Immortalisering van endotheelcellen via retrovirale transductie van virale oncogenen

Neem een medium dat retrovirale particles bevat die virale oncogenen en een antibioticaresistentiegen coderen.

Centrifugeer het medium om celresten te verwijderen.

Verzamel het supernatant dat de virale deeltjes bevat en breng dit aan over een cultuur van endotheelcellen.

Incubeer om virale entry mogelijk te maken.

Het virale RNA wordt reverse getranscribeerd naar DNA, dat integreert in het genoom van de gastheer.

Het antibioticumresistentiegen produceert een resistentie-eiwit. De oncogenen produceren eiwitten die binden aan tumoronderdrukkende eiwitten die de celdeling controleren en deze inactiveren, waardoor de levensduur van de cel wordt verlengd.

Vervang het medium door vers medium.

Incubeer opnieuw om een stabiele integratie van het viraal DNA te waarborgen.

Verwijder het medium en was de cellen.

Voeg een enzymatische dissociatie-oplossing toe om de cellen los te maken.

Breng de celsuspensie over, centrifugeer en verwijder het supernatant.

Resuspendeer de pellet en breng deze over naar een kolf.

Voeg een antibioticum toe aan het medium.

Alleen cellen die het antibioticaresistentie-eiwit tot expressie brengen overleven, waardoor cellen die zijn geïmmortaliseerd door virale oncogene eiwitte