureerd, enkelstrengs DNA en ongeveer 100 nanograms DIG-gelabelde riba-sonde toe aan elk monster en hybridiseer dit gedurende de nacht bij 60 °C in een hybridisatieoven.Verwerk de monsters met drie wasbeurten van 10 minuten in tweemaal SSC bij 60 °C in de hybridisatieoven. Verwijder vervolgens alle endogene alkalische fosfatase-activiteit met een wasbeurt in tweemaal SSC gedurende 60 minuten bij 70 °C in een ISO temp warmteblok. Was de monsters gedurende vijf minuten met PBS.Vervang nu de PBS en voeg 1 µL van 10 mg/mL RNA's A toe en incubeer gedurende 60 minuten bij 37 °C in een ISO temp warmteblok. Verwijder de PBS RNA's A en was drie keer met wasoplossing gedurende telkens 10 minuten.Verhit en activeer tot slot alle resterende RNA's door deze 60 minuten lang bij 70 °C te incuberen in een ISO temp warmteblok. De laatste stap is de visualisatie van de riboprobe. Incubeer de monsters gedurende één uur in een eenmalige blokbuffer.Gooi de blokkeringsbuffer weg en voeg twee milliliters blokkeringsbuffer met één microliter anti ditch-antilichaam toe aan elk monster. Incubeer dit een nacht en was vervolgens meerdere keren met één keer wasbuffer zoals aangegeven. Incubeer de monsters daarna een nacht in één keer wasbuffer.Spoel de monsters één keer met detectiebuffer gedurende 10 minuten en breng de monsters over naar een wellplaat. Gooi de buffer weg en ontwikkel de kleur met BM purple, aangezien BM.Purple lichtgevoelig is. Dek af met folie of een doos zodra de gewenste signaalsterkte is bereikt.Spoel de monsters in de wells vijf minuten lang met één volume detectiebuffer. Beeld de monsters af met transmissiemicroscopie of bewaar ze in 4% paraformaldehyde bij vier graden Celsius. Verwijder indien nodig lipofiele kleurstoffen uit het weefsel met een gradiënt ethanolserie.Rehydrateer het weefsel vervolgens door stapsgewijs PBS toe te voegen gedurende vijf tot 10 minuten. Blokkeer het weefsel nu gedurende één uur in 2,5% normaal geiten serum en 0,5% Triton X 100 bij kamertemperatuur op een schudapparaat. Incubeer met het primaire antilichaam, verdund in blokkeringsoplossing, gedurende 48 uur bij vier graden Celsius op een schudapparaat. Was drie keer met PBS gedurende telkens één uur. Blokkeer de monsters opnieuw en incubeer ze vervolgens met een fluorescent geconjugeerd secundair antilichaam, verdund in blokkeringsoplossing, gedurende 12 tot 24 uur bij vier graden Celsius op een schudapparaat. Vanaf dit punt moet er zorgvuldig worden voorkomen dat licht op het monster valt, aangezien de secundaire antilichamen lichtgevoelig zijn.Was de monsters vervolgens drie keer met PBS gedurende elk één uur. Analyseer de preparaten tot slot door middel van beeldvorming met epi-fluorescentie- en confocale microscopie. Epoxy-inbedding en coupesnijden vereisen fixatie van het weefsel in 2,5%GLUTARALDEHYDE 1%PFA in 0,1 molar fosfaatbuffer, gewoonlijk overnacht in een glazen monsterbuisje; dehydrateer het weefsel met graduele ethanol-incubaties om over te gaan naar solventen, waarbij eerst wordt geïncubeerd in een mengsel van één op één absolute ethanol en propyleenoxide gedurende vijf minuten, gevolgd door vijf wasbeurten van 10 minuten in enkel propyleenoxide; infiltreer het monster met hars door middel van een eenvoudige incubatie in één op één propyleenoxide en hars, overnacht op een schudapparaat.Giet de oplossing met het monster in een platte inbedmal en laat deze vier tot zes uur op het aanrecht staan om het propyleenoxide te laten verdampen. Breng de monsters vier uur over naar 100% hars in de definitieve mal. Bed de monsters in hars en breng een label aan.Laat de hars polymeriseren door deze 24 tot 48 uur te incuberen bij 60 °C. Om overtollige hars te minimaliseren, kan het harsblok naar behoefte met een scheermesje worden bijgesneden. Gebruik hiervoor een ultramicrotoom.Maak seriële coupes van één tot twee micron, monteer deze en beeld de monsters af met behulp van transmissie- en epi-fluorescentiemicroscopie. Lipofiele kleurstoffen met verschillende golflengten kunnen de visualisatie van de centrale projecties van drie verschillende hersenzenuwen vergemakkelijken. Hier wordt de lipofiele kleurstof aangebracht in de perifere delen van de nervus trigeminus, nervus glossopharyngeus en nervus vagus.Na incubatie voor kleurstofdiffusie worden de centrale zenuwuitlopers naar de hersenstam gevisualiseerd met lichtmicroscopie. Wanneer de achterhersenen worden gedisseceerd en platgemonteerd, is de labeling van de centrale uitlopers van de drie gelabelde zenuwen duidelijk zichtbaar. Bij lichtmicroscopie maakt de confocale microscoop dimensionaliteit mogelijk waarbij specifieke gebieden worden verlicht, en het gebruik van drie verschillende kleurstoffen maakt de beoordeling van de distributie van elke populatie mogelijk.In vergelijking met de andere beelden worden hier de afferente banen van het binnenoor in een pasgeboren muis gevolgd via neuro view. Rood geeft de C two hybridisatie voor prox one aan, en een combinatie van immunoreactiviteit voor anti tubulin en anti prox. One wordt gebruikt om de afferenten te visualiseren.Daarnaast wordt een epoxyharssectie van twee micron dik gebruikt om het slakkenhuis als dwarsdoorsnede in beeld te brengen. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om de plaatsing van het lipofiele oog zorgvuldig te kiezen. Een goede kennis van de neuroanatomie is bij dit proces behulpzaam; wees daarnaast voorzichtig bij alle lichtgevoelige stappen.Deze procedure vermindert de hoeveelheid fokwerk en de tijd die nodig is om publiceerbare gegevens te verkrijgen, terwijl de informatie over colocalisatie en cove-effecten in mutanten wordt verbeterd.

combining-lipophilic-dye-situ-hybridization-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een techniek combineert in situ tetrameer vlekken en in situ hybridisatie (ISTH) maakt visualisatie, in kaart brengen en analyseren van de ruimtelijke nabijheid van virus-specifieke CD8 + T-cellen om hun virus-geïnfecteerde targets, en de bepaling van de kwantitatieve relaties tussen deze immuun-effectoren en doelstellingen voor infecties resultaten.

Een techniek om tegelijkertijd Visualiseer virus-specifieke CD8 + T-cellen en virus-geïnfecteerde cellen In situ</em

Source: Jolly, S., et.al. Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates the use of double fluorescence in situ hybridization to visualize the expression of two RNA targets in mouse brain sections. The protocol involves sequential detection of RNA using probes labeled with fluorescein isothiocyanate and digoxigenin, followed by enzymatic signal...

 Performing Double Fluorescence In Situ Hybridization to Detect Gene Expression in Mouse Brain Sections

Hier beschrijven we een geheel gemonteerde...

Hele Mount RNA TL<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie van<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo&#39;s

We beschrijven een multi-target chromogene whole-mount in situ hybridisatie (MC-WISH) procedure in intacte Drosophila embryo's toestaan ​​gelijktijdige en specifieke detectie van drie verschillende mRNA distributie patronen door contrasterende kleur neerslagen.

Multi-target Chromogene Whole-mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie voor het vergelijken van genexpressie Domeinen in<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo

Het lokaliseren van genexpressie naar specifieke celtypen kan een uitdaging zijn vanwege het ontbreken van specifieke antilichamen. Hier beschrijven we een protocol voor gelijktijdige driedubbele detectie van genexpressie door dubbele fluorescentie RNA in situ hybridisatie te combineren met immunokleuring.

De combinatie van Double Fluorescentie<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie met immunolabel voor detectie van de expressie van drie genen in de hersenen van muizen Secties

Het beschreven RNA in situ hybridisatie protocol staat toe de opsporing van RNA in hele Drosophila embryo's of ontleed weefsels. Met behulp van 96-wells microtiterplaat platen en tyramide signaal versterking, kunnen afschriften worden gedetecteerd op hoge resolutie, gevoeligheid en doorvoer, en tegen een relatief lage prijs.

Hoge resolutie fluorescentie In Situ hybridisatie in Drosophila embryo's en weefsels met behulp van Tyramide signaal versterking

Hier beschrijven we een protocol voor multiplex fluorescerende immunohistochemische kleuring en imaging voor de gelijktijdige localisatie van meerdere kanker-geassocieerde antigenen in lymfoom. Dit protocol kan worden uitgebreid tot de colocalization analyse van biomarkers binnen alle weefselsecties.

Multiplexed fluorescerende immunohistochemische kleuring, Imaging en analyse in histologische monsters van lymfoom

We beschrijven een snelle kleuringsmethode om multispectrale beeldvorming op bevroren weefsels uit te voeren.

Een snelle methode voor multispectrale fluorescentiebeeldvorming van bevroren weefselsecties

Dit protocol beschrijft een methode voor het combineren van fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) en fluorescentie immunohistochemie (IHC) in zowel vers ingevroren als gefixeerde hersensecties van muizen, met als doel het bereiken van multilabel FISH en fluorescentie IHC-signaal. IHC richtte zich op cytoplasmatische en membraangebonden eiwitten.

Combinatie van multiplex fluorescentie in situ hybridisatie met fluorescerende immunohistochemie op vers ingevroren of vaste hersensecties van muizen

Dit protocol schetst de gedetailleerde stappen van het pre-embedden van immuno-elektronenmicroscopie, met een focus op het verkennen van synaptische circuits en eiwitlokalisatie in het netvlies.

Onderzoek naar retinale circuits en moleculaire lokalisatie door pre-embedding immuno-elektronenmicroscopie

Leer een combinatie van lipofiele kleurstof, in situ hybridisatie, immunohistochemie en histologie voor neurobiologisch onderzoek in muizenweefsel. Deze methode maximaliseert de informatie uit één specimen.

De combinatie van Lipophilic kleurstof, In situ Hybridisatie, immunohistochemie, en Histologie

Meer video's verkennen