JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 3:41 min. • August 31st, 2026
Begin met buizen die menselijke longepitheelcellen bevatten.
Voeg gebiotineerde influenzavirussen toe en incubeer op ijs. De virussen binden aan het celoppervlak zonder geïnternaliseerd te worden.
Centrifugeer om de virusgebonden cellen te scheiden, verwijder het supernatant en resuspendeer.
Voeg in de buis van het beginstijdstip niet-gemarkeerd streptavidine toe, dat bindt aan de gebiotinyleerde virussen en complexen vormt.
Voeg fluorofoor-gelabelde streptavidine toe, die niet bindt aan het streptavidine-biotine-viruscomplex. Was en fixeer de cellen.
Incubeer de buis van het latere tijdstip bij een hogere temperatuur om internalisatie van het virus mogelijk te maken, en plaats deze vervolgens terug op ijs.
Voeg ongelabelde streptavidine en een internalisatie-blokkerend middel toe, dat verdere virale opname voorkomt, en incubeer. Streptavidine bindt oppervlaktegebonden gebiotinyleerde virussen, waarna gewassen wordt.
Fixeer de cellen en voeg een buffer met detergent toe om ze te permeabiliseren.
Was de cellen en voeg fluorofoor-gelabellede streptavidine toe, dat de cellen binnendringt en bindt aan biotine.
Analyseer de monsters via flowcytometrie.
Een hogere fluorescentie op het latere tijds
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's