JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:36 min. • August 31st, 2026
Begin met een suspensie die neerslagen van prototype foamy virus of PFV-intasomen, monomerische integrases, DNA-oligomeren en eiwitaggregaten bevat.
PFV-intasomen zijn tetrameren van virale integrases gecomplexeerd met synthetische oligomeren die het virale genomische DNA nabootsen.
Voeg een zoutoplossing toe aan de suspensie en incubeer op ijs. Het zout vermindert de elektrostatische interactie tussen de intasomen, waardoor de neerslagen kunnen oplossen.
Pipette voorzichtig met regelmatige tussenpozen om de solubilisatie van het intasoom te bevorderen.
Centrifugeer om het resterende precipitaat te pelletteren en verzamel het supernatant dat de oplosbare intasomen bevat.
Neem een vooraf geëquilibreerde size-exclusion chromatografiekolom gevuld met cross-linked agarose-beads en breng het supernatant op de kolom aan.
Vanwege hun grote omvang omzeilen eiwitaggregaten en intasomen de poriën van de kralen en elueren ze eerder.
Kleinere monomerische integrases en oligomeren dringen de poriën van de kraaltjes binnen en elueren later.
Verzamel de vroeg eluerende fracties die intasomen bevatten voor verdere downstream-analyse.
Bereid twee wide-bore pipetpunten voor door met een nieuw scheermesje of
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's