Multiplexe fluorescentiebeeldvorming van virale nucleïnezuren en eiwitten in geïnfecteerde menselijke lymfocyten

Begin met humane lymfocyten geïnfecteerd met HIV-1 op een dekglas dat op een objectglas is gemonteerd.

Deze cellen zijn gehybridiseerd met probes die viraal RNA en proviraal DNA fluorescent labelen.

Incubeer de cellen in een blokkeringsoplossing om aspecifieke antilichaambinding te voorkomen.

Voeg primaire antilichamen toe die gericht zijn tegen het HIV-1 capsid-eiwit.

Incubeer om de primaire antilichamen te laten binden aan het capside-eiwit.

Was de cellen met buffer om ongebonden antilichamen te verwijderen.

Voeg fluorescentielabelige secundaire antilichamen toe die binden aan de primaire antilichamen.

Was de niet-gebonden antilichamen weg.

Voeg een DNA-specifieke kleurstof toe om de celkernen te kleuren en was vervolgens om overtollige kleurstof te verwijderen.

Gebruik multiplexe fluorescentie-imaging om gelijktijdig viraal DNA, RNA, proteïnen en gastheerkernen in verschillende kleuren te detecteren.

Deze visualisatie op enkelcelniveau maakt het mogelijk om verschillende stadia van de virale levenscyclus te bestuderen door gelijktijdige visualisatie van viraal DNA, RNA en eiwitten in geïnfecteerde cellen.

Voor de immunostaining van de proteïnen van belang wordt elk dekglas na de laatste wa