JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:24 min. • August 31st, 2026
Begin met het oog van een transgene muis die voorheen is geïnjecteerd met een adeno-geassocieerd virus (AAV) dat het gen van belang bevat dat een fluorescent eiwit codeert.
De muis mist een gen dat essentieel is voor het behoud van de integriteit van de inner limiting membrane (ILM), een barrière die de retina scheidt van de glasgroeve.
Het verlies van dit gen bootst retinaal degeneratie na, waardoor het virus dieper in de retinale cellagen kan doordringen.
Geïnfecteerde netvliesscellen tot expressie brengen het gen van belang, waardoor fluorescerende eiwitten worden geproduceerd die ervoor zorgen dat ze fluoresceren.
Dissect nu het oog en verwijder het hoornvlies en de lens.
Scheid voorzichtig de retina van het retinaal pigmentepitheel (RPE) en de sclera, de buitenste laag van het oog.
Dompel het weefsel onder in het fixeeringsmiddel.
Was met fosfaatbuffer om resterende fixatief te verwijderen.
Wanneer er met een confocale microscoop wordt gekeken, geeft fluorescentie in de retinale cellen aan dat de virale penetratie door het beschadigde inner limiting membrane succesvol is verlopen.
Voor retina-flatmounts wordt de dissectie vergemakkelijkt door de geënucleerde ogen 15 tot 30 minuten te f
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's