Oogsten van hepatitis E-virusdeeltjes uit menselijke leverkankercellen

Begin met een cultuur van humane leverkankercellen die zijn getransfecteerd met hepatitis E-virus (HEV) RNA om viruspartikels te produceren.

Sommige HEV's verkrijgen een endosomale membraan afgeleid van de gastheer en verlaten de cel, terwijl andere in de cel achterblijven als niet-omhulde HEV's.

Om extracellulaire HEV's te oogsten, verzamelt en filtert u het cultuursupernatans om celresten te verwijderen.

Bewaar bij een ultralage temperatuur om de infectiviteit te behouden.

Was de cellen met een buffer om intracellulaire HEV's te oogsten.

Voeg trypsin-EDTA toe om de cellen los te maken en voeg vervolgens medium toe om de enzymatische activiteit te stoppen.

Breng de suspensie over in een buis en centrifugeer.

Gooi het supernatant dat residuele trypsine bevat weg. Resuspendeer het pellet en breng het over naar een buisje.

Bevries de cellen in vloeibare stikstof en ontdooi ze op ijs.

Herhaal de vries-dooi-cycli om de cellen te lyseren, waardoor de virussen vrijkomen.

Centrifugeer het mengsel, verzamel het supernatant dat de virussen bevat en bewaar dit bij een ultralage temperatuur.

Filter op dag zes het supernatant door een gaas van 0,45 micrometer om eventuele celresten te verwijderen en bewa