JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 weergaven • 2:29 min • August 31st, 2026
Neem muggenlarven in een vroeg stadium, die vatbaar zijn voor virale infectie.
Breng de larven over naar een bekerglas met gedeïoniseerd water.
Introduce recombinant densovirus, ontwikkeld om een microRNA te coderen dat doelgenen in de larven onderdrukt. Incubeer.
De larven nemen het virus op, dat vervolgens de darm bereikt.
Het ingenomen virus steekt door het darmepitheel en verspreidt zich naar andere weefsels.
Het virus dringt de cellen van de larven binnen via endocytose en laat zijn DNA vrij in de nucleus.
Het virale DNA produceert microRNA's.
In het cytoplasma binden deze microRNA's aan het RNA-induced silencing complex.
Het complex bindt en splitst complementaire target-larvale mRNA's, waardoor expressie wordt voorkomen en gen-silencing optreedt.
Was na incubatie de larven met gedeïoniseerd water om niet-ingeslikte virusdeeltjes te verwijderen.
Breng de larven over naar een nieuwe plaat met voedsel voor het herstel.
De met het virus geïnfecteerde muggenlarven, waarbij het doelgen is uitgeschakeld, zijn klaar voor downstream applicaties.
Was 100 eerste-instar A. albopictus-larven drie keer met gedeïoniseerd water. Breng de larven vervolgens over in een bekerglas met 95 milliliters gedeïoniseerd water.
Voeg vijf milliliter van de rAaeDV-voorraden toe en incubeer de larven gedurende 24 uur bij 28 graden Celsius. Voor een succesvolle infectie van de larven is het essentieel dat de larven 24 tot 36 uur lang worden blootgesteld aan de infectieuze viruspartikels om hoge infectieratio's te garanderen. Was na de incubatie de larven drie keer met gedeïoniseerd water en breng de larven vervolgens terug naar de platen. Voed de larven regelmatig.