Sendai-virus-gemedieerde herprogrammering van menselijke bloedcellen tot geïnduceerde pluripotente stamcellen

Neem een cultuur van humane perifere bloedmononucleaire cellen (PBMCs).

Voeg Sendai-virus toe dat de herprogrammerende transcriptiefactoren codeert. Dek de plaat af en verzegel deze.

Centrifugeer om het contact tussen virus en cel te verbeteren en incubeer.

Na de virusfusie zorgt het virale RNA voor de expressie van transcriptiefactoren die cellulaire pluripotentiegenen activeren en lineage-specifieke genen onderdrukken om de herprogrammering te initiëren.

Tijdens dit proces converteert een subpopulatie van getransduceerde PBMCs naar geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) en worden adhesie-eiwitten tot expressie gebracht.

Breng ze over naar een met matrix gecoate well en centrifugeer de cellen. Vervang het supernatant door een groeimedium.

Na incubatie hechten de iPSCs zich aan de matrix, terwijl de getransduceerde niet-adherente PBMC's in suspensie blijven.

Breng de suspensie over naar een gecoate well en centrifugeer deze. Voeg het medium toe aan de oorspronkelijke well en incubeer beide.

De resterende getransduceerde PBMCs starten de herprogrammering, converteren naar iPSCs en hechten aan. Deze stap maximaliseert de retentie van herprogrammeerde cellen.

Vervang het medium dagelijks