Zuivering van recombinante viruspartikels uit getransfecteerde menselijke niercellen

Begin met een cellysaat dat cellulair DNA bevat dat is geaggregeerd met cellulaire eiwitten en virale deeltjes.

Voeg magnesiumionen toe, gevolgd door een nuclease, om de enzymatische afbraak van cellulair DNA te activeren en DNA-eiwitaggregaten op te breken.

Centrifugeer om het residu te scheiden en verzamel het supernatant dat de viruspartikels bevat.

Breng het supernatant voorzichtig aan op een discontinu iodixanolgradiënt met concentraties die van boven naar beneden toenemen, en vul de buis vervolgens aan met buffer.

Ultracentrifuge om de componenten op basis van dichtheid te scheiden. Virusdeeltjes hopen zich op bij de interface tussen de lagen met hoge en medium dichtheid.

Plaats een naald bij deze interface en verzamel de virusdeeltjes in een buis.

Voeg een buffer toe die stabiliserende componenten bevat, wat aggregatie van virale deeltjes voorkomt.

Overbreng vervolgens de oplossing naar een buis met een membraanfilter.

Centrifugeer om de virale deeltjes boven het filter te concentreren.

Voeg de met stabiliseringsmiddel aangevulde buffer toe en centrifugeer opnieuw om gezuiverde virale deeltjes te verkrijgen.

Om de getransfecteerde cellen te oogsten, worden de cellen losgemaakt en gesu