Virale groei in humane nasale epitheelcellen gekweekt op een lucht-vloeistofgrensvlak

Begin met menselijke nasale epitheelcellen bedekt met mucus, gekweekt op een transwell-insert in een multi-well plaat.

De basale zijde van de kweek komt in contact met medium, terwijl het apicale oppervlak is blootgesteld aan lucht, wat de lucht-vloeistofinterface van de neusholte simuleert.

Was de cultuur met buffer om de slijmlaag te verwijderen.

Voeg het coronavirus, gesuspendeerd in serumvrij medium, toe aan de cultuur.

Incubeer de plaat met af en toe schudden om de virale adsorptie te waarborgen.

Verwijder het virale inoculum en was met buffer om ongebonden virussen te verwijderen.

Verwijder de insert en vul de put opnieuw met vers medium.

Incubeer de plaat om virale infectie mogelijk te maken.

Het coronavirus bindt aan de receptor op het celoppervlak, komt de cel binnen via endocytose en laat zijn genoom vrij in het cytoplasma.

Het virale genoom repliceert en produceert eiwitten, die samen nieuwe virussen vormen.

Nieuwe virussen worden apicaal vrijgegeven, verspreiden zich om nabijgelegen cellen te infecteren en versterken de virale groei.

Kweek en differentieer de nasale lucht-vloeistofinterface, of ALI-culturen, in transwells met een basale en een apicale kamer. Expandeer de gedissoci