JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:48 min. • August 31st, 2026
Neem een mammaliale celcultuur in de stationaire fase met minimale DNA-replicatie en verzamel het geconditioneerde medium.
Voeg herpes simplex virus (HSV) toe en incubeer met af en toe schudden om virale aanhechting mogelijk te maken. Was om het ongebonden virus te verwijderen en herstel het geconditioneerde medium.
Na incubatie fuseert het virus met het gastheermembraan, waarbij het nucleocapsid in het cytoplasma wordt vrijgegeven.
Het viraal dsDNA komt de kern binnen, circulariseert en tot expressie viraal eiwitten voor viraal DNA-replicatie.
De virale en gastheerproteïnen ontwinden het viraal DNA en synthetiseren een RNA-primer. Vervolgens bindt het virale DNA-polymerasecomplex en verlengt het de primer voor DNA-synthese.
Terwijl de replicatie vordert, wordt een nucleoside-analoog aan de cultuur toegevoegd. Deze dringt de cellen binnen en wordt omgezet in een trifosfaatvorm.
Omdat de DNA-replicatie van de gastheer minimaal is, wordt het analoog bij voorkeur ingebouwd in replicerend viraal DNA, waardoor de virale genomen worden gelabeld.
De gelabelde virale genomen zijn klaar voor verdere proteomische analyse van de geassocieerde eiwitten.
Begin deze procedure met het kweken van MRC-5-ce
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's