JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 5:13 min. • August 31st, 2026
Neem de celkernen die viraal genoom bevatten, gelabeld met alkyn-gemodificeerde nucleotiden.
Suspendeer de kernen in een mengsel van biotin-azide en koperionen en incubeer.
Het koperion helpt bij de covalente binding van de azide- en de alkyngroep.
Centrifugeer en verwijder de supernatant.
Resuspendeer in buffer, breng over en centrifugeer om een pellet te vormen.
Vries het pellet snel in en ontdooi het vervolgens om de lysis te vergemakkelijken.
Resuspendeer en sonicizeer om de kernen te lyseren.
Centrifugeer en verzamel het supernatant dat de eiwit-viraal DNA-complexen bevat.
Filtreer het supernatant om contaminanten te verwijderen.
Verdun het filtraat.
Voeg streptavidine-gecoate magnetische beads toe en incubeer om de binding met gebiotinyleerde eiwit-DNA-complexen te vergemakkelijken.
Pas een magnetisch veld toe om de kraaltjes te verzamelen en was deze om contaminanten te verwijderen.
Herhaal het wassen.
Voeg een elutiebuffer toe en verhit om de eiwitten te scheiden en te denatureren.
Scheid de kraaltjes en verzamel het eluaat.
Vries de geïsoleerde eiwitten snel in. Bewaar ze bij ultralage temperaturen voor verdere analyse.
Nadat de PBS volledig is verwijderd, wordt het nucleaire pellet opnie
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's