JoVE Encyclopedie van Experimenten
Microbiologie
0 weergaven • 2:52 min. • September 30th, 2026
Begin met een bacteriële cultuur die een geïntegreerd profage-genoom draagt dat wordt onderdrukt door een fage-repressoreiwit, waardoor een slapende lysogene fase wordt gehandhaafd.
Voeg een inducer toe en incubeer onder schudding om cellulaire stress te triggeren.
Cellulaire stress induceert autocleavage van het repressorproteïne, waardoor de profage kan overgaan van lysogenie naar lytische replicatie.
Het profaag-DNA exciseert uit het bacteriële genoom en transcribeert opeenvolgend vroege regulatoire genen, middelste DNA-replicatiegenen en late structurele genen en lysisgenen.
Breng de cultuur over naar een groot volume medium om de induceerder te verdunnen en incubeer deze om herstel van de cellen mogelijk te maken.
Voeg op vaste tijdsintervallen een stopoplossing toe om de transcriptie te stoppen en het RNA-profiel in de bacteriële cellen te behouden.
Centrifugeer de cultuur en verwijder het supernatant. Resuspendeer de cellen, breng de suspensie over naar een klein buisje en centrifugeer.
Verwijder het supernatant en vries het pellet direct snel in om de integriteit van het RNA te behouden.
Voeg tot slot een RNA-extractiereagens toe en homogeniseer om de cellen te lyseren. Het monster
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's