JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 4:12 min. • August 31st, 2026
Begin met hepatocyten die zijn gekweekt op een met collageen gecoate schaal.
Voeg een transfectiereagens toe dat is gecomplexeerd met twee plasmiden: één met een gemodificeerd Hepatitis B-virus- of HBV-genoom, en de andere die de virale structurele eiwitten codeert.
Incubeer om de opname van het plasmide mogelijk te maken. In de cel worden virale genen tot expressie gebracht om structurele eiwitten en een gemodificeerd HBV-genoom te produceren, die samen assembleren tot recombinante HBV-partikels.
Vervang het medium en incubeer om de productie en vrijgave van virusdeeltjes te ondersteunen.
Oogst het medium en centrifugeer om het debris te pelletteren.
Verzamel het supernatant en filtreer het om resterend debris te verwijderen.
Voeg vervolgens polyethyleenglycol en natriumchloride toe om viruspartikels neer te slaan.
Centrifugeer om de inhoud te pelletiseren. Los de pellet op in buffer en centrifugeer het debris weg. Laag het vervolgens op een sucrosekussen.
Voer ultracentrifugatie uit om virusdeeltjes door het kussentje te sedimenteren.
Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet in medium.
Filtreer de suspensie en bewaar het gezuiverde recombinante HBV bij een lage temperatuur voor
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's