Isolatie van endogene virussen uit wilde Drosophila met behulp van gemanipuleerde permissieve cellijnen
JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 1:32 min. • October 29th, 2026
Begin met een buisje met genarceerde volwassen Drosophila van hetzelfde geslacht en dezelfde soort.
Voeg een buffer toe en homogeniseer dit om endogene viruspopulaties en bacteriën vrij te maken.
Centrifugeer het homogenaat en breng vervolgens het supernatant door een membraan via centrifugatie om bacteriën en debris te verwijderen.
Breng het filtraat over naar een multi-wellplaat met gemodificeerde Drosophila -celculturen die permissief zijn voor RNA-virussen en incubeer deze.
De virussen dringen de gastheercel binnen via receptor-gemedieerde endocytose.
Eenmaal binnen repliceert het virale genoom, waarbij dubbelstrengs RNA (dsRNA) -intermediaten worden geproduceerd.
De gastheercellen brengen een suppressor-eiwit tot expressie dat bindt aan het dsRNA, waardoor degradatie door Dicer, het afweerenzym van de gastheer, wordt voorkomen.
Dit maakt virale RNA-synthese en virale eiwitproductie mogelijk, wat virale replicatie en amplificatie bevordert.
Hoge virale ladingen belemmeren de groei van de gastheercel en veroorzaken cytopathische effecten.
Centrifugeer de plaat kortstondig.
Verzamel het supernatant dat virale populaties bevat en bewaar dit bij een lage temperatuur voor verdere analyse.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's