Beoordeling van faag-gemedieerde remming van bacteriële groei met behulp van optische dichtheidsmetingen

Begin met een multiwellplaat met een seriële verdunningsreeks van een faagsuspensie in voedingsrijke bouillon als behandeling en bouillon zonder faag als controle.

Voeg E. coli toe aan elke put. Meet met een spectrofotometer de basis optische dichtheid (OD) om de initiële bacteriële concentratie vast te leggen.

Incubeer vervolgens de plaat om bacteriële groei en fage-infectie mogelijk te maken.

In de controle gebruiken bacteriën voedingsstoffen en prolifereren ze, waardoor de OD toeneemt.

Bij de behandeling binden fagen zich aan bacteriële oppervlaktereceptoren en injecteren zij hun genomen in het cytoplasma.

Met behulp van de machinerie van de gastheercel repliceert het virale genoom en worden virale eiwitten geproduceerd, die samen nieuwe virusdeeltjes vormen. Deze deeltjes lyseren de cel, waardoor het nageslacht vrijkomt.

Meet de OD met tussenpozen om de bacteriële groei te vergelijken.

Controleputjes vertonen een progressieve toename van de OD, terwijl met fagen behandelde putjes lagere OD-waarden vertonen, waarbij de reducties groter zijn bij hogere fagenconcentraties.

Dit helpt bij het bepalen van de faagconcentratie die nodig is voor maximale remming van de bacteriële groei.

Begin me