JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:44 min. • August 31st, 2026
Begin met een mengsel van plasmiden gesuspendeerd in een voedingsmedium.
Het eerste plasmide draagt een recombinant adeno-geassocieerd virus (AAV) genoom dat het gen van interesse codeert.
Het tweede plasmide codeert voor de Rep- en Cap-eiwitten.
Het derde plasmide codeert voor helper-eiwitten.
Voeg een transfectiemiddel toe aan de plasmidoplossing. Meng goed en incubeer.
Het positief geladen transfectiemiddel bindt aan het negatief geladen plasmid DNA, waardoor complexen worden gevormd.
Voeg de complexen toe aan een monolaag van zoogdiercellen. Incubeer.
De complexen dringen de cellen binnen via endocytose.
Binnen de cellen stimuleren de in het plasmide gecodeerde genen de expressie van virale eiwitten.
Het Rep-eiwit repliceert het virale genoom, terwijl de Cap-eiwitten de kapsidewanden vormen.
Het Rep-eiwit verpakt, samen met helper-eiwitten, het gerepliceerde virale genoom in capsiden, waardoor volledige AAV-partikels worden gevormd.
De recombinante AAV-vectoren die het gen van belang dragen, zijn gereed voor toepassingen in genoverdracht.
Nadat de rAAV9-constructen zijn gegenereerd en de HEK293-cellen volgens het tekstprotocol zijn gekweekt, combineert u voor de transfectie van de cellen o
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's