JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 4:35 min. • August 31st, 2026
Begin met mammalische cellen die zijn geïnfecteerd met een adenovirus.
Voer herhaalde vries-dooi-cycli uit om de cellen te lyseren en de virionen vrij te maken.
Centrifugeer het lysaat om het debris te pelletteren. Verzamel het supernatant dat de virusdeeltjes bevat.
Breng het virale supernatant aan op een stapsgewijze cesiumchloridegradiënt voor scheiding op basis van dichtheid.
Ultracentrifuge om de virale deeltjes te laten migreren op basis van hun drijfvermogensdichtheden.
Intacte virionen die het volledige adenovirale genoom bevatten zijn dichter vanwege het verpakte DNA en bezinken in een lagere band, terwijl lichtere, lege capsiden en debris in de bovenste lagen achterblijven.
Verwijder de bovenste lagen. Verzamel de onderste band met genoombevattende virionen.
Resuspendeer de virionen in cesiumchloride met een uniforme dichtheid en centrifugeer opnieuw in de ultracentrifuge om de scheiding te verfijnen en de volledige partikels te concentreren.
Verwijder de bovenste lagen en vang de onderste band op.
Dialyse het monster om het cesiumchloride te verwijderen.
De hoogzuivere, genoombevattende adenovirale vectoren zijn nu gereed voor verdere toepassingen.
Om het virale lysaat voor cesiumc
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's