JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:30 min. • August 31st, 2026
Begin met muis-intestinale organoïden die gedeeltelijk zijn gedissocieerd om lentivirale transductie te vergemakkelijken.
Neem de lentivirale vectoren in een transductiemedium.
Het lentivirus draagt een gen van belang voor stabiele integratie in het genoom van de gastheer.
Voeg het lentivirus toe aan het well.
Incubeer het mengsel om virale entry mogelijk te maken.
Het virale RNA wordt reverse getranscribeerd naar DNA en integreert in het genoom van de gastheer.
Voeg organoid-medium toe en breng het mengsel over naar een buis.
Centrifugeer om eventuele ongebonden virussen te verwijderen.
Meng het pellet met een basementmembraanmatrix.
Plaats de organoïden in een well en laat ze stollen.
De matrix vormt een netwerk dat organoïden insluit en structurele ondersteuning biedt.
Voeg organoïdenmedium toe, aangevuld met groeibevorderaars om de proliferatie van de organoïden te ondersteunen.
Dit resulteert in knoppende organoïden die het getransduceerde gen bevatten, welke gebruikt kunnen worden voor verdere functionele analyse.
Breng de organoïden in deze laatste kleine hoeveelheid medium over naar een putje van een 48-wells plaat.
Voeg het eerder bereide high-titer lentivirus in transductiemedium toe a
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's