Het meten van spontane faaginductie in lysogene bacteriën in de loop van de tijd

Neem een overnight-cultuur van een lysogene bacterie, waarbij de meeste cellen latent fagen-DNA bevatten dat is geïntegreerd in hun genoom.

Inoculeer het in vers medium en incubeer.

Sommige bacteriën ondergaan spontane inductie en gaan over in de lytische cyclus, waarbij het fage-DNA wordt uitgesneden, gerepliceerd en virale eiwitten worden geproduceerd.

Vers geassembleerde infectieuze fagen komen vrij via cellyse.

Verzamel cultuurmonsters op gedefinieerde intervallen.

Om levensvatbare, niet-geïnduceerde lysogenen te tellen, worden seriële verdunningen van elk monster op een agarplaat geplaatst en geïncubeerd.

Tel de kolonies om de colony-forming units (CFU's) te berekenen.

Om infectieuze fagen te tellen, brengt u dezelfde verdunningen aan op een antibioticaplaat met agar die vooraf is geënt met antibioticaresistente indicatorgastcellen. Aangezien de lysogenen gevoelig zijn voor antibiotica, kunnen alleen resistente gasten groeien.

Fagen infecteren en lyseren cellen, waarbij heldere plaques worden gevormd.

Tel de plaques om de plaque-vormende eenheden (PFU's) te berekenen. Lagere PFU's duiden op minder spontane inductiegebeurtenissen.

Zet de CFU's en PFU's uit tegen de tijd. Tijdens de vroeg